北京市東城區(qū)食品藥品監(jiān)控中心(100053)仵淑紅 郭棟 孟大均
蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露,與自身分泌物結合后,經充分釀造而成的天然物質。5-羥甲基糠醛是蜂蜜品質的重要指標,新鮮純正的蜂蜜不含5-羥甲基糠醛,當蜂蜜中5-羥甲基糠醛含量高時,往往標志著蜂蜜純度不夠或貯存環(huán)境不合理或貯存時間的過長,蜂蜜中的六碳糖,主要是葡萄糖和果糖,在酸性條件下就會部分脫水生成5-羥甲基糠醛。此外,當蜂蜜中摻入轉化糖等物質或摻假,蜂蜜中也容易產生5-羥甲基糠醛。
世界各國對蜂蜜中的5-羥甲基糠醛作了限量規(guī)定,一般不得超過40ppm。我國國家標準GB/T18796-2002規(guī)定,合格蜂蜜中5-羥甲基糠醛含量要求小于40mg/kg,優(yōu)等級蜂蜜中5-羥甲基糠醛含量要求小于20mg/kg。
蜂蜜中5-羥甲基糠醛檢測方案原理:蜂蜜樣品中的5-羥甲基糠醛經高效液相反相色譜柱分離,用液相色譜儀紫外檢測器檢測。用標準曲線外標法定量。
1.1 儀器 島津高效液相色譜儀,Mettler Toledo分析天平。
1.2 試劑 水:GB/T6682規(guī)定用一級水;甲醇:色譜純;10%甲醇溶液。標準物質:5-羥甲基糠醛(批號:111626-201509,含量:97.8%,來源:中國食品藥品檢定研究院)。
1.3 樣品 抽檢的市場銷售115批次蜂蜜和蜂蜜膏,均為超市正常銷售的正規(guī)產品。
2.1 色譜條件 色譜柱:WatesC185μm 250mm×4.6mm;流動相:甲醇∶水(10∶90);流速:1.0mL/min;檢測波長:285nm;柱溫:30.0℃;進樣量:10μL。
2.2 標準儲備液的制備 精密稱取5-羥甲基糠醛適量,加甲10ml溶解,用水稀釋至100ml,配成0.20mg/mL的標準儲備液。
附圖1 七個不同溶度的5-羥甲基糠醛的高效液相色譜峰。注:8#1為空白
附圖2 七個不同溶度的5-羥甲基糠醛的標準曲線
附圖3 抽檢的市場銷售115批次蜂蜜和蜂蜜膏的測定結果
附表 5-羥甲基糠醛的含量超出標準值的樣品
2.3 標準工作溶液的制備 分別精密吸取儲備液0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0和5.0ml分別置100ml量瓶中,用10%甲醇溶液稀釋至刻度,配成0.10μg/mL,0.20μg/mL,1.0μg/mL,2.0μg/mL,4.0μg/mL,6.0μg/mL,10.0μg/mL標準工作溶液。
2.4 標準工作曲線 將0.10μg/mL,0.20μg/mL,1.0μg/mL,2.0μg/mL,4.0μg/mL,6.0μg/mL,10.0μg/mL七個不同溶度標準工作溶液注入高效液相色譜儀,以峰面積對相應濃度繪制標準工作曲線,(以溶度對峰面積做線性回歸,回歸方程y=ax+b,r=0.9999,RSD=1.4%,n=7)樣品溶液中羥甲基糠醛的響應值應在儀器的線性范圍內(詳見附圖1、附圖2)。
2.5 樣品的測定 樣品溶液的制備:將試驗樣品攪拌均勻,稱取10g試樣,精確至0.01g,置于100ml燒杯中,加甲醇10ml攪拌溶解,轉移至100ml容量瓶中,用水稀釋至刻度,混勻,用0.45μm濾膜過濾,取濾液10μl注入高效液相色譜儀。對同一樣品進行平行試驗測定,以10%甲醇溶液為空白溶液做空白試驗。
2.6 加樣回收率試驗 稱取10g試樣,精確至0.01g,置于100ml燒杯中,添加1.0ml的5-羥甲基糠醛標準儲備溶液,加9.9mL甲醇溶解,轉移至100ml容量瓶中,用水稀釋至刻度,混勻,用0.45μm濾膜過濾,濾液用液相色譜儀紫外檢測器測定。平均回收率95.8%(n=5)。
2.7 測定結果(詳見附圖3、附表)
X-樣品中甲基糠醛含量(mg/kg);C-從標準曲線上得到的被測組分濃度(μg/ml);V-定容體積(ml);m-樣品溶液所代表樣品的質量(g)
樣品的最終結果為兩次平行樣的平均值×97.8%,計算結果已扣除空白值。
115批樣品中,5-羥甲基糠醛超出標準值共42批次,在這42批次中約40%為添加了其他物質的蜂和蜂蜜膏,此外,60%超出標準檢測值天然蜂蜜的保存期有80%超過10個月。
天然蜂蜜是不含有5-羥甲基糠醛的,蜂蜜中含有5-羥甲基糠醛的原因有:①酸度和溫度;酸度越大,溫度越高,蜂蜜中5-羥甲基糠醛生成的速度就越快,含量就越高。②蜂蜜的儲存時間;儲存時間越長的蜂蜜5-羥甲基糠醛含量就越高。③蜂蜜中加入其他物質;如加入麥芽糖、蔗糖或添加微量元素或其他中草藥植物的蜂蜜制品,也會促使蜂蜜中5-羥甲基糠醛含量大幅度增加。因此,蜂蜜中5-羥甲基糠醛的含量是驗證評價蜂蜜質量的重要指標。