文長(zhǎng)江　曾沁

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·論著·

結(jié)直腸黏膜光鏡下炎癥表現(xiàn)及NF-κB、COX-2的表達(dá)與結(jié)直腸腫瘤發(fā)病的相關(guān)性分析

文長(zhǎng)江曾沁

目的觀察結(jié)直腸黏膜光鏡下炎癥表現(xiàn)，探討細(xì)胞核因子(NF-κB)、環(huán)氧合酶(COX-2)的表達(dá)與結(jié)直腸腫瘤發(fā)病的相關(guān)性。方法選取2013年7月至2014年7月收治的30例結(jié)直腸癌患者、30例結(jié)直腸腺瘤患者、30例健康體檢者，取腫瘤組織及距離其5 cm處正常黏膜，對(duì)照組取正常黏膜進(jìn)行檢查，利用顯微鏡觀察組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度、腺體形態(tài)等，并對(duì)NF-κB、COX-2表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果結(jié)直腸癌、癌旁黏膜、直腸腺瘤、腺瘤旁黏膜淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度較正常黏膜更高(P<0.05)；結(jié)直腸癌旁黏膜腺體變異率高于腺瘤旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜(P<0.05)；結(jié)直腸癌、結(jié)直腸腺瘤患者NF-κB、COX-2表達(dá)水平高于正常黏膜(P<0.05)。結(jié)論結(jié)直腸癌、腺瘤患者，結(jié)直腸黏膜存在炎癥表現(xiàn)，主要表現(xiàn)為腺體變異、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等，在結(jié)直腸癌、腺瘤組織中，NF-κB、COX-2表達(dá)水平較高，有利于為疾病的診斷、治療提供專(zhuān)業(yè)參考。

結(jié)直腸腫瘤；結(jié)直腸腺瘤；細(xì)胞核因子；環(huán)氧合酶

結(jié)直腸癌是臨床常見(jiàn)的消化系統(tǒng)腫瘤，其發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)較為漫長(zhǎng)的過(guò)程，也是多種因素長(zhǎng)期作用的結(jié)果，主要包括遺傳和環(huán)境因素[1]，環(huán)境因素包括肥胖、腸病、吸煙、糖尿病、高脂血癥等。有研究顯示[2]，結(jié)直腸腫瘤發(fā)病前及發(fā)展過(guò)程中存在一些炎癥因素，結(jié)直腸黏膜組織學(xué)改變，同樣可誘發(fā)腫瘤。目前臨床對(duì)這些炎癥因素對(duì)結(jié)直腸腫瘤發(fā)病的誘發(fā)機(jī)制研究報(bào)道甚少，其相互關(guān)系未完全闡明。本文借助顯微鏡觀察結(jié)直腸黏膜下炎癥表現(xiàn)，并分析細(xì)胞核因子(NF-κB)、環(huán)氧合酶(COX-2)的表達(dá)與結(jié)直腸腫瘤發(fā)病的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料本組90例患者于2013年7月至2014年7月在我院接受結(jié)直腸鏡檢查，根據(jù)檢查結(jié)果，患者分為健康體檢者30例、結(jié)直腸癌30例、結(jié)直腸腺瘤30例。其中正常組男19例，女11例；年齡28～76歲，平均年齡(60.3±4.3)歲；結(jié)直腸癌組男18例，女12例;年齡30～79歲，平均年齡(61.0±4.5)歲；結(jié)直腸腺瘤組男20例，女10例；年齡29～78歲，平均年齡(60.9±4.4)歲。3組對(duì)象一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：經(jīng)病理診斷為結(jié)直腸癌、結(jié)直腸腺瘤或正常者，依從性高，了解研究?jī)?nèi)容，自愿簽署知情同意書(shū)。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)：急性慢性腸炎癥病史、放射性結(jié)腸炎病史、合并身體其他部位急性慢性炎癥、其他惡性腫瘤者；長(zhǎng)期服用非甾體類(lèi)抗炎藥者；拒絕簽署知情同意書(shū)者。

1.3方法

1.3.1全部患者均接受電子結(jié)腸鏡檢查，一旦發(fā)現(xiàn)腸道腫瘤，分別取腫瘤組織、距腫瘤邊緣5 cm腫瘤旁黏膜標(biāo)本，部分結(jié)直腸癌患者術(shù)后取同部位標(biāo)本[4]；如果檢查結(jié)果為陰性，在升結(jié)腸、降結(jié)腸處活檢2塊。

1.3.2免疫組化:采用免疫組化染色SP法對(duì)NF-κB、COX-2進(jìn)行檢測(cè)，由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供COX-2、NF-κB鼠抗人單克隆抗體、SP試劑盒。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟嚴(yán)格進(jìn)行[5]。

1.4判斷淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度、腸腺變異率、NF-κB、COX-2表達(dá)水平在顯微鏡下觀察各種標(biāo)本HE染色切片，記錄低倍鏡下組織腺體有無(wú)變異，如腸腺體大小、形狀、分支等。在低倍鏡下炎性細(xì)胞浸潤(rùn)最嚴(yán)重的區(qū)域，換高倍鏡觀察，隨機(jī)取3個(gè)視野觀察淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，取平均值。適當(dāng)修改慢性胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定1級(jí)：淋巴細(xì)胞數(shù)<10；2級(jí)：淋巴細(xì)胞數(shù)10～19；3級(jí)：淋巴細(xì)胞數(shù)>20或淋巴細(xì)胞局灶性浸潤(rùn)；4級(jí)：彌漫性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。在顯微鏡下觀察免疫組化染色結(jié)果，COX-2為胞漿顯色，NF-κB為胞核或胞漿顯色。采用半定量法，對(duì)細(xì)胞染色結(jié)果進(jìn)行判斷，0分：細(xì)胞染色陽(yáng)性率0～4%；1分：細(xì)胞染色陽(yáng)性率5%～24%；2分：細(xì)胞染色陽(yáng)性率25%～49%；3分：細(xì)胞染色陽(yáng)性率50%～74%；細(xì)胞染色陽(yáng)性率75%～100%；染色強(qiáng)度分為陰性0分、淡黃色1分；棕黃色2分；棕黑色3分，以?xún)烧叻e評(píng)價(jià)蛋白表達(dá)水平，評(píng)分范圍在0～12分。一張切片組織1/2細(xì)胞為棕黃色，1/4為淡黃色，1/4未顯色，評(píng)分為：3×2+2×1+2×0=8分。陰性(-)：0～1分；弱陽(yáng)性(+)：2～3分；中度陽(yáng)性(++)：4～6分；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：>7分[6-8]。

2　結(jié)果

2.1不同部位淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度比較結(jié)直腸癌、癌旁黏膜淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度高于正常黏膜(P<0.05)，結(jié)直腸腺瘤、腺瘤旁黏膜淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度高于正常黏膜(P<0.05)，結(jié)直腸癌、癌旁黏膜及結(jié)直腸腺瘤、腺瘤旁黏膜浸潤(rùn)程度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　不同部位淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度比較　n=30,例(%)

注：與正常結(jié)腸黏膜比較，*P<0.05

2.2結(jié)直腸癌旁黏膜、結(jié)直腸腺瘤旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜腺體變異率比較結(jié)直腸癌旁黏膜腺體變異率較結(jié)直腸腺瘤旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜明顯較高(P<0.05)；正常結(jié)腸黏膜和結(jié)直腸腺瘤旁黏膜變異率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　正常結(jié)腸黏膜、結(jié)直腸癌旁黏膜、腺瘤旁黏膜腺體變異率比較

注：與結(jié)直腸癌旁黏膜比較，*P<0.05

2.3不同部位NF-κB表達(dá)水平比較結(jié)直腸癌患者NF-κB表達(dá)水平相比癌旁黏膜、結(jié)直腸腺瘤、腺瘤旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜明顯提高，結(jié)直腸腺瘤NF-κB表達(dá)水平較腺瘤旁黏膜、正常黏膜組織增高(P<0.05)；結(jié)直腸癌旁黏膜、腺瘤旁黏膜NF-κB表達(dá)水平與正常黏膜比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3　不同部位NF-κB表達(dá)水平比較　n=30,例(%)

注：與結(jié)直腸癌組比較，*P<0.05

2.4不同部位COX-2表達(dá)水平比較結(jié)直腸癌患者COX-2表達(dá)水平相比于癌旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜顯著提高，結(jié)直腸腺瘤COX-2表達(dá)水平較腺瘤旁黏膜、正常黏膜組織增高(P<0.05)，結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤COX-2表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)直腸癌旁黏膜和腺瘤旁黏膜與正常黏膜比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

3　討論

近年來(lái)，人們生活水平不斷提高，生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了較大的變化，消化系統(tǒng)疾病患病人數(shù)越來(lái)越多，對(duì)人們生活質(zhì)量、身體健康造成嚴(yán)重的影響。結(jié)直腸腫瘤是一種常見(jiàn)的消化道腫瘤，在歐美國(guó)家結(jié)直腸腫瘤死亡率居于第二位[9]，我國(guó)結(jié)直腸腫瘤發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢(shì)，需引起臨床高度重視。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為結(jié)直腸癌發(fā)生序列為“正常上皮-增生性上皮-腺瘤-癌”，結(jié)直腸腺瘤多部位發(fā)病較為常見(jiàn)，腺瘤切除5年內(nèi)復(fù)發(fā)率高達(dá)40%左右[10]，與其復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素、前次腺瘤大小、數(shù)目有關(guān)，提示結(jié)直腸腺瘤具有多發(fā)性、易復(fù)發(fā)性，也表明結(jié)直腸腫瘤患者正常結(jié)直腸黏膜可能處于癌前病變狀態(tài)。

表4　不同部位COX-2表達(dá)水平比較　n=30,例(%)

大腸病變直觀表現(xiàn)為結(jié)腸黏膜形態(tài)學(xué)變化，正常結(jié)腸上皮細(xì)胞包括吸收細(xì)胞和杯狀細(xì)胞，腺體大小均勻，多為圓形，整齊排列，黏膜固有層有少量炎癥細(xì)胞分散[11]。目前結(jié)直腸腫瘤相關(guān)炎癥筆者所見(jiàn)臨床報(bào)道甚少，缺乏統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)。本文研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌旁黏膜及腺瘤旁黏膜腺體變異率高于正常組，但正常結(jié)腸黏膜與腺瘤旁黏膜比較無(wú)差異(P>0.05)，可能與研究樣本量少有關(guān)。同時(shí)結(jié)直腸癌、腺瘤及其旁黏膜淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度較正常結(jié)腸黏膜更高，說(shuō)明結(jié)直腸癌、癌前病變患者正常黏膜中，有慢性炎癥因子存在[12]。

NF-κB是腫瘤與炎癥的重要紐帶[13]，在胞漿中與抑制因子-IB結(jié)合，處于抑制狀態(tài)，一旦受到細(xì)胞外刺激時(shí)活化，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子表達(dá)，促進(jìn)炎性反應(yīng)、腫瘤形成。本組結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌患者NF-κB表達(dá)水平高于癌旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜，腺瘤NF-κB表達(dá)水平也高于腺瘤旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜，提示NF-κB在正常黏膜-癌前病變-癌癥發(fā)展中具有重要的作用。

COX-2是一種炎癥過(guò)程的誘導(dǎo)酶[14]，也是花生四烯酸環(huán)氧煤代謝途徑的限速酶，通常在組織細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，腫瘤細(xì)胞中表達(dá)最高，其次是炎癥細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、損傷的成纖維細(xì)胞。在外界刺激下，如急性或慢性炎癥刺激下，可誘導(dǎo)COX-2大量表達(dá)，加快組織炎性反應(yīng)。COX-2過(guò)表達(dá)機(jī)制尚未完全闡明，可能與多種細(xì)胞因子有關(guān)，如IL-6、NF-κB等。結(jié)果顯示結(jié)直腸癌COX-2表達(dá)水平高于癌旁黏膜、正常結(jié)腸黏膜，腺瘤高于腺瘤旁黏膜和正常結(jié)腸黏膜，證實(shí)了COX-2參與了結(jié)直腸癌發(fā)病過(guò)程。

在本研究中，并未發(fā)現(xiàn)COX-2、NF-κB在癌旁黏膜、腺瘤旁黏膜表達(dá)與正常黏膜的差異，可能與樣本量少、試驗(yàn)條件有關(guān)[15]。

綜上所述，結(jié)直腸癌患者正常黏膜存在慢性炎癥，表現(xiàn)為腺體變異、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等，NF-κB、COX-2參與了癌癥發(fā)病過(guò)程，為結(jié)直腸癌早期診斷提出了新的認(rèn)識(shí)，有利于疾病診斷、治療及預(yù)后。

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Inflammatory characteristics of colorectal mucous membrane under light microscope and correlation between the expressions of NF-κB,COX-2 and pathogenesis of colorectal cancer

WENChangjiang,ZENGQin.

DepartmentofPathology,TCMHospitalofShehongCounty,Sichuan,Shehong629200,China

ObjectiveTo observe the inflammatory characteristics of colorectal mucous membrane under light microscope,and to investigate the correlation between the expressions of nuclear factor (NF-κB), cyclooxygenase (COX-2) and pathogenesis of colorectal cancer.MethodsThirty patients with colorectal cancer,30 patients with colorectal adenoma who were admitted and treated in our hospital from July 2013 to July 2014 were enrolled in the study, moreover,the other 30 healthy subjects were served as control group. The tumor tissues and the normal tissues 5cm apart from tumor tissues were taken out as specimens,and the normal mucous membrane tissues were taken out in control group to be examined under light microscope for the lymph cell infiltration and gland morphous.Moreover the expression levels of NF-κB and COX-2 were detected and compared among three groups.ResultsThe lymph cell infiltration degree in colorectal cancer, mucous membrane tissues beside cancer,rectal adenoma and adjacent tissues was significantly greater than that in normal mucous membrane tissues (P<0.05). The mutation rate of gland and mucous membrane beside colorectal cancer was significantly higher than that in adenoma adjacent mucous membrane and normal colon mucous membrane (P<0.05). The expression levels of NF-κB and COX-2 in colorectal cancer and colorectal adenoma were significantly higher than those in normal mucous membrane (P<0.05).ConclusionThe inflammatory manifestations exist in colorectal cancer, adenoma, colorectal mucous membrane,which are mainly gland mutant and lymphocyte infiltration.Moreover the expression levels of NF-κB,COX-2 in colorectal cancer and adenoma tissues are higher,which can provide reference for the diagnosis and treatment of the diseases.

colorectal neoplasms; colorectal adenoma; cell nuclear factor; cyclooxygenase

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.19.014

629200四川省射洪縣中醫(yī)院病理科

R 735.37

A

1002-7386(2016)19-2936-03

2016-03-01)