劉麗花　翟來(lái)超

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【實(shí)驗(yàn)研究】

正交試驗(yàn)優(yōu)選清寧丸的提取工藝

劉麗花翟來(lái)超

目的優(yōu)選清寧丸的提取工藝。方法采用正交試驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，以大黃素、大黃酚和干膏量為指標(biāo)考察加水量、提取次數(shù)、加水倍數(shù)對(duì)提取工藝的影響，最終確定最佳水提工藝。結(jié)果最佳提取工藝為加10倍量水，提取30min，提取2次。結(jié)論為提取工藝的確定和下一步的研制工作提供了科學(xué)依據(jù)。

清寧丸；正交試驗(yàn)；提取工藝

本制劑為《中國(guó)藥典》2010年版第一部收載至品種。由大黃、綠豆、車前草、炒白術(shù)、黑豆、半夏(制)等組成，諸藥相伍，清熱瀉火，通便。用于火毒內(nèi)蘊(yùn)所致的咽喉腫痛，口舌生瘡，頭暈耳鳴，目赤牙痛，腹中脹滿，大便秘結(jié)[1]。

1　試驗(yàn)材料與儀器

1.1儀器日本島津LC-2010CHT高效液相色譜儀；SPD-M10AVP二極管陣列檢測(cè)器、CTO-10ASVP柱溫箱，Shimadzu CLASS-VP色譜工作站，Sartorius CP225D分析天平。

1.2試藥藥材飲片購(gòu)于禹州藥王藥業(yè)，經(jīng)鑒別均符合2010版藥典規(guī)定。大黃素對(duì)照品(批號(hào)110756-200110)、大黃酚對(duì)照品(批號(hào)110796-200716)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。所用乙腈、甲醇為色譜純，水為自制純水，其他為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[2]大黃、綠豆、車前草、炒白術(shù)、黑豆、半夏(制)以水回流提取，采用正交試驗(yàn)考察加水量(A)提取時(shí)間(B)和提取次數(shù)(C)。正交表見表1。

2.2大黃素的含量測(cè)定方法

2.2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：C/N 5020-39103 S/N.OJ8701-16柱(5(m)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸(85:15)；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；保留時(shí)間15min，進(jìn)樣量：5μL見圖1。

表1　正交試驗(yàn)水平表

圖1　大黃素、大黃酚液相色譜圖

2.2.2精密稱取大黃素對(duì)照品1.39mg，大黃酚對(duì)照品2.78mg置50ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻。精密吸取5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻(每1mL含大黃素0.00556mg，含大黃酚0.01112mg)，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3線性關(guān)系考察精密吸取對(duì)照品溶液(大黃素0.00556mg·mL-1，含大黃酚0.01112 mg·mL-1)2，4，5，6，8，10μL，分別注入液相色譜儀，按上述實(shí)驗(yàn)條件及方法進(jìn)行測(cè)定，以大黃素，大黃酚的進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，其吸收峰峰面積為橫坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果表明大黃素在0.01112～0.0556μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，大黃酚在0.02224～0.1112μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4供試品溶液制備按處方比例稱取藥材共9份，按表1正交表加水回流提取，濾過，合并濾液，備用。精密量取上述溶液適量置水浴蒸干，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶，甲醇定容，0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，進(jìn)樣10μL。

2.2.5陰性對(duì)照溶液的制備按處方稱取藥材(缺大黃)，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備，即得陰性對(duì)照溶液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1精密度試驗(yàn)取大黃素、大黃酚對(duì)照品溶液，分別按照各自液相方法重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)定峰面積，RSD分別為0.75%、1.35%，表明儀器精密度良好。

2.3.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別于0、1、2、4、8h各進(jìn)樣一次，每次10μL，測(cè)定峰面積，RSD分別為0.38%、0.65%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一供試品溶液6份，分別按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD分別為0.78%、1.25%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.4加樣回收試驗(yàn)稱取3份已知含量的供試品溶液，分別精密加入大黃素和大黃酚對(duì)照品溶液按“2.2.4”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算的大黃素平均回收率為100.1%，RSD為1.85%，大黃酚平均回收率為98.5%,RSD為2.25%。

2.4正交試驗(yàn)安排及結(jié)果工藝評(píng)價(jià)目標(biāo)通過指標(biāo)性成分，提取物來(lái)反映，指標(biāo)性成分通過大黃素、大黃酚2個(gè)指標(biāo)來(lái)反映，根據(jù)本方配伍規(guī)律，確定以上指標(biāo)的優(yōu)先順序?yàn)椋捍簏S素>大黃酚>干膏量。首先指標(biāo)性成分比干膏轉(zhuǎn)移率重要的多，大黃素記5分，大黃酚記3分，干膏量記2分，總分10分[3]。見表2，結(jié)果分析見表3。

表2　試驗(yàn)安排及結(jié)果

表3　方差分析結(jié)果

F0.05(2,2)=19.00

3　驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方量稱取藥材3份，按選定的最佳提取工藝提取，測(cè)定各指標(biāo)成分含量。結(jié)果見表4。

表4　驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

4　討論

從以上試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，第8組綜合得分最高，即最佳工藝為加10倍量水，提取30min，提取2次[4]。

原方制備工藝較為復(fù)雜，本實(shí)驗(yàn)采用水提工藝優(yōu)化工藝參數(shù)起到了事半功倍的效果，大黃素和大黃酚雖為弱水溶性，但含量較高，為方中君藥，故做為該考核指標(biāo)，結(jié)果表明本工藝簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：286.

[2]程詠梅,陳仁華.小檗堿提取工藝的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,18(6),1445-1447.

[3]馬鵬生.六盤山大黃主要成分兩種提取方法比較研究[J].醫(yī)學(xué)信息,2009,22(9),1915-1916.

[4]李紅霞,王坤杰.大黃最佳提取方法的比較研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(29),12753-12754.

Optimization on Extraction Technology of Qingning Pill by Orthogonal Experiment

LIU LihuaZHAI Laichao

(Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM, Henan, Zhengzhou 450000, China)

ObjectiveTo optimize the extraction technology of Qingning pill. MethodsThe orthogonal experiment was used to optimize the extraction technology. Taking emodin, rhubarb and dry paste volume as index, affect of water added, extraction times and adding water multiples on extraction technology was observed, and finally the best water extraction technology was determined. ResultsThe best extraction technology is adding 10 times water quantity, extraction for 30min and 2 times. ConclusionIt provided scientific basis for extraction process and the next research work.

Qingning pill; Orthogonal experiment; Extraction technology

河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部(鄭州 450000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.17.019

1003-8914(2016)-17-2494-03

(本文校對(duì)：馮菲2014-10-21)