楊文衛(wèi)

（江蘇省常州市金壇區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇 常州 213200）

某地區(qū)牛、羊口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)與分析

楊文衛(wèi)

（江蘇省常州市金壇區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇 常州 213200）

為確實(shí)掌握某地區(qū)牛、羊口蹄疫（FMD）春季防疫免疫效果，利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對(duì)該地區(qū)某奶牛場(chǎng)的74頭奶牛進(jìn)行了A、O和亞洲Ⅰ型FMD免疫抗體的檢測(cè)，對(duì)7家規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和7家散養(yǎng)戶的80只山羊進(jìn)行了O型和亞洲Ⅰ型FMD抗體的檢測(cè)。結(jié)果顯示，用O型-A型-亞洲Ⅰ型FMD三價(jià)滅活苗免疫奶牛后，可同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)A、O和亞Ⅰ型3種亞型的高水平抗體；用O型-亞洲Ⅰ型FMD二價(jià)滅活苗免疫羊后，規(guī)模羊場(chǎng)的兩種亞型抗體合格率均高于散養(yǎng)羊。所抽檢牛、羊抗體合格率均超過(guò)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明，F(xiàn)MD三價(jià)苗免疫效果較好，可以起到一針?lè)廊偷淖饔茫档猛茝V應(yīng)用。

奶牛；羊；口蹄疫；免疫抗體；檢測(cè)

口蹄疫（FMD）俗稱“口瘡”、“蹄癀”，是由口蹄疫病毒（FMDV）引起偶蹄獸的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，以牛最易感，其次為豬、羊、駱駝等，人對(duì)本病也具有易感性。俗稱牛是指示燈，豬是擴(kuò)大器，羊是保持者。本病感染譜廣、流行快，往往造成大流行，不易控制和消滅，是目前世界各國(guó)最重視的家畜傳染病之一。FMDV具有多型性、易變異的特點(diǎn)。根據(jù)其血清學(xué)特性，目前可分為7個(gè)血清型、即A、O、C、南非1、南非2、南非3和亞洲Ⅰ型（簡(jiǎn)稱亞Ⅰ型）。本病主要感染牛、羊，對(duì)易感動(dòng)物進(jìn)行免疫接種是防控此病最有效的措施。由于FMD各型的抗原性不同，互相之間不能交叉免疫，所以，要獲得理想的抗體水平必須使用相應(yīng)血清型的疫苗。目前，預(yù)防牛FMD普遍使用O型-A型-亞洲Ⅰ型三價(jià)滅活苗（簡(jiǎn)稱三價(jià)苗），羊FMD使用O型-亞洲Ⅰ型FMD二價(jià)滅活苗（（簡(jiǎn)稱二價(jià)苗）進(jìn)行免疫接種。

為了解FMD二價(jià)苗和三價(jià)苗的免疫效果，確實(shí)掌握春季防疫后各養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）牛、羊免疫 FMD后的抗體水平，本試驗(yàn)對(duì)某牛場(chǎng)的74頭奶牛進(jìn)行了A、O和亞Ⅰ型FMD免疫抗體的檢測(cè)，對(duì)7家規(guī)模場(chǎng)和7個(gè)散養(yǎng)戶的80只羊進(jìn)行了O型和亞Ⅰ型FMD免疫抗體的檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行初步分析和探討，以期為FMD的防治工作提供一定的參考資料。

1　材料

1.1主要儀器普通離心機(jī)，酶標(biāo)儀，微量震蕩器等。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物某規(guī)模奶牛場(chǎng)的74頭奶牛，7家規(guī)模場(chǎng)（以A1～A7表示）共計(jì)45只羊，7個(gè)散養(yǎng)戶（以B1～B7表示）共計(jì)35只羊。

1.3免疫疫苗奶牛使用O型-A型-亞洲Ⅰ型FMD三價(jià)滅活苗為金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：5235040；A1～A5、B1～B5免疫羊使用O型-亞洲Ⅰ型FMD二價(jià)滅活苗為中牧實(shí)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：1505005；A6、A7、B6、B7免疫羊使用O型-亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活苗為金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：5216019。

1.4免疫抗體檢測(cè)試劑O型FMD液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（20160407101-1）、亞洲Ⅰ型FMD液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（20160408102）和A型FMD液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（20160408103）。

2　方法

2.1血清的采集及處理免疫21d后，分別從牛、羊頸靜脈采血5mL，傾斜45°室溫放置，待血液凝固后以4000r/min進(jìn)行離心，離心5min，分離出血清樣品，至于4℃冰箱待檢。

2.2免疫抗體檢測(cè)依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《口蹄疫診斷技術(shù)》（GB/T18935-2003），應(yīng)用液相阻斷ELISA方法檢測(cè)A、O和亞Ⅰ型FMD免疫抗體，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，A、O和亞Ⅰ型抗體滴度測(cè)定均按照20份樣品進(jìn)行布局，血清稀釋度為24～27。

2.3結(jié)果平判定根據(jù)農(nóng)業(yè)部《2015年國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》，A、O和亞Ⅰ型FMD液相阻斷ELISA，免疫21d后的抗體效價(jià)≥26判定為免疫合格。根據(jù)檢測(cè)3種亞型抗體的試劑盒說(shuō)明書，牛、羊的抗體效價(jià)≥1：128，為99%以上保護(hù)；效價(jià)在1：22～90之間，為50%保護(hù)；效價(jià)≤1：16，無(wú)保護(hù)作用。

3　結(jié)果與分析

3.1不同飼養(yǎng)方式牛、羊FMD抗體檢測(cè)結(jié)果比較經(jīng)檢測(cè)，該規(guī)模牛場(chǎng)抽檢的74頭奶牛中，只有1頭奶牛A、O和亞Ⅰ型3種亞型的抗體水平均不合格，另外有1頭奶牛A型抗體不合格。74頭奶牛的O型和亞Ⅰ型FMD免疫抗體合格率相同，均為98.65%，A型略低于其它兩種亞型，為97.30%。規(guī)模羊場(chǎng)的O型和亞Ⅰ型FMD免疫抗體均高于散養(yǎng)羊，羊的兩種FMD亞型抗體合格率相近。所有抽檢牛、羊抗體合格率均超過(guò)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2EMD三價(jià)苗免疫保護(hù)情況從檢測(cè)結(jié)果可以看出，奶牛經(jīng)FMD三價(jià)苗免疫后，產(chǎn)生了高水平的免疫抗體。其中，O型和亞Ⅰ型抗體效價(jià)≥1：128的比率占到98.65%，即該三價(jià)苗對(duì)98.65%的奶牛有99%以上的保護(hù)作用，對(duì)另外的1.35%的奶牛有50%的保護(hù)作用；A型FMD免疫保護(hù)率也較高，對(duì)93.24%的奶牛起到99%的保護(hù)。從整體水平來(lái)看，一針FMD三價(jià)苗可以平均防止該奶牛場(chǎng)96.85%的奶牛感染FMDV，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1　不同飼養(yǎng)方式牛、羊FMD抗體檢測(cè)結(jié)果

表2　FMD三價(jià)苗免疫保護(hù)情況

4　討論

FMD是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定的A類烈性動(dòng)物傳染病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。近年來(lái)，農(nóng)業(yè)部下發(fā)的FMD免疫方案中規(guī)定：“對(duì)所有牛、羊、駱駝、鹿進(jìn)行O型和亞洲Ⅰ型FMD強(qiáng)制免疫，對(duì)所有奶牛和種公牛進(jìn)行A型FMD強(qiáng)制免疫?！备鶕?jù)最近幾年各地FMD發(fā)生和流行情況來(lái)看，目前流行的主要是A型和O型。因此，為嚴(yán)防FMD的發(fā)生，對(duì)于奶牛場(chǎng)，必須進(jìn)行A、O和亞Ⅰ型3種亞型的強(qiáng)制免疫，而羊場(chǎng)則要進(jìn)行O型和亞Ⅰ型兩種亞型的免疫?？茖W(xué)合理的免疫程序和優(yōu)質(zhì)疫苗的選擇是保證免疫效果的充分條件，同時(shí)，免疫抗體檢測(cè)又是掌握疫苗免疫后動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生的抗體水平以及評(píng)估疫苗質(zhì)量的重要方法。

為了解掌握2016年某地區(qū)奶牛和羊的FMD免疫預(yù)防情況，科學(xué)評(píng)價(jià)疫苗免疫效果，本試驗(yàn)對(duì)分布于當(dāng)?shù)?個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的羊和一牛場(chǎng)的奶牛進(jìn)行了FMD免疫抗體的監(jiān)測(cè)。結(jié)果顯示，所有被檢牛、羊免疫抗體合格率均達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。其中，奶牛的免疫抗體合格率最高，74頭奶牛中只有1頭奶牛的3種亞型抗體不達(dá)標(biāo)，可能與該試驗(yàn)牛的免疫機(jī)能較差有關(guān)。免疫三價(jià)苗的肉牛中，O型和亞洲Ⅰ型不合格的A型也不合格。O型和亞Ⅰ型FMD免疫抗體合格率以及達(dá)到99%以上保護(hù)作用的牛所占比率均達(dá)到98.65%，說(shuō)明該三價(jià)苗能同時(shí)激發(fā)免疫動(dòng)物產(chǎn)生高水平的O型和亞Ⅰ型FMD抗體，起到極大的保護(hù)作用。A型抗體合格率雖然也很高，但起到99%以上保護(hù)作用的牛所占比率卻較低，為93.24%，可能與多種因素有關(guān)，包括動(dòng)物的種屬、FMDV的血清型、抗原結(jié)構(gòu)、有效抗原負(fù)荷量、保護(hù)性抗體的結(jié)合位點(diǎn)等。二價(jià)苗免疫羊的抗體合格率偏低，尤其是散養(yǎng)戶羊，不論是O型FMD抗體水平還是亞Ⅰ型，規(guī)模場(chǎng)都比散養(yǎng)戶平均高出6個(gè)百分點(diǎn)，這可能與飼養(yǎng)管理人員對(duì)疫苗接種的重視程度、管理水平、動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)健康水平、防疫員的技術(shù)水平以及疫苗的儲(chǔ)存條件等有一定關(guān)系。因此，在實(shí)際防疫工作中，應(yīng)加大對(duì)FMD等重大動(dòng)物疫病預(yù)防接種的宣傳力度，同時(shí)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)及散養(yǎng)戶開展免疫接種等技術(shù)指導(dǎo)，確保羊FMD的免疫保護(hù)率。無(wú)論是FMD三價(jià)苗還是二價(jià)苗，牛、羊免疫后對(duì)同一種疫苗的不同亞型抗原刺激所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答有所不同，但差別不大，可能是不同型的抗原之間存在相互干擾，或是免疫細(xì)胞對(duì)不同抗原同時(shí)刺激存在選擇性，或是與多價(jià)苗同單位劑量中不同種抗原的量不同有關(guān)，在實(shí)際工作中，應(yīng)根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，及時(shí)對(duì)免疫后抗體水平較低的動(dòng)物針對(duì)性的進(jìn)行補(bǔ)免，以達(dá)到有效保護(hù)力。

本次監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，用FMD三價(jià)苗免疫奶牛后21d，A、O和亞Ⅰ型FMD免疫抗體合格率完全能夠達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，與賀奮義，周靜華等人的報(bào)道結(jié)果一致。FMD三價(jià)苗可以起到一針?lè)廊偷淖饔茫⑶铱纱蟠蠼档头酪邚?qiáng)度和成本，值得推廣應(yīng)用。

當(dāng)然，要切實(shí)避免FMD的發(fā)生，除了嚴(yán)格按照要求和標(biāo)準(zhǔn)接種疫苗，定期進(jìn)行抗體檢測(cè)外，還應(yīng)注重以下幾個(gè)方面。包括（1）日常的消毒。消毒是消滅傳染源、控制FMD最有效的辦法，必須嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度，做好消毒工作。（2）環(huán)境控制。養(yǎng)殖場(chǎng)的選址、分區(qū)、布局應(yīng)科學(xué)合理，避免非場(chǎng)區(qū)人員進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)。（3）飼養(yǎng)管理。避免不同種類的動(dòng)物混養(yǎng)；堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，不同日齡的應(yīng)分開飼養(yǎng)，如需引種，應(yīng)保證證件齊全；根據(jù)不同生長(zhǎng)階段的營(yíng)養(yǎng)需求，科學(xué)飼喂；在飼養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)減少應(yīng)激。（4）無(wú)害化處理。對(duì)病死動(dòng)物、糞便及其他污染或可疑污染物嚴(yán)格按照要求進(jìn)行無(wú)害化處理，所涉及到的運(yùn)輸、裝卸等環(huán)節(jié)要避免灑漏，所用交通工具及其它物品要徹底消毒。（5）建好免疫檔案。免疫檔案是了解、追溯免疫狀況最簡(jiǎn)捷、最準(zhǔn)確的方法。因此，要嚴(yán)格按照防疫要求，建立健全免疫檔案，確保防疫工作及時(shí)、全面、準(zhǔn)確完成。

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10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.017

楊文衛(wèi)（1966～），高級(jí)畜牧師，主要從事動(dòng)物疫病防控工作