龐宇舟，蔣　林，羅宇東，米阿娜（.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧53000；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西南寧53003）

龍鉆通痹顆粒鎮(zhèn)痛、抗炎及急性毒性的實(shí)驗(yàn)研究

龐宇舟1，蔣林1，羅宇東2，米阿娜1
（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西南寧530023）

［目的］研究龍鉆通痹顆粒鎮(zhèn)痛、抗炎作用及急性毒性。［方法］①采用扭體、熱板法兩種鎮(zhèn)痛試驗(yàn)方法，每個(gè)實(shí)驗(yàn)將60只小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，阿司匹林組（50 mg/ml）,龍鉆通痹組（30 g/kg）,每組20只,各組按10 ml/kg劑量灌胃給藥,每天1次,連續(xù)3 d，然后在預(yù)處理后的不同時(shí)間分別觀察藥物對化學(xué)、電極熱板刺激痛反應(yīng)的影響。②抗炎試驗(yàn)采用二甲苯致小鼠耳腫脹法。取小鼠40只，隨機(jī)分為4組，生理鹽水組給予等體積蒸餾水，龍鉆通痹高、低劑量組按21.4 g/kg和10.7 g/kg劑量給予龍鉆通痹顆粒溶液，阿斯匹林組按0.2 g/kg劑量給予阿斯匹林溶液，連續(xù)灌胃給藥7 d，每天1次。于末次給藥后1 h在小鼠右耳涂20 μl二甲苯致炎，1 h后處死動物，剪下雙耳，用6 mm打孔器切下雙耳片稱重，以右耳重量減去左耳重，觀察其腫脹程度。③急性毒性試驗(yàn)采用小鼠灌胃法，測定龍鉆通痹顆粒的最大給藥量。［結(jié)果］①扭體法試驗(yàn)中，與生理鹽水組比較，龍鉆通痹組和阿司匹林組均能明顯抑制小鼠的扭體次數(shù)（P<0.01）,延長扭體潛伏期（P<0.01）；其中龍鉆通痹組鎮(zhèn)痛作用與阿司匹林組相似（P>0.05）。表明龍鉆通痹顆粒對醋酸引起的疼痛有顯著的鎮(zhèn)痛作用。②熱板法試驗(yàn)中，藥后30 min，與同組給藥前比較，阿司匹林組能顯著延長小鼠的痛閾值（P＜0.01）；與生理鹽水組比較，龍鉆通痹組和阿司匹林組均能顯著延長小鼠的痛閾值（P＜0.05或P＜0.01）；藥后60 min和90min，龍鉆通痹組與給藥前比較和與生理鹽水組同時(shí)段比較，均能顯著延長小鼠的痛閾值，差異具有顯著性意義（P＜0.05或P＜0.01）。③抗炎試驗(yàn)表明龍鉆通痹大劑量組和阿斯匹林組能明顯抑制小鼠耳腫脹，具有較好的抗炎作用。④急性毒性試驗(yàn)中，測出龍鉆通痹顆粒的最大耐受量為172.8 g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的161倍，毒性很小。［結(jié)論］龍鉆通痹方顆粒具有鎮(zhèn)痛、抗炎作用，急性毒性很小。

龍鉆通痹顆粒；鎮(zhèn)痛；抗炎；急性毒性

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種病因未明的以炎性滑膜炎為主的慢性自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)為外周關(guān)節(jié)的非特異性炎癥，患病的關(guān)節(jié)及其周圍組織被進(jìn)行性破壞，若得不到及時(shí)有效的治療，可導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形，發(fā)生功能障礙，嚴(yán)重者功能喪失。全世界平均患病率大約為1%，我國患病率大約在0.32%～0.36%［1］。目前臨床上常用的藥物主要是非甾體類抗炎藥、激素類藥物和生物制劑等，但此類藥物價(jià)格昂貴、長期服用毒副作用大。因此，開發(fā)有效且毒副作用低的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物勢在必行。龍鉆通痹顆粒是廣西中醫(yī)藥大學(xué)自主研發(fā)的民族藥制劑，由飛龍掌血、大鉆、青風(fēng)藤、五指毛桃等藥物組成，通過疏通龍路、火路之瘀滯，起到補(bǔ)虛祛毒的功效，在臨床上用于治療活動期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎［2］。其中青風(fēng)藤具有祛風(fēng)散瘀、利濕止痛的功效，五指毛桃具有健脾益氣、化濕舒筋之功，為補(bǔ)氣之品。現(xiàn)代研究表明青風(fēng)藤含有的青風(fēng)藤堿有鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)靜、消腫等作用［3］，五指毛桃的主要成分補(bǔ)骨脂素常作為評價(jià)五指毛桃質(zhì)量的重要指標(biāo)［4］。前期課題組已開展了龍鉆通痹顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與工藝方面的研究［5-8］，本實(shí)驗(yàn)對該制劑進(jìn)行鎮(zhèn)痛、抗炎及急性毒性研究，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1動物昆明系小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，清潔級，合格證號：SCXK桂2014－0002，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。飼養(yǎng)于相對濕度（60±10）%、20～25℃的環(huán)境中，自由飲水，顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.2試藥龍鉆通痹顆粒制粒前干膏粉（批號：20150201），由廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠提供，棕褐色，每1 g干膏粉含生藥9.266 g，人口服推薦用量為每人（成人）每日101 g生藥，成人體重按60 kg計(jì)算，折合劑量為1.68 g生藥/kg BW；阿司匹林腸溶片為北京曙光藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品，生產(chǎn)批號為20140607，粉碎后以注射用水加吐溫-80助溶配置成混懸液，備用。

1.3主要儀器智能熱板儀（YLS-6A，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn)）；BS224S型電子天平（北京賽多利斯）；SM-3自動化酶免分析儀（北京天石醫(yī)療用品制作所）；RE501旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限公司）；XFS-280壓力蒸汽滅菌器（浙江新豐醫(yī)療器械有限公司）；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）；LRH-250生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；101-1恒溫電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1小鼠扭體鎮(zhèn)痛試驗(yàn)［9-10］取小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為生理鹽水組、阿司匹林組（0.5 g/ml）、龍鉆通痹組（30 g/kg），每組20只，各組按10 ml/kg劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3 d。末次給藥1 h后，各鼠分別腹腔注射0.6%醋酸溶液20 ml/kg（醋酸溶液臨用前配制），觀察、記錄注射醋酸溶液后15 min內(nèi)各組發(fā)生扭體反應(yīng)（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的小鼠數(shù)量和各鼠扭體次數(shù)。

扭體反應(yīng)抑制率計(jì)算：抑制百分率（%）=（對照組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù)）/對照組平均扭體次數(shù)×100%。結(jié)果見表1。

表1　龍鉆通痹顆粒對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響（±s，n=20）

表1　龍鉆通痹顆粒對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響（±s，n=20）

注：與生理鹽水組比較，①P<0.01

組別劑量（g/kg）扭體次數(shù)（次）扭體潛伏期（s）抑制率(%)生理鹽水組-21.10±10.625.00±2.82-阿司匹林組0．510.00±4.57①7.50±2.94①52.60龍鉆通痹組3010.05±7.87①8.00±3.65①52.40

由表1可見，與生理鹽水組比較，龍鉆通痹組和阿司匹林組均能明顯抑制小鼠的扭體次數(shù)（P<0.01），延長扭體潛伏期（P<0.01）；其中龍鉆通痹組鎮(zhèn)痛作用與阿司匹林組相當(dāng)（P> 0.05）。表明龍鉆通痹顆粒對醋酸引起的疼痛有顯著的鎮(zhèn)痛作用。2.2小鼠熱板鎮(zhèn)痛試驗(yàn)［9-10］實(shí)驗(yàn)前將雌性小鼠置于智能熱板儀55.0±0.5℃進(jìn)行篩選，以小鼠舔后足反應(yīng)的潛伏期為痛閾指標(biāo)，選取反應(yīng)潛伏期在10～30 s的合格小鼠60只，按體重隨機(jī)分成生理鹽水組、阿司匹林組（0.5 g/ml）、龍鉆通痹組（30 g/kg），每組20只，各組按10 ml/kg劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3 d，分別測定給藥前及末次給藥后30 min、60 min、90 min各鼠的痛閾值。將每只小鼠正常痛閾值各測2次，每次間隔5 min，取其平均值為給藥前正常痛閾值，比較同組藥后不同時(shí)間平均痛閾與基礎(chǔ)痛閾的差異，判斷是否有鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果見表2。

表2　龍鉆通痹顆粒對小鼠熱痛反應(yīng)的影響（±s，n=20）

表2　龍鉆通痹顆粒對小鼠熱痛反應(yīng)的影響（±s，n=20）

注：與同組給藥前比較，①P<0.05，②P<0.01；與生理鹽水組同時(shí)間段比較，③P<0.05，④P<0.01

給藥后痛閾值（s）痛閾提高率（%）30 min60 min90 min30 min60 min90 min生理鹽水組-17.06±4.4817.78±5.3117.52±4.2417.18±5.184.212.690.7阿司匹林組0．516.98±5.2424.37±7.99②③19.09±8.6818.26±6.0543.5112.387.49龍鉆通痹組3017.20±3.4024.10±4.28④23.84±5.23②④23.59±10.86①③40.1638.6337.19組別劑量（g/kg）給藥前痛閾值（s）

由表2可見，藥后30 min，與同組給藥前比較，阿司匹林組能顯著延長小鼠的痛閾值（P＜0.01）；與生理鹽水組比較，龍鉆通痹組和阿司匹林組均能顯著延長小鼠的痛閾值（P＜0.05或P＜0.01）；藥后60 min和90 min，龍鉆通痹組與給藥前比較以及與生理鹽水組同時(shí)間段比較，均能顯著延長小鼠的痛閾值，差異具有顯著性意義（P＜0.05或P＜0.01）。

2.3抗炎作用試驗(yàn)［9-10］采用小鼠二甲苯所致耳腫脹實(shí)驗(yàn)。取體重18～22 g小鼠40只，隨機(jī)分為4組：生理鹽水組，龍鉆通痹顆粒高、低劑量組，阿司匹林組，每組10只。龍鉆通痹顆粒高、低劑量組分別按21.4 g/kg和10.7 g/kg劑量給予龍鉆通痹顆粒溶液，阿司匹林組按0.2 g/kg劑量給予阿司匹林溶液，灌胃容積均為20 ml/kg；生理鹽水組給予等體積蒸餾水。連續(xù)灌胃給藥7 d，每天1次。于末次給藥后1 h，在小鼠右耳涂20 μl二甲苯致炎。1 h后處死動物，剪下雙耳，用6 mm打孔器切下雙耳片稱重，以右耳重量減去左耳重量，觀察其腫脹程度。結(jié)果見表3，龍鉆通痹高劑量組和阿司匹林組能明顯抑制小鼠耳腫脹（P＜0.05），具有較好的抗炎作用。

表3　龍鉆通痹顆粒對小鼠耳腫脹的影響（±s）

表3　龍鉆通痹顆粒對小鼠耳腫脹的影響（±s）

注：與生理鹽水組比較，①P＜0.05

組別n劑量（g/kg）耳腫脹度（mg）生理鹽水組10-11.2±2.4阿司匹林組100.27.0±2.2①龍鉆通痹高劑量組1021.47.8±2.3①龍鉆通痹低劑量組1010.79.3±2.6

2.4急性毒性試驗(yàn)［11］取昆明種小鼠40只，體重18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為2組：龍鉆通痹顆粒組和空白對照組，每組20只。小鼠禁食不禁水20 h后，龍鉆通痹顆粒組以最大給藥濃度（3.2 g藥材/ml），最大給藥體積40 ml/kg灌胃給予受試藥液，一天灌胃2次（每次間隔8 h）；空白對照組灌胃等量的蒸餾水。觀察給藥后14 d內(nèi)小鼠的外觀、體重、行為、四肢活動、進(jìn)食、呼吸、排泄、死亡等情況。14 d后處死小鼠進(jìn)行解剖，觀察各種臟器病變的情況。結(jié)果表明，給藥后14 d內(nèi)所有小鼠無死亡，飲食、外觀、呼吸、行為、四肢活動、分泌物及排泄物等均未見異常；對小鼠體重增長無顯著差異。14 d后解剖小鼠，觀察心、肝、脾、肺、腎等器官，龍鉆通痹顆粒組與空白對照組比較無異常。測得龍鉆通痹顆粒的最大給藥量為172.8 g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的161倍，表明龍鉆通痹顆粒的急性毒性很小。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)研究了龍鉆通痹顆粒的鎮(zhèn)痛、抗炎作用及急性毒性。熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)表明，龍鉆通痹顆粒能顯著延長小鼠的痛閾值（P<0.05或P＜0.01）；扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)可見，與生理鹽水組比較，龍鉆通痹組能明顯減少小鼠的扭體次數(shù)（P<0.01），作用與阿司匹林組相當(dāng)（P>0.05），龍鉆通痹顆粒對醋酸引起的疼痛有顯著的鎮(zhèn)痛作用；抗炎試驗(yàn)表明龍鉆通痹高劑量組和阿司匹林組能明顯抑制小鼠耳腫脹，具有較好的抗炎作用。在急性毒性試驗(yàn)中，測出龍鉆通痹顆粒的最大耐受量為172.8 g/kg，相當(dāng)于人臨床用量的161倍，毒性很小。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，龍鉆通痹顆粒具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，這可能是其治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥理學(xué)基礎(chǔ)。

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（編輯陳明偉）

Experimental Study of Longzuantongbi Granule on Analgesic Effect,Anti-inflammation and Acute Toxicity

PANG Yu-zhou1,JIANG Lin1,LUO Yu-dong2,MI A-na1
（1.Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,Guangxi,530001；2.Pharmaceutical factory of Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,Guangxi,530001）

［Objective］To study the analgesic effect,anti-inflammation and acute toxicity of Longzuantongbi granule.［Methods］①The analgesic experimental methods of body twist method and hot plate test was applied.In each experiment,60 rats were randomly divided into saline group,aspirin group（50mg/ml）,Longzuantongbi group（30g/kg）,20 rats for each group.Each group was administered by intragastric gavage following the dose of 10ml/kg,once a day,for 3 days.Then effects of the drug on chemical and electrode-heatplate stimulated-pain response were observed at different time after pretreatment.②The method of Xylene-induced ear edema in mice was applied on the anti-inflammatory experiment.40 rats were randomly divided into 4groups.Saline group were given an equal volume of distilled water.High and low dose groups of Longzuantongbi were given Longzuantongbi granule solution following the dose of 21.4g/ kg and 10.7g/kg.Aspirin group were given aspirin solution following the dose of 0.2g/kg.They were administered by intragastric gavage for 7 days,once a day.One hour after the last administration,20μl xylene was scribbled in the right ear of the mice to cause inflammation.The rats were sacrificed one hour later with both ears cut.Both ears were cut with 6mm hole puncher to be weighed.The weight of the left ear was subtracted to the right ear so as to observe the swelling condition.③Rats intragastric gavage was applied onacute toxicity experiment to determine the maximum dose of Longzuantongbi granule.［Results］①In body twist experiment,compared with saline group,Longzuantongbi group and aspirin group could inhibit writhing times（P<0.01）,and extend writhing incubation period of the mice（P<0.01）.The analgestic function of Longzuantongbi group was similar to that of aspirin group.It was indicated that Longzuantongbi granule had significant analgestic action on the pain caused by acetic acid.②In the hot plate test,aspirin group could significantly prolong the pain threshold in mice 30 minutes after administration（P<0.01）；Compared with saline group,Longzuantongbi group and aspirin group could significantly prolong the pain threshold in mice 30 minutes after administration（P＜0.05或P＜0.01）; Longzuantongbi group could significantly prolong the pain threshold in mice 60 or 90 minutes after administration.Compared with saline group,Longzuantongbi group could significantly prolong the pain threshold at the same time.There was significant difference（P＜0.05或P＜0.01）.③Anti-inflammatory experiment showed that high doses of Longzuantongbi group and aspirin group could significantly inhibit mouse ear edema with good anti-inflammatory effect.④In acute toxicity experiment,the measure for maximum tolerated dose of Longzuantongbi granule was 172.8g/kg,which was equivalent to 161 times of the human clinical dose with low toxicity.［Conclusion］Longzuantongbi granule has analgesic effect and anti-inflammation with low acute toxicity.

Longzuantongbi granule;analgesic effect;anti-inflammation;acute toxicity

R285.5

A

2095-4441（2016）01-0005－04

2016-01-18

國家自然基金項(xiàng)目（編號：81460765）；廣西衛(wèi)生廳中醫(yī)藥管理局課題（編號：GZZJ13-09）；南寧市技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目（南工信科技〔2013〕9號）

龐宇舟（1963-），男，教授，研究方向：壯瑤新藥的研究與開發(fā)

蔣林，教授級高級工程師，從事藥品及保健食品的新產(chǎn)品研發(fā)