林鳳，王芳，周凱

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 溫州 325015，1.婦科；2.病理科）

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·臨 床 經(jīng) 驗(yàn)·

子宮內(nèi)膜癌中Survivin與EGFR的表達(dá)及其臨床意義

林鳳1，王芳2，周凱1

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 溫州 325015，1.婦科；2.病理科）

目的：檢測(cè)子宮內(nèi)膜增生期內(nèi)膜、不典型內(nèi)膜以及內(nèi)膜癌組織中存活素（Survivin）、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）的表達(dá)，并探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)71例子宮內(nèi)膜癌組織中Survivin、EGFR的表達(dá)，選取同期20例增生期內(nèi)膜、20例不典型內(nèi)膜作為對(duì)照。結(jié)果：子宮內(nèi)膜癌中Survivin表達(dá)率為80.2%，EGFR表達(dá)率為52.1%，表達(dá)均較增生期內(nèi)膜、不典型內(nèi)膜增強(qiáng)。Survivin的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)相關(guān)；EGFR則與子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)分級(jí)以及術(shù)后死亡相關(guān)。Survivin與EGFR兩者在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)存在正相關(guān)（r=0.048，P＜0.05）。結(jié)論：子宮內(nèi)膜癌中Survivin和EGFR均存在過量表達(dá)，可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起作用。兩者聯(lián)合檢測(cè)有望用于評(píng)估子宮內(nèi)膜癌的惡性程度與預(yù)后。

子宮內(nèi)膜癌；表皮生長(zhǎng)因子受體；存活素；預(yù)后

子宮內(nèi)膜癌是一種源于子宮內(nèi)膜的惡性腫瘤，全世界每年新增子宮內(nèi)膜癌患者189 000例，而且每年大約45 000例患者死于該疾?。?］。表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）是蛋白酪氨酸激酶抑制劑作用的主要靶點(diǎn)。目前針對(duì)EGFR家族的分子靶向藥物已經(jīng)成功應(yīng)用于乳腺癌［2］及結(jié)直腸癌［3］等治療。存活素（Survivin）是凋亡抑制蛋白家族的成員之一，在腫瘤組織血管形成中起著重要作用，而Survivin表達(dá)具有組織差異性，因此是惡性腫瘤診斷和治療的新靶點(diǎn)。本研究采用免疫組織化學(xué)方法來(lái)檢測(cè)Survivin和EGFR兩種蛋白的表達(dá)，并進(jìn)一步探討兩種指標(biāo)用于子宮內(nèi)膜癌預(yù)后判斷及治療的可能。

1　對(duì)象和方法

1.1研究對(duì)象 選取溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2008年1月-2012年12月期間有完整隨訪資料并接受手術(shù)治療的71例子宮內(nèi)膜癌存檔病理蠟塊、20例非典型增生子宮內(nèi)膜與20例正常增生期子宮內(nèi)膜病理蠟塊。排除標(biāo)準(zhǔn)為術(shù)前曾接受孕激素治療或化學(xué)藥物治療的患者或患有其他惡性腫瘤者。20例正常增生期子宮內(nèi)膜患者年齡35～55歲，平均（45.5± 10.4）歲。20例非典型增生患者年齡35～58歲，平均（49.5±8.9）歲。71例子宮內(nèi)膜癌患者年齡32～76歲，平均（53.7±11.7）歲；組織學(xué)類型：2例漿液性乳頭狀癌，2例腺鱗癌，1例透明細(xì)胞癌，66例內(nèi)膜樣腺癌；組織學(xué)分級(jí)：G1級(jí)23例，G2級(jí)25例，G3級(jí)23例；根據(jù)手術(shù)病理分期：I期41例，I I期16例，I I I期11例，IV期3例。71例子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后平均隨訪時(shí)間為（63.8±29.2）月，其中9例患者死亡，10例患者發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，總體生存率為87.3%。

1.2試劑與方法 所用EGFR以及Survivin試劑盒均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法。采用半定量方式進(jìn)行免疫組織化學(xué)評(píng)分，即染色范圍與染色強(qiáng)度分別記分后相乘，相乘結(jié)果為評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為染色強(qiáng)度0分：細(xì)胞未染色；1分：弱陽(yáng)性（淺棕色）；2分：陽(yáng)性（棕色）；3分：強(qiáng)陽(yáng)性（深棕色）。染色范圍評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為0分：沒有陽(yáng)性細(xì)胞；1分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量≤10%；2分：陽(yáng)性細(xì)胞11%～50%；3分：陽(yáng)性細(xì)胞51%～75%；4分：陽(yáng)性細(xì)胞＞75%。采用盲法獨(dú)立閱片方法，由2名病理科醫(yī)師讀片，判定表達(dá)結(jié)果，2人評(píng)分之后再進(jìn)行核對(duì)，取得一致。結(jié)果分為：①陰性表達(dá)：評(píng)分＜6分為（-）；②陽(yáng)性表達(dá)：評(píng)分≥6分為（+），≥9分為（++）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料單因素比較采用x2檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)分析評(píng)判2種抗體在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)是否一致。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1Survivin、EGFR蛋白在正常內(nèi)膜、非典型內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá) Survivin陽(yáng)性主要表現(xiàn)為細(xì)胞核上見棕黃色顆粒。正常內(nèi)膜及非典型增生內(nèi)膜Survivin表達(dá)率分別為20%和25%，均表現(xiàn)為弱陽(yáng)性，而子宮內(nèi)膜癌中57例（占80.2%）表達(dá)，其中4例弱陽(yáng)性，其余為中度陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性。EGFR的陽(yáng)性表達(dá)表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜上見棕黃色顆粒。20例正常子宮內(nèi)膜中3例EGFR表達(dá)陽(yáng)性，占15%；20例非典型增生內(nèi)膜中4例EGFR表達(dá)弱陽(yáng)性，占20%；71例子宮內(nèi)膜癌中37例表達(dá)陽(yáng)性（占52.1%），為中度陽(yáng)性至強(qiáng)陽(yáng)性。Survivin、EGFR蛋白表達(dá)率在正常內(nèi)膜與非典型內(nèi)膜組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而子宮內(nèi)膜癌組與其余2組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2子宮內(nèi)膜癌中Survivin及EGFR的表達(dá)與臨床參數(shù)之間的關(guān)系 子宮內(nèi)膜癌中Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率隨著組織學(xué)分級(jí)升高而升高（P=0.012）。EGFR的表達(dá)則隨著組織學(xué)分級(jí)升高以及術(shù)后死亡率升高而上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008，P=0.029）。雖然EGFR陽(yáng)性隨肌層浸潤(rùn)加重以及手術(shù)病理分期上升呈現(xiàn)一定上升趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1　Survivin和EGFR表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 ［n（%）］

2.3Survivin、EGFR在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析表明，Survivin蛋白和EGFR蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中的表達(dá)存在正相關(guān)（r=0.048，P＜0.05）。

3　討論

Survivin是一種可以通過下調(diào)Caspase的活性而達(dá)到抑制細(xì)胞凋亡作用的凋亡抑制蛋白家族成員，其過度表達(dá)可能導(dǎo)致正常細(xì)胞增殖周期中檢查點(diǎn)（checkpoint）的限制不受控制，而發(fā)生細(xì)胞異常增殖，最后導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。研究表明Survivin的過表達(dá)與卵巢癌［4］、腎癌［5］等多種惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Aksoy等［6］采用免疫組織化學(xué)方法，對(duì)62例子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行Survivin檢測(cè)并隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Survivin陽(yáng)性與子宮內(nèi)膜癌的總體生存率以及無(wú)病生存率不存在關(guān)聯(lián)。Vanderstraeten等［7］用RT-PCR以及免疫組織化學(xué)方法對(duì)52例子宮內(nèi)膜癌以及52例子宮肉瘤患者進(jìn)行Survivin的檢測(cè)，結(jié)果表明Survivin在惡性度高以及復(fù)發(fā)性內(nèi)膜癌患者中表達(dá)更高。本研究顯示，Survivin在子宮內(nèi)膜癌中過表達(dá)，陽(yáng)性率高達(dá)80.2%，說明Survivin可能參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生以及臨床進(jìn)展過程。

EGFR蛋白是一種細(xì)胞膜蛋白激酶受體，其過度激活可以促使惡性腫瘤細(xì)胞增殖，抑制凋亡，還能促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和血管形成［8］。EGFR的相關(guān)研究也是目前子宮內(nèi)膜惡性腫瘤研究的一個(gè)熱點(diǎn)。黃必飛等［9］報(bào)道在120例宮頸鱗癌組織中，EGFR的表達(dá)陽(yáng)性率為89.2%。Livasy等［10］報(bào)道55例子宮內(nèi)膜肉瘤患者中，EGFR高表達(dá)占82%，低表達(dá)或者不表達(dá)占18%，在其后的隨訪中發(fā)現(xiàn)EGFR表達(dá)與患者的總體生存率、無(wú)病生存率均無(wú)相關(guān)，表明EGFR并不在子宮內(nèi)膜惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起作用。本研究表明，子宮內(nèi)膜癌組織中的EGFR表達(dá)率最高，而正常子宮內(nèi)膜及非典型增生子宮內(nèi)膜表達(dá)率相似，提示EGFR可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中起一定作用，但是具體作用尚需進(jìn)一步研究證明。此外，本研究發(fā)現(xiàn)EGFR在子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)分級(jí)差及術(shù)后死亡率高的患者中表達(dá)增加，表明EGFR也參與了子宮內(nèi)膜癌的臨床進(jìn)展過程。

Peng等［11］指出EGFR激活PI3K/Akt旁路，導(dǎo)致HIF-1上調(diào)而激活Survivin，導(dǎo)致其過度表達(dá)。本研究免疫組織化學(xué)結(jié)果提示，Survivin和EGFR在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)具有相關(guān)性，提示，Survivin可能在EGFR引起的腫瘤細(xì)胞增殖中發(fā)揮著重要作用。Survivin和EGFR在正常內(nèi)膜及非典型內(nèi)膜表達(dá)少且弱，而在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)的特點(diǎn)，也為子宮內(nèi)膜癌的靶向治療提供潛在性的新靶點(diǎn)。

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（本文編輯：丁敏嬌）

Expression and clinical roles of Survivin and EGFR in endometrial carcinoma

LIN Feng1，WANG Fang2，ZHOU Kai1. 1. Department of Gynecology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou，325015； 2.Department of Pathology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou，325015

Objective： To investigate the expression of Survivin and EGFR in endometrial cancer tissues and to explore their relationship with histopathological grade，tumor stages，lymph node metastasis，etc. At last，the clinical roles of Survivin and EGFR in endometrial cancer were explored. Methods： The expressions of Survivin and EGFR were detected by immunohistochemical methods in the paraffn embedded sections of 71 endometrial cancer patients and the clinical data had been reviewed. Twenty normal endometrial tissues and 20 atypical hyperplasia endometrial tissues were chosen as control group. Results： Survivin and EGFR were overexpressed in 80.2% and 52.1% endometrial cancer specimens. The expression of Survivin was correlated to the histological grade and the expression of EGFR was correlated to the histological grade and overall survival. Over expression of Survivin and EGFR were correlated to each other. Conclusion： Both Survivin and EGFR were over-expressed in endometrial cancer specimens. Survivin and EGFR may play key roles in the development of endometrial cancer. Detection of the expression of Survivin and EGFR can be proposed in the evaluation of malignant degree and prognosis of endometrial cancer.

endometrial carcinoma； epidermal growth factor receptor； Survivin； prognosis

R737.33

B DOI： 10.3969/j.issn.2095-9400.2016.08.011

2016-04-12

溫州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（Y20140309）；浙江省教育廳科研項(xiàng)目（Y201430483）。

林鳳（1980-），女，浙江溫州人，主治醫(yī)師，碩士。

周凱，副主任醫(yī)師，副教授，Email:630240234@ qq.com。