路緒強(qiáng)，高 磊，趙勝杰，何 楠，劉文革

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所 鄭州 450009）

西瓜[Citrullus lanatus(Thunb.)Matsum.&Nakai]屬于葫蘆科西瓜屬的一年生蔓性草本植物，因其營養(yǎng)豐富，味甜多汁，有夏季“水果之王”的美譽(yù)，已成為重要的世界性園藝作物。中國作為世界上最大的西瓜生產(chǎn)與消費(fèi)國，產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的60%以上［1］。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織2013年統(tǒng)計，世界上西瓜的收獲面積達(dá)到了水果收獲面積的5.4%，產(chǎn)量占13.4%，分別居世界水果收獲面積和產(chǎn)量的第7位和第1位。

西瓜果實富含番茄紅素、瓜氨酸、維生素C等多種對人體健康有益的功能性成分，其中番茄紅素是西瓜果實中的主要類胡蘿卜素，是造成西瓜果實呈現(xiàn)紅色的主要因素，作為一種功能性天然色素，具有淬滅活性氧、消除自由基、預(yù)防癌癥及心血管疾病等對人體有益的功能［2-3］。西瓜果實中的番茄紅素比番茄中的更容易被人體吸收，其有效性比番茄高出 40%［4］。

隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變，對優(yōu)質(zhì)西瓜品種的選育顯得尤為重要，番茄紅素作為西瓜的重要品質(zhì)屬性，成為研究人員關(guān)注的焦點(diǎn)。近幾年來對西瓜番茄紅素的研究主要集中在發(fā)育過程中番茄紅素含量的動態(tài)變化［5-6］、無籽西瓜果實發(fā)育過程中番茄紅素合成代謝酶基因的表達(dá)［7］、西瓜內(nèi)源激素與番茄紅素積累的相關(guān)性研究［8］及西瓜果實番茄紅素含量的QTL定位研究［9］等方面，而對西瓜果實番茄紅素含量遺傳規(guī)律的研究還未見報道。品質(zhì)或與品質(zhì)相關(guān)的某種成分含量一般具有數(shù)量性狀的特征，對其遺傳規(guī)律的研究主要通過章元明等［10］、蓋鈞鎰等［11］開發(fā)的多世代聯(lián)合的主基因與多基因的數(shù)量性狀遺傳分析方法，已在番茄、茄子、普通白菜、青花菜和甜瓜［12-16］等蔬菜作物上進(jìn)行廣泛應(yīng)用。

筆者以高番茄紅素和低番茄紅素西瓜自交系雜交衍生的六世代群體為研究對象，采用主基因+多基因混合遺傳的六世代聯(lián)合分析法，對西瓜果實番茄紅素含量的遺傳規(guī)律進(jìn)行解析，為西瓜果實高番茄紅素優(yōu)異基因的挖掘、種質(zhì)資源創(chuàng)新和選育優(yōu)質(zhì)新品種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

以中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所多倍體西瓜育種課題組從美國引進(jìn)的品種‘Cathay Belle’經(jīng)多年自交篩選出的具有高番茄紅素含量的西瓜自交系‘花貝雷’(鮮紅瓤)和從‘京欣1號’分離后代中經(jīng)多年自交選育出的的低番茄紅素含量的自交系‘13-3-3’（粉紅瓤）為試驗材料。

1.2 方法

1.2.1 群體構(gòu)建 2013年3—7月，將西瓜高番茄紅素含量自交系‘花貝雷’與低番茄紅素自交系‘13-3-3’種植于鄭州果樹研究所新鄉(xiāng)綜合試驗基地，二者進(jìn)行雜交獲得F1；2014年3—7月，兩親本分別與F1回交獲得B1（F1×P1）和B2（F1×P2），同時F1自交獲得F2。2015年3—7月，將親本及F1各設(shè)3個重復(fù)，分別定植于B1、B2及F2群體內(nèi)，進(jìn)行標(biāo)記，以便于控制環(huán)境條件的一致性，雙蔓整枝，第2雌花留單瓜，在新鄉(xiāng)基地按露地常規(guī)栽培方式進(jìn)行管理，最終獲得P1（15株）、P2（15株）、B1（116株）、B2（94株）、F1（15株）及F2（112株）六世代群體。

1.2.2 番茄紅素含量的測定 授粉35d果實完全成熟后取樣，取果實中心部位不包含種子的果肉，用榨汁機(jī)勻漿，放-20℃冰箱備用。番茄紅素含量（FW）的測定參照萬學(xué)閃等［5］的方法。

1.2.3 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用曹錫文等［17］植物數(shù)量性狀的主基因+多基因混合遺傳分析軟件，對‘花貝雷’和‘13-3-3’組合的六世代單株數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，通過 1對主基因（A）、2對主基因（B）、多基因（C）、1對主基因+多基因（D）、2對主基因+多基因（E）等5類24種遺傳模型的極大似然估計，結(jié)合AIC（極大似然函數(shù)）準(zhǔn)則、似然比檢驗及一組適合性測驗（均勻性檢驗 U12、U22、U32、Smirnov 檢驗、Kolmogorov檢驗），從中選出最優(yōu)的遺傳模型（AIC值相對較小，適合性較好）。根據(jù)最優(yōu)模型采用最小二乘法估計出主基因與多基因的效應(yīng)值、方差及遺傳參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 各世代番茄紅素含量次數(shù)分布

在‘花貝雷’ב13-3-3’組合的6個世代群體中，高番茄紅素含量的親本（‘花貝雷’，P1）單株中心果肉番茄紅素含量的平均值為49.38 mg·kg-1，低番茄紅素含量的親本（‘13-3-3’，P2）單株中心果肉番茄紅素含量的平均值為28.08 mg·kg-1，F(xiàn)1單株平均番茄紅素含量為51.30 mg·kg-1，高于高番茄紅素親本‘花貝雷’，即高番茄紅素含量對低番茄紅素含量為超顯性。6個世代群體平均番茄紅素含量及變異系數(shù)如表 1，可知：P1、P2及 F1變異系數(shù)較小，各單株的番茄紅素含量差異不明顯；而B1、B2及F2變異系數(shù)較大，各單株的番茄紅素含量差異明顯。分離群體B1、B2、F2各單株番茄紅素含量的頻率分布如圖1，可以看出：B1、B2、F2單株番茄紅素含量的次數(shù)分布均呈現(xiàn)出偏態(tài)分布，表明番茄紅素含量是數(shù)量性狀遺傳，具有明顯的主基因+多基因遺傳效應(yīng)。

表1 6個世代群體平均番茄紅素含量及變異系數(shù)

圖1 花貝雷’ב13-3-3’組合分離群體番茄紅素含量的次數(shù)分布

2.2 番茄紅素含量的遺傳模型

根據(jù)六世代群體番茄紅素含量結(jié)果的實際分布，采用數(shù)量性狀主基因+多基因混合遺傳的六世代聯(lián)合分析法，對‘花貝雷’ב13-3-3’組合6世代群體番茄紅素含量進(jìn)行分析，得到1對主基因（A）、2對主基因（B）、多基因（C）、1對主基因+多基因（D）、2對主基因+多基因（E）等5類24種遺傳模型AIC值（表2）。其中等加性主基因+加性—顯性多基因模型（E-3）、一對加性—顯性主基因+加性—顯性—上位性多基因模型（D-0）和加性—顯性—上位性主基因+加性—顯性多基因模型（E-1）的AIC值相對較低，為最優(yōu)模型的候選模型。對D-0、E-1和E-3模型進(jìn)行適合性檢驗，結(jié)果表明，D-0、E-1和E-3模型達(dá)到顯著水平的統(tǒng)計量分別為0個、2個和1個。結(jié)合單株番茄紅素含量的次數(shù)分布圖，選擇D-0模型即“一對加性—顯性主基因+加性—顯性—上位性多基因”模型為‘花貝雷’ב13-3-3’組合的最優(yōu)遺傳模型。

表2 各遺傳模型的AIC值

2.3 候選模型的遺傳參數(shù)估計

利用軟件分析結(jié)果得到番茄紅素含量模型D-0的一階遺傳參數(shù)估計值，‘花貝雷’ב13-3-3’組合主基因的加性效應(yīng)為6.43，主基因的顯性效應(yīng)為-4.00，主基因的顯性度為 0＜∣h/d∣＜1，為部分顯性。主基因的加性效應(yīng)為正向效應(yīng)，即隨著主基因加性效應(yīng)的增加，番茄紅素含量增多。

在一階參數(shù)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步估計二階參數(shù)。由表 3可知，B1、B2和F2主基因的遺傳率分別為21.76%、3.99%、27.28%；多基因的遺傳率分別為77.65%、94.64%、72.09%。各群體的多基因遺傳率都大于相應(yīng)的主基因遺傳率，可見西瓜果實番茄紅素含量的遺傳是多基因和主基因共同控制的，并且以多基因的遺傳為主。

表3 二階遺傳參數(shù)估計

3 討論

對番茄紅素含量遺傳模型的研究主要集中在番茄作物上，受試驗材料和栽培環(huán)境的影響，不同研究人員得出的遺傳模型并不相同。周永健［18］和陳慶生［19］一致認(rèn)為加工型番茄果實中番茄紅素含量遺傳模型以基因加性效應(yīng)為主，顯性效應(yīng)不顯著，并有少量上位性效應(yīng)；而孫保娟［20］通過對櫻桃番茄主要數(shù)量性狀的遺傳效應(yīng)研究，指出櫻桃番茄果實中番茄紅素含量的遺傳符合加性—顯性模型，其基因效應(yīng)為隱性增效，但又存在超顯性現(xiàn)象，狹義遺傳力為21.46%；李紀(jì)鎖等［12］的研究認(rèn)為番茄紅素含量遺傳符合一個主基因和加性—顯性—上位性多基因模型，這與本研究以西瓜作為試驗材料得出的番茄紅素含量遺傳模型相一致。

從西瓜果實番茄紅素含量的遺傳模型及二階參數(shù)的估計可以看出，B1、B2和F2共3個世代番茄紅素含量多基因遺傳率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于主基因遺傳率，說明其遺傳主要是由多基因控制的；Chen［21］通過QTL定位找到一個與番茄果實番茄紅素含量有關(guān)的主效QTL位點(diǎn)，可以解釋24%的表型變異，7個微效QTL占表型變異總數(shù)的5.2%～8.7%，這與筆者在B1和F2世代得到的主基因和多基因遺傳率相接近，因此可以說明番茄紅素含量的遺傳符合一對主基因+加性—顯性—上位性多基因模型。歐承剛等［22］采用F2分離群體研究胡蘿卜中的番茄紅素含量，通過構(gòu)建連鎖圖譜檢測到1個與番茄紅素含量相關(guān)的主效QTL，為加性效應(yīng)，可以解釋14.61%的表型變異，同時還檢測到1對上位性QTL，這與本研究得到的遺傳模型相一致。劉識等［23］在對西瓜果實番茄紅素含量初步定位的基礎(chǔ)上將主效QTL定位在4號染色體0.2cm區(qū)間內(nèi)，包含一個控制瓜瓤是紅色還是黃色的候選基因Cla0050011，同時獲得的連鎖標(biāo)記可用于分子標(biāo)記輔助育種。將本研究獲得的西瓜果實番茄紅素含量的遺傳規(guī)律和分子標(biāo)記相結(jié)合，可以顯著提高選擇效率，為培育高番茄紅素含量的西瓜新品種奠定了重要基礎(chǔ)。

西瓜果實番茄紅素的含量受遺傳和環(huán)境因素的共同影響，因此在選育高番茄紅素西瓜品種時要綜合考慮遺傳和環(huán)境雙重因素。在保證良好的栽培環(huán)境條件下，番茄紅素含量遺傳受多基因影響較大，因此高番茄紅素含量的西瓜自交系及品種適宜連續(xù)多代選擇，避免早期世代選擇的盲目性，才能更好地為西瓜生產(chǎn)和消費(fèi)服務(wù)。