呂秀芳　宋曉霞　賀慧　徐紀(jì)躍　孔令非

(鄭州大學(xué)人民醫(yī)院/河南省人民醫(yī)院　河南 鄭州　450000)

?

p16免疫組化染色在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價值

呂秀芳宋曉霞賀慧徐紀(jì)躍孔令非

(鄭州大學(xué)人民醫(yī)院/河南省人民醫(yī)院河南 鄭州450000)

目的研究HE染色聯(lián)合p16免疫組化(IHC)染色在宮頸癌篩查中的作用及意義。方法篩選243例宮頸組織，應(yīng)用HE染色及p16 IHC染色方法對其進(jìn)行檢測，另由兩名病理診斷醫(yī)生對染色結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果HE染色結(jié)果為166例非CIN、45例CINⅠ、12例CINⅡ、16例CINⅢ、4例宮頸癌。結(jié)合p16染色結(jié)果對HE染色結(jié)果進(jìn)行回顧分析，非CIN中28例宮頸病變被漏診，包括12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ。結(jié)論p16 IHC染色方法能夠降低HE染色方法的漏診率，提高靈敏度，HE染色聯(lián)合p16 IHC染色在宮頸癌篩查中具有重要的應(yīng)用價值。

宮頸上皮內(nèi)瘤變；人類乳頭狀瘤病毒；p16；免疫組織化學(xué)

宮頸癌一直位于全球女性中最常見惡性腫瘤的第2位，占所有惡性腫瘤的9.8%。人類乳頭狀瘤病毒(human papilloma viruses，HPV)感染被認(rèn)為是最重要的致病因素，其中起關(guān)鍵作用的是致癌基因E6、E7。p16是一個細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑，它調(diào)節(jié)CDK4和CDK6。在正常細(xì)胞中，p16是一個增殖的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，一旦視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(pRb)基因產(chǎn)物失活，就會通過一個負(fù)性反饋環(huán)使CDK4下調(diào)。HPV感染后，過表達(dá)的E7可與pRb蛋白相互作用使此負(fù)反饋環(huán)失活，導(dǎo)致p16上調(diào)，從而加快細(xì)胞的分裂增殖[1]?，F(xiàn)如今，宮頸病理組織學(xué)檢查是一個標(biāo)準(zhǔn)診斷方法，但是萎縮、不成熟化生、移行上皮化生、修復(fù)或炎癥、異型性、不足的樣本面積及觀察者主觀標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用等均可導(dǎo)致其診斷準(zhǔn)確度的下降和漏診率的升高[2]。為了克服蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin，HE)組織學(xué)診斷的缺點，p16蛋白過表達(dá)的檢測被廣泛應(yīng)用于提高各級別上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和宮頸癌活檢的組織診斷的重塑性。然而，p16 IHC染色對HE組織學(xué)診斷結(jié)果的影響還沒有被整體評估[3]。雖然許多研究已經(jīng)應(yīng)用p16 IHC染色分流宮頸病變，并將p16蛋白作為宮頸腫瘤預(yù)后的預(yù)測因子[4]，但很少有研究應(yīng)用p16 IHC染色從非CIN病變中識別CIN病變以及評估它在常規(guī)病理檢查中的應(yīng)用價值。本研究旨在應(yīng)用p16 IHC染色對HE染色結(jié)果進(jìn)行回顧性分析并發(fā)現(xiàn)漏診病例，從而探討HE染色聯(lián)合p16免疫組化(immunohistochemistry，IHC)染色在宮頸癌篩查中的作用及意義。

1　材料與方法

1.1研究對象所選樣本均為2014年10月至2015年3月河南省人民醫(yī)院病理科經(jīng)福爾馬林溶液固定、石蠟包埋的243例宮頸活檢標(biāo)本。患者年齡16～77歲，中位年齡39歲。所有患者無宮頸病變治療史。

1.2HE染色應(yīng)用蘇木精-伊紅對宮頸組織標(biāo)本進(jìn)行染色。所用試劑均購自福州邁新公司，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行，并由兩名病理診斷醫(yī)生對HE染色結(jié)果進(jìn)行評估。

1.3免疫組化染色采用免疫組化Envisivn法檢測p16在各病變中的表達(dá)情況。所有免疫組化試劑均購自于福州邁新公司，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行。同期采用熒光定量方法檢測HPV DNA。

1.4結(jié)果判定由兩名病理診斷醫(yī)生對p16 IHC染色結(jié)果做出評估，最后結(jié)果為兩名病理診斷醫(yī)生共同認(rèn)定。宮頸上皮細(xì)胞的細(xì)胞核或胞核、胞質(zhì)共同染色時為p16染色陽性，僅有細(xì)胞質(zhì)染色被解釋為p16染色陰性。p16免疫組化染色的評估結(jié)合兩個參數(shù)：染色反應(yīng)的強(qiáng)度和陽性細(xì)胞的分布形式。評估標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1　p16免疫組化染色的評估

注：陰性為無細(xì)胞染色；1+為p16染色為弱陽性；2+為p16染色為中等陽性；3+為p16染色為強(qiáng)陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。定性資料組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HE染色結(jié)果共篩選243例宮頸組織標(biāo)本，HE染色結(jié)果為166例非CIN、45例CINⅠ、12例CINⅡ、16例CINⅢ、4例宮頸癌。

2.2p16 IHC染色結(jié)果隨著病變級別的增加，p16 IHC染色陽性率呈逐漸遞增趨勢。見表2。

表2　HE染色組織切片的p16表達(dá)結(jié)果評估[n(%)]

2.3回顧性分析結(jié)果兩名病理診斷醫(yī)生結(jié)合p16 IHC染色結(jié)果對HE染色結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，發(fā)現(xiàn)非CIN病變中27例p16染色強(qiáng)陽性(+++)和1例p16染色中等陽性(++)者為CIN病變，其中包括12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ。最終結(jié)果為138例非CIN病變、57例CINⅠ、18例CINⅡ、26例CINⅢ、4例宮頸鱗癌。見表3。p16陽性率從非CIN到宮頸癌呈逐漸遞增趨勢，p16陽性率與宮頸病變級別呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3　回顧性分析結(jié)果[n(%)]

2.4p16 IHC染色的價值評估結(jié)合p16 IHC染色結(jié)果，發(fā)現(xiàn)非CIN中有28例CIN。僅HE染色方法的靈敏度為72.28%，漏診率為27.72%，特異度為100%，誤診率為0%。

3　討論

在發(fā)展中國家和不發(fā)達(dá)國家，宮頸癌是威脅女性健康的首要惡性腫瘤，也是繼肺癌之后的全球最常見惡性腫瘤。世界衛(wèi)生組織指出，宮頸癌是第1個完全由感染導(dǎo)致的惡性腫瘤[5]。

有研究已表明，病理組織學(xué)診斷為形態(tài)學(xué)診斷，主觀性較強(qiáng)，觀察者間的重復(fù)率較低[6]。此外，由于小的活檢面積、次要區(qū)域、炎癥反應(yīng)或其他病變的共存均可造成組織學(xué)診斷的困難。Liao等[7]發(fā)現(xiàn)p16陽性率與病變級別之間具有正相關(guān)性。本研究中，在回顧性分析前，p16陽性率隨病變級別的增加而呈遞增趨勢。結(jié)合p16 IHC結(jié)果進(jìn)行回顧性分析后，發(fā)現(xiàn)166例非CIN中有28例為CIN，分別為12例CINⅠ、6例CINⅡ、10例CINⅢ，且從非宮頸病變到宮頸癌p16陽性率呈逐漸遞增趨勢(P<0.05)。因此，p16蛋白是一個能夠較好反映宮頸病變的指標(biāo)。

Liao等[7]發(fā)現(xiàn) p16 IHC染色能夠作為提高病理組織診斷可信度的輔助工具。本研究中，結(jié)合p16 IHC染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)非CIN中有28例CIN，而僅HE染色方法的靈敏度為72.28%，漏診率為27.72%，特異度為100%，誤診率為0%。由此可知，p16免疫組織方法可降低HE染色方法的漏診率，并提高靈敏度。

結(jié)合p16 IHC染色方法可檢測出漏診病例，使患者得到及時治療，可在一定程度上降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率；同時，也能夠使那些患有低級別CIN病變的女性加強(qiáng)隨訪，降低向高級別CIN病變進(jìn)展的風(fēng)險。另外，p16 IHC染色費用較低，易于操作，應(yīng)該被應(yīng)用于宮頸癌的篩查中。

綜上所述，p16 IHC染色方法能夠降低HE染色方法的漏診率，提高靈敏度，HE染色聯(lián)合p16 IHC染色在宮頸癌篩查中具有重要的應(yīng)用價值。

[1]Liao G D,Sellors J W,Sun H K,et al.p16INK4A immunohistochemical staining and predictive value for progression of cervical intraepithelial neoplasia grade 1: A prospective study in China[J].Int J Cancer,2014,134(7):1715-1724.

[2]Kalof A N,Cooper K.p16INK4a immunoexpression:surrogate marker of high-risk HPV and high-grade cervical intraepithelial neoplasi[J].Adv Anat Pathol,2006,13(4):190-194.

[3]Cardoso F A,Campaner A B,Silva M A.Prognostic value of p16INK4a as a marker of clinical evolution in patients with cervical intraepithelial neoplasia grade 3 (CIN 3) treated by cervical conization[J].APMIS,2014,122(3):192-199.

[4]Lesnikova I,Lidang M,Hamilton-Dutoit S,et al.p16 as a diagnostic marker of cervical neoplasia: a tissue microarray study of 796 archival specimens[J].Diagn Pathol,2009,4:22.

[5]Martin C M,O’Leary J J.Histology of cervical intraepithelial neoplasia and the role of biomarkers[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,2011,25(5):605-615.

[6]Demir F,Kimiloglu E,Igdem A A,et al.High risk HPV in situ hybridization, p16INK 4A, and survivin expressions in cervical carcinomas and intraepithelial neoplasms: evaluation of prognostic factors[J].Eur J Gynaec Oncol,2014,35(6):708-717.

[7]Liao G D,Sellors J W,Sun H K,et al.p16INK4A immunohistochemical staining and predictive value for progression of cervical intraepithelial neoplasia grade 1: A prospective study in China[J].Int J Cancer,2013,134(7):1715-1724.

The value of p16 immunohistochemistry staining used in cervical cancer screening

Lv Xiufang, Song Xiaoxia, He Hui, Xu Jiyue, Kong Lingfei

(ZhengzhouUniversityPeople’sHospital/HenanProvincePeople’sHospital,Zhengzhou450000,China)

ObjectiveTo study the value of hematoxylin and eosin(HE) combined with p16 immunohistochemistry(IHC) staining used in cervical cancer screening. MethodsHE and IHC staining was used to detect 243 cervical biopsy specimens. The results were valuated by two pathologists. ResultsThe results of HE staining were 166 cases of non-CIN, 45 cases of CINⅠ, 12 cases of CINⅡ,16 cases of CINⅢ,4 cases of SCC. The results of HE staining were retrospectively analyzed according to p16 staining results, and 28 cases of cervical lesions were identified in 166 cases of non CIN, including 12 cases of CINⅠ, 6 cases of CINⅡ, 10 cases of CINⅢ. Conclusionp16 IHC staining can decrease the rate of missed diagnosis and improve the sensitivity of HE staining. HE staining combined with p16 IHC staining has very important practical value in cervical cancer screening.

cervical intraepithelial neoplasia; human papilloma viruses; p16; immunohistochemistry

R 737.33

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.08.008

2015-12-30)