劉振洋，向　芳，江少鋒，沈　華，殷先利

(湖南省腫瘤醫(yī)院消化泌尿內(nèi)科，湖南 長沙 410013)

?

熱療聯(lián)合IL-2逆轉人肺腺癌細胞A549/CDDP的作用及其可能機制

劉振洋，向芳，江少鋒，沈華，殷先利

(湖南省腫瘤醫(yī)院消化泌尿內(nèi)科，湖南 長沙 410013)

目的觀察熱療聯(lián)合白介素-2(IL-2)對人肺腺癌細胞株A549/CDDP的耐藥逆轉作用，并探討其可能作用機制。方法采用細胞培養(yǎng)技術，分別培養(yǎng)人肺腺癌細胞株A549及其耐藥細胞株A549/CDDP。42 ℃熱療，聯(lián)合或不聯(lián)合200 u·mL-1的IL-2，同時在2 μg·mL-1的CDDP作用下，分別干預敏感細胞株和耐藥細胞株2 h后，采用MTT法檢測2種不同細胞對CDDP的敏感性，流式細胞儀間接免疫熒光法檢測熱療、IL-2等不同條件作用下細胞中P-糖蛋白(P-gp)、多藥耐藥蛋白(MRP)、肺耐藥蛋白(LRP)的表達差異，以及細胞內(nèi)熒光藥物CDDP的聚集量的變化。結果分別聯(lián)用熱療、IL-2時，較單用CDDP，A549/CDDP細胞的抑制率得到提高，A549/CDDP細胞P-gp、MRP表達下降，細胞內(nèi)熒光強度增強，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。熱療聯(lián)合IL-2合用CDDP時，A549/CDDP細胞的抑制率進一步提高，A549/CDDP細胞P-gp、MRP表達明顯下降，細胞內(nèi)熒光強度顯著增強，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，但LRP的表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論熱療、IL-2分別能部分逆轉A549/CDDP細胞對CDDP的耐藥性；熱療聯(lián)合IL-2可進一步增強其耐藥逆轉效應。其逆轉耐藥機制，推測可能與抑制P-gp、MRP表達，增加細胞內(nèi)藥物CDDP的積聚有關。

肺腫瘤；熱療；白介素-2；P-糖蛋白；多藥耐藥蛋白

[Abstract]ObjectiveTo observe the reversal effect of thermotheapy combined with interleukin-2 (IL-2)on the drug resistance of human lung adenocarcinoma cell line A549/CDDP, and to explore its possible mechanism.MethodsHuman lung adenocarcinoma cell line A549 and its drug resistant cell line A549/CDDP were cultured by cell culture technique.After under the thermotherapy of 42 ℃, combined or not combined with 200 u·mL-1of IL-2, and 2μg·mL-1of CDDP, A549 and A549/CDDP were intervented for 2 hours.The MTT assay was used to detect the sensitivity of cell line A549 and the cell line A549/CDDP to CDDP, respectively.Flow cytometry detection were also employed to determine the P-glycoprotein (P-gp), multidrug resistance protein (MRP), lung resistance protein (LRP)differential expression and CDDP intracellular fluorescence concentration changes in A549 cell line and A549/CDDP cell line before and after the combined treatment, respectively.ResultsWith thermotherapy or IL-2, the inhibition rate of CDDP to A549/CDDP cell line was higher than with CDDP only used, the positive expression rate of p-gp and MRP of A549/CDDP cells decreased, and the intracellular accumulation of CDDP increased, the differences were statistically significant (P<0.05).Thermotherapy combined with IL-2 could further reverse the drug resistance of A549/CDDP cell line, the positive expression rate of P-gp and MRP significantly decreased, and the accumulation of intracellular CDDP increased more significantly (P<0.05).But there was no significant difference for the expression of LRP (P>0.05).ConclusionThermotherapy and IL-2 can partly reverse the drug resistance of human lung adenocarcinoma cell line A549/CDDP to CDDP, and thermotherapy combined with IL-2 can further enhance its reversal effect of drug resistance.The mechanism of reversing drug resistance , presumably, related to inhibition of p-gp, MRP expression, and to increased intracellular accumulation of CDDP.

[Key words]lung neoplasms; thermotherapy; interleukin-2; P-glycoprotein; multidrug resistance protein

化療耐藥是臨床惡性腫瘤化療的難題之一。研究腫瘤多藥耐藥發(fā)生和形成機制，探求逆轉腫瘤細胞耐藥的方法，克服腫瘤化療耐藥是臨床急需解決的重要課題。我們采用體外細胞培養(yǎng)技術，分別培養(yǎng)對肺癌常用的化療藥順鉑(CDDP)敏感的人肺腺癌細胞系A549和對CDDP耐藥的人肺腺癌細胞耐藥株A549/CDDP。參照我們的前期研究，采用濃度2 μg·mL-1的CDDP，42 ℃熱療聯(lián)合或不聯(lián)合200 u·mL-1的白介素-2(interleukin-2，IL-2)，作用于2種不同細胞2 h后，檢測腫瘤細胞對化療藥物CDDP的敏感性，并檢測不同處理條件下，腫瘤細胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、多藥耐藥蛋白(multidrug resistance protein，MRP)、肺耐藥蛋白(lung resistance protein，LRP)等耐藥相關蛋白的表達，以及細胞內(nèi)藥物CDDP的聚集量變化。初步探討熱療聯(lián)合IL-2對人肺腺癌細胞A549/CDDP耐藥性的逆轉作用及其作用機制。

1　材料與方法

1.1細胞系和細胞培養(yǎng)人肺腺癌細胞株A549、人肺腺癌細胞耐藥株A549/CDDP均購自中南大學湘雅醫(yī)學院細胞中心。細胞培養(yǎng)技術和過程參考文獻[1]，細胞在含體積分數(shù)10%新生小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)基中加入適量終濃度分別為100 u·mL-1、100 μg·mL-1的青霉素和鏈霉素，并放置于條件為37 ℃、體積分數(shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞2～3 d換液1次，傳代前用質量分數(shù)0.25%胰蛋白酶消化2～5 min，3～5 d進行傳代。采用恒定藥物濃度，周期性作用的方法維持培養(yǎng)A549/CDDP細胞。濃度設定為1 μg·mL-1的CDDP，作用時間48 h；每月加藥1次，每次作用時間為48 h，從而形成在1 μg·mL-1CDDP作用下細胞能正常生長的A549/CDDP細胞。

1.2藥物和試劑RPMI-1640培養(yǎng)基、磺化丙錠PI購自美國Invitrogen公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；EDTA溶液、二甲基亞砜、MTT購自美國Sigma公司；鼠抗人p-gp、MRP、LRP單克隆抗體均購自美國Neomarkers公司；重組IL-2購自上海華新生物有限公司；CDDP注射液購自齊魯制藥有限公司。

1.3實驗分組對照組：1)單純熱療組：熱療溫度42 ℃，時間2 h；2)單純化療組：CDDP濃度2 μg·mL-1；3)單純IL-2組：IL-2濃度200 u·mL-1；4)熱療+IL-2組：2 μg·mL-1IL-2+熱療42 ℃×2 h；5)空白對照組：37 ℃下等體積培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，不加藥物CDDP或IL-2。

實驗組：1)熱療+CDDP組：熱療42 ℃×2 h+2 μg·mL-1CDDP；2)IL-2 + CDDP組：200 u·mL-1IL-2+ 2 μg·mL-1CDDP；3)熱療+IL-2+CDDP聯(lián)合組：先在培養(yǎng)基中加入濃度同前藥物，然后42 ℃加熱2 h，最后在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

1.4MTT法將處于對數(shù)生長期的細胞取出，消化液常規(guī)消化，制成單細胞懸液，細胞密度調(diào)整為1×104·mL-1，然后接種于96孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h，待細胞貼壁，按實驗的分組設計，需要熱療條件者，放入42 ℃恒溫水浴箱2 h；需要加藥者，分別加入相應濃度的IL-2和(或)CDDP；每組設置6個復孔，每孔容積為200 μL。待細胞繼續(xù)生長48 h后，每孔加入20 μL的5 mg·mL-1MTT液，孵育4 h，然后將舊培養(yǎng)基棄去，加入150 μL的DMSO，使用微量震蕩器震蕩10 min，完全溶解其中的沉淀結晶物。以DMSO調(diào)零，酶標儀調(diào)定在570 nm波長下，檢測96孔板中每孔的吸光度(OD)值。每組重復3次，空白對照孔不加入細胞，只加培養(yǎng)基。計算細胞生長抑制率的公式如下：細胞生長抑制率=(1-實驗組平均OD值/對照組平均OD值)×100%，藥物作用的半數(shù)抑制濃度(IC50)采用直線回歸法推算。

1.6熒光分光光度法測定細胞內(nèi)CDDP積聚量檢測腫瘤細胞內(nèi)的藥物CDDP可產(chǎn)生熒光，檢測細胞內(nèi)熒光強度，可以精確反映腫瘤細胞內(nèi)CDDP濃度。取對數(shù)生長的A549細胞和A549/CDDP細胞，放入無血清RPMI-1640培養(yǎng)基，滌洗2次，使細胞懸浮于其中。調(diào)定細胞濃度至5×105·mL-1，按實驗分組加入相應藥物藥，并作空白對照。在37 ℃恒溫水浴中反復振蕩，并分別孵育30 min、60 min、90 min后取樣。用預冷生理鹽水處理，放置-20 ℃冰箱中凍存。檢測前取出融化，超聲細胞破碎儀粉碎細胞，最后取上清檢測其熒光強度(熒光分光光度法測定條件設定為激發(fā)波長470 nm，發(fā)射波長585 nm，狹縫15 nm)。每個樣本平行檢測3份，取其均值，與標準曲線進行比較，Lowry法測定相應的耐藥相關蛋白濃度，最終計算出細胞內(nèi)CDDP濃度。

1.7熱療聯(lián)合藥物的相互作用效應判斷作用效應判斷采用Burgi修正公式：Q=EA+B/(EA+EB-EA×EB)，其中EA、EB分別代表各單處理組的細胞抑制率，EA+B代表聯(lián)合處理組的細胞抑制率。通過計算，若Q>1.15，判定為協(xié)同作用；Q=0.85～1.15，判定為相加作用；Q<0.85，判定為拮抗作用。

2　結果

2.1A549/CDDP細胞對CDDP的敏感性經(jīng)MTT法檢測，CDDP處理A549細胞時，OD值為0.145±0.028，計算IC50為(0.26±0.04) μg·mL-1；CDDP處理A549/CDDP細胞時，OD值為1.632±0.163，IC50為(6.62±0.27)μg·mL-1。耐藥指數(shù)為25.46。結果顯示A549/CDDP細胞對原誘導藥物CDDP不敏感，可以用于后續(xù)實驗。

2.2熱療、IL-2對A549/CDDP細胞增殖的抑制42 ℃熱療2 h，A549/CDDP細胞的抑制率為(6.53±0.27)%; 200 u·mL-1的IL-2，作用于A549/CDDP細胞的抑制率為(5.94±0.35)%；而42 ℃熱療聯(lián)合200 u·mL-1IL-2時，A549/CDDP細胞的抑制率為(8.22±0.19)%。上述3種處理對A549/CDDP細胞的抑制率與空白對照組差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，說明熱療、IL-2及熱療聯(lián)合IL-2對A549/CDDP細胞無明顯抑制作用。

2.3熱療、IL-2聯(lián)合CDDP對A549/CDDP細胞增殖的抑制42 ℃熱療2 h，聯(lián)合2 μg·mL-1的CDDP時，A549/CDDP細胞的抑制率為(54.53±1.46)%；200 u·mL-1IL-2聯(lián)合CDDP時，A549/CDDP細胞的抑制率為(46.47±3.51)%；與單純化療組比較，兩者抑制率均明顯提高，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。熱療聯(lián)合IL-2及CDDP時，對A549/CDDP細胞的抑制率進一步提高，高達(80.12±2.71)%，與單純化療組、熱療+CDDP組及IL-2+CDDP組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。熱療、IL-2、熱療聯(lián)合IL-2分別合用CDDP時，A549/CDDP細胞的IC50分別為1.45±0.45、2.16±0.39、0.69±0.08，表明熱療、IL-2均具有一定的化療增敏作用。應用Burgi修正公式對藥物聯(lián)合作用類型判斷，提示熱療、IL-2聯(lián)用CDDP時，均具有協(xié)同作用，Q值分別為4.54、4.07。熱療、IL-2均能增強CDDP對A549/CDDP的抑制作用，一定程度逆轉A549/CDDP的耐藥性，而熱療聯(lián)合IL-2能更進一步逆轉其對CDDP的耐藥性。見表1。

表1熱療、IL-2聯(lián)合CDDP時

對A549/CDDP細胞的抑制率比較

組別CDDP(0μg·mL-1)OD值抑制率/%CDDP(2μg·mL-1)OD值抑制率/%熱療l.525±0.4336.53±0.270.743±0.08954.53±1.46IL-21.534±0.1875.94±0.350.874±0.28146.47±3.51熱療+IL-21.498±0.3848.21±0.190.324±0.31780.12±2.71

2.4A549/CDDP細胞P-gp、MRP、LRP的表達和細胞漿內(nèi)CDDP的濃度A549細胞的P-gp、MRP、LRP表達陽性率分別為(4.5±0.5)%、(10.2±0.7)%、(15.7±0.61)%，而A549/CDDP細胞表達陽性率分別為(89.4±3.7)%、(35.4±2.9)%、(30.5±2.7)%，可見A549/CDDP細胞P-gp、MRP、LRP表達陽性率較A549細胞增加(P<0.05)。經(jīng)熱療、IL-2聯(lián)合CDDP處理A549/CDDP細胞后，P-gp、MRP表達陽性率明顯下降(P<0.05)，但LRP表達無明顯變化，而細胞漿內(nèi)CDDP的濃度均明顯增加。見表2。

表2A549/CDDP細胞P-gp、MRP、LRP的表達及細胞漿內(nèi)CDDP濃度比較

組別P-gpMRPLRPCDDP熒光CDDP89.4±3.735.4±2.930.5±2.722.73±0.67IL-2+CDDP41.7±4.324.5±4.128.1±3.629.51±2.13熱療+CDDP32.8±2.526.0±2.331.8±2.430.48±1.54熱療+IL-2+CDDP10.2±2.212.5±3.127.9±5.645.67±3.43

3　討論

肺癌化療過程中很容易出現(xiàn)化療耐藥，包括原發(fā)性耐藥和繼發(fā)性耐藥，導致化療療效不佳。肺癌細胞多藥耐藥，對化療藥物不敏感，是影響臨床患者近期療效和遠期生存的重要原因之一。尋找理想的高效的逆轉多藥耐藥的藥物或新方法，成為目前腫瘤化療研究的熱點[2]。

熱療是通過提高全身或局部溫度達到殺滅腫瘤細胞的治療方法。臨床主要作為治療惡性腫瘤的輔助方法，以選擇性殺傷腫瘤細胞，而不影響正常細胞為特點。其抗腫瘤療效肯定，獲得基礎和臨床研究的證實[3-5]。相關研究提示，熱療能增強化療藥物的細胞毒作用，提高抗腫瘤能力，其主要機制包括：1)加熱破壞細胞膜的穩(wěn)定性，可能抑制P-gp和MRP等耐藥相關蛋白的活性，使膜通透性增加，促進化療藥物滲透和吸收[6]；2)熱療激活腫瘤細胞凋亡通路，誘導細胞調(diào)亡[7]。本實驗42 ℃熱療2 h聯(lián)合2 μg·mL-1CDDP，作用于A549/CDDP細胞后，其抑制率達54.53%。明顯高于CDDP對照組。提示熱療能增強A549/CDDP細胞對CDDP的敏感性，從而提高腫瘤細胞抑制率，在一定范圍內(nèi)逆轉A549/CDDP細胞的耐藥性。

細胞因子，如IL-2、α-IFN，是臨床常用免疫治療藥物。IL-2不僅能通過免疫機制增強抗腫瘤作用，而且能逆轉腫瘤細胞的多藥耐藥，恢復腫瘤耐藥細胞對化療藥物的敏感性，從而增強化療的細胞毒作用[8]。IL-2逆轉化療耐藥的作用機制可能與抑制多藥耐藥基因的活性，下調(diào)腫瘤耐藥相關蛋白的表達，以及激活調(diào)亡信號通路、調(diào)控癌基因等機制有關[8-9]。Stein等[10]研究提示IL-2干預多藥耐藥的腫瘤細胞，細胞內(nèi)多藥耐藥基因表達和P-gp蛋白水平均下降，細胞內(nèi)化療藥物ADM、VCR增加，提示IL-2能逆轉化療耐藥。Hosten等[11]發(fā)現(xiàn)肌注IL-2后，小鼠腸道細胞的P-gp表達明顯下降，腸道細胞吸收藥物濃度增加。本研究結果顯示，在CDDP基礎上，IL-2與CDDP聯(lián)合應用具有協(xié)同效應，提示IL-2具有化療增敏作用。

IL-2能顯著增強熱療對腫瘤細胞的抗瘤活性[12]；而熱療能夠上調(diào)IL-2受體，也能增加IL-2表達[13]。熱療聯(lián)合IL-2，能否增強逆轉化療耐藥的作用，值得嘗試。本研究采用42 ℃熱療2 h，聯(lián)合200 u·mL-1濃度IL-2，以2 μg·mL-1的CDDP處理A549/CDDP細胞，抑制率高達80.1%，明顯高于單純化療，也較熱療或IL-2聯(lián)合CDDP高。而CDDP的IC50由對照組的6.62 μg·mL-1降至0.69 μg·mL-1，可見熱療聯(lián)合IL-2明顯增強了CDDP抗腫瘤作用，有效逆轉了A549/CDDP細胞對CDDP的耐藥性。熱療、IL-2均能逆轉A549/CDDP細胞的耐藥性，而兩者聯(lián)合則能更進一步增強逆轉效應。

腫瘤多藥耐藥發(fā)生的原因和機制復雜，還沒有明確的結論。腫瘤耐藥基因在不同組織中的表達差異性是其可能的分子機制之一。目前研究較多的肺癌耐藥基因主要有MRP、LRP、拓撲異構酶等[14]。肺癌腫瘤細胞耐藥的最重要機制是肺癌相關耐藥蛋白，如P-gp、MRP、LRP等表達增加，促使細胞內(nèi)藥物蓄積減少[15]。P-gp是mdr1基因編碼的一種ATP依賴性藥物排出性膜泵，其與化療藥物結合后，又與ATP結合而獲能，進而將化療藥物泵出腫瘤細胞外，從而導致化療耐藥[16]。MRP基因編碼的蛋白同P-gp類似，也具有藥物外排泵功能，同時也需ATP供能，可改變細胞內(nèi)藥物濃度的分布，從而導致耐藥性的產(chǎn)生[17]。LRP基因編碼的不需ATP供能的轉運蛋白通過調(diào)節(jié)囊泡和核質的藥物轉運，將化療藥物儲存于囊泡，并減少化療藥在細胞核與細胞質間的比例而導致耐藥[18]。本研究結果顯示，A549/CDDP細胞相關耐藥蛋白P-gp、MRP、LRP表達均明顯高于A549細胞，熱療、IL-2分別聯(lián)合CDDP處理A549/CDDP細胞后，MRP、P-gp的表達下調(diào)，細胞內(nèi)CDDP熒光增強，但LRP的表達無明顯變化。熱療聯(lián)合IL-2進一步下調(diào)MRP、P-gp的表達，顯著增強細胞內(nèi)CDDP熒光強度。因此，我們推測熱療、IL-2能逆轉A549/CDDP細胞對CDDP的耐藥性，可能與LRP表達無關，而與下調(diào)P-gp、MRP等膜轉運蛋白的表達，增加細胞膜的通透性，從而增加細胞內(nèi)化療藥物積聚有關。

[1]陳杰，白春學，錢桂生，黃桂君．A549/CDDP多藥耐藥細胞系的建立[J]．中國癌癥雜志，2003，13(2)：186-187.

[2]Tang Y,McGoron AJ.Increasing the rate of heating:a potential therapeutic approach for achieving synergistic tumor killing in combined hyperthemia and Chemotherapy[J].Int J Hperthemia,2013,29(2):145-155.

[3]Ahmed K,Zaidi SF.Treating Cancer with heat:hyperthermia as promising strategy to enhance apoptosis[J].J Pak Med Assoc，2013，63(4):504-508.

[4]Wu SK,Chiang CF,Hsu YH,et al.Short-time focused ultrasound hyperthermia enhances liposomal doxorubicin delivery and antitumor erricacy for brain metastasis of breast cancer[J].Int J Nanomedicine,2014，19(9)：4485-4494.

[5]Agostinelli E, Belli F, Dalla Vedova L, et al.Hyperthermia enhances cytotoxicity of amine oxidase and spermine on drug-resistant LoVo colon adenocarcinoma cells[J].Int J Oncol,2006,28(6):1543-1553.

[6]Franke K, Kettering M, Lange K,et al.The exposure of cancer cells to hyperthermia, iron oxide nanoparticles, and mitomycin C influences membrane multidrug resistance protein expression levels[J].Int J Nanomedicine,2013,8:351-363.

[7]Wrzal PK, Bettaieb A, Averill-Bates DA.Molecular mechanisms of apoptosis activation by heat shock in multidrug-resistant Chinese hamster cells[J].Radiat Res, 2008,170 (4): 498-511.

[8]Stein U, Walther W.Cytokine-mediated reversal of multidrug resistance [J].Cytotechnology, 1998,27(3):271-282.

[9]Grodzovski I, Lichtenstein M, Galski H, et al.IL-2-granzyme A chimeric protein overcomes multidrug resistance (MDR)through a caspase 3-independent apoptotic pathway[J].Int J Cancer,2011,128(8):1966-1980.

[10]Stein U,Walther W, Shoemaker RH.Modulation of ntdrl expression by cytokines in human colon carcinoma cells: an approach for reversal of multidrug resistance[J].Br J Cancer,1996,74(5):1384-1391.

[11]Hosten B, Abbara C, Cibert M, et al.Interleukin-2 treatment effect on imatinib pharmacokinetic, P-gp and BCRP expression in mice[J].Anticancer Drugs, 2010 ,21 (2):193-201.

[12]Bevanda M, Orsolic N, Basic I, et al.Prevention of peritoneal carcinomatosis in mice with combination hyperthermal intraperitoneal chemotherapy and IL-2 [J].Int J Hyperthermia,2009,25(2):132-140.

[13]Ouyang W, Gao F, Wang L, et al.Thermoseed hyperthermia treatment of mammary orthotopic transplantation tumors in rats and impact on immune function[J].Oncol Rep,2010,24(4):973-979.

[14]Shukla S, Wu CP, Ambudkar SV.Development of inhibitors of ATP-binding cassette drug transporters: preset status and challenges[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol,2008,4(2):205-223.

[15]梁燕,張瑩,賈英杰.非小細胞肺癌多藥耐藥機制研究進展[J].山東醫(yī)藥,2013，53(35):102-104.

[16]Alfarouk KO, Stock CM, Taylor S,et al.Resistance to cancer chemotherapy: failure in drug response from ADME to P-gp[J].Cancer Cell Int,2015,15:71.

[17]Cole SP, Deeley RC.Multidrug resistance mediated by the ATP-binding cassette transporter protein MRP[J].Bioessays,1998, 20 (11): 931-940.

[18]Damiani D, Tiribelli M, Raspadori D, et al.The role of MDR-related proteins in the prognosis of adult acute.myeloid leukaemia (AML)with normal karyotype[J].Hematol Oncol, 2007, 25 (1): 38-43.

Effect and Possible Mechanism of Thermotherapy Combined with IL-2 on Reversing the Drug Resistance of the Human Lung Adenocarcinoma Cell Line A549/CDDP

Liu Zhenyang, Xiang Fang, Jiang Shaofeng, Shen Hua, Yin Xianli

(DepartmentofDigestiveandUrinaryMedicine,HunanCancerHospital,Changsha410013,China)

湖南省衛(wèi)生計生委科研基金資助項目(編號：C2014-36)；湖南省中醫(yī)藥科研計劃項目(編號：201682)

劉振洋(1970-)，男，博士，主任醫(yī)師，主要從事惡性腫瘤的臨床與基礎研究。E-mail:1323081926@qq.com

10.3969/j.issn.1673-5412.2016.04.006

R734.2；R730.58

A

1673-5412(2016)04-0299-05

2016-01-22)