萬麗麗，王曉東，慈春增

1.濰坊醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，山東濰坊 261042；2.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院免疫風(fēng)濕科，山東濰坊 261042

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血TLR4表達(dá)及其與IL-37水平的相關(guān)性

萬麗麗1，王曉東2，慈春增2

1.濰坊醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，山東濰坊 261042；2.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院免疫風(fēng)濕科，山東濰坊 261042

目的 研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）外周血Toll樣受體4（TLR4）表達(dá)水平，并觀察其與白介素-37（IL-37）的相關(guān)性。方法 選取2015年5月—2016年5月濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的45例RA患者為研究組，另選取同期骨21例關(guān)節(jié)炎患者為骨關(guān)節(jié)炎組，健康體檢者21名為對照組，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測入選者外周血TLR4表達(dá)，并觀察其與IL-37水平相關(guān)性。 結(jié)果 研究組TLR4陽性率和IL-37水平為（28.43±3.21）%和（78.56±8.97）ng/L，均顯著高于骨關(guān)節(jié)炎組的（10.21±4.32）%、（17.25±5.68）ng/L和對照組的（13.08±2.05）%、（10.08±2.56）ng/L，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），骨關(guān)節(jié)炎組和對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；相關(guān)性分析顯示：TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論 RA患者外周血TLR4表達(dá)上調(diào)，且與IL-37水平呈正相關(guān)關(guān)系。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；Toll樣受體4；白介素-37

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一種全身性自身免疫病，以對稱性、多關(guān)節(jié)慢性破壞為主。RA與遺傳、環(huán)境及多因素存在相關(guān)性，但是迄今發(fā)病機(jī)制尚不確切[1]。Toll樣受體（toll-like receptor，TLR）是一種跨膜蛋白，其在RA發(fā)病中的作用越來越受重視。Toll樣受體4（tolllike receptor-4，TLR4）是被首先發(fā)現(xiàn)的TLR，能識別病原體相關(guān)模式分子來激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，啟動一系列信號傳導(dǎo)通路，產(chǎn)生炎性因子[2]。白介素-37（Interleukin-37，IL-37）是一種抗炎性細(xì)胞因子，能抑制過度炎性反應(yīng)，起到保護(hù)作用[3]。該研究旨在分析2015年5月—2016年5月濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院免疫風(fēng)濕科收治的45例RA患者外周血TLR4表達(dá)水平，并觀察其與IL-37的相關(guān)性，為臨床診療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月—2016年5月該院免疫風(fēng)濕科收治的45例RA患者為研究組，所有患者均符合RA的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，經(jīng)疾病活動評分顯示病情活動，并排除細(xì)菌、病毒感染。男性10例，女性35例，年齡35～70歲，平均年齡（41.3±2.1）歲，均另選取同期骨關(guān)節(jié)炎患者21例為骨關(guān)節(jié)炎組，男性5例，女性16例，年齡34～70歲，平均年齡（40.8±1.3）歲，健康體檢者21名為對照組，男性6名，女性15名，年齡35～70歲，平均年齡（41.2±2.3）歲，3組入選者年齡和性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

抽取3組入選者空腹清晨靜脈血約4 mL，將其放置于抗凝管中，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測TLR4表達(dá)陽性情況，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法 （Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清中IL-37表達(dá)水平。流失細(xì)胞檢測應(yīng)用熒光標(biāo)記單克隆抗體為抗人CD14-FITC、抗人TLR4-PE，ELISA試劑盒為IL-37試劑盒。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察各組外周血TLR4陽性率和IL-37水平，并分析TLR4陽性率與IL-37水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析和處理數(shù)據(jù)，計量資料用（±s）表示，應(yīng)用t檢驗(yàn)，應(yīng)用Pearson相關(guān)分析TLR4陽性率與IL-37水平的相關(guān)性，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和骨關(guān)節(jié)炎組比較

研究組TLR4陽性率和IL-37水平均顯著高于骨關(guān)節(jié)炎組，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 研究組和骨關(guān)節(jié)炎比較（±s）

表1 研究組和骨關(guān)節(jié)炎比較（±s）

組別TLR4陽性率（%） IL-37（ng/L）研究組（n=45）骨關(guān)節(jié)炎組（n=21）tP 28.43±3.21 10.21±4.32 5.023 0.021 78.56±8.97 17.25±5.68 7.937 0.015

2.2 各組比較

研究組TLR4陽性率和IL-37水平均顯著高于對照組，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。同時，比較了表1和表2中骨關(guān)節(jié)炎組和對照組TLR4陽性率和IL-37水平的差異，結(jié)果顯示兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 研究組和對照組比較（±s）

表2 研究組和對照組比較（±s）

組別TLR4陽性率（%） IL-37（ng/L）研究組（n=45）對照組（n=21）tP 28.43±3.21 13.08±2.05 4.984 0.024 78.56±8.97 10.08±2.56 8.015 0.011

2.3 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析顯示TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.805，P＜0.05），見圖1。

圖1 RA患者IL-37（ng/L）與7LR4（%）相關(guān)性

3 討論

RA屬于自身免疫性疾病，免疫功能異常是引起RA的主要發(fā)病機(jī)制?；ぱ资荝A的基本病理改變，而炎癥反應(yīng)發(fā)揮重要作用。雖有研究證實(shí)，RA是在抗原的驅(qū)動下，由多因素共同參與引起，但是至今仍不明確。早期研究多致力于T、B細(xì)胞的研究，試圖探討T細(xì)胞及B細(xì)胞在RA免疫反應(yīng)中的作用[5]。近年來，TLR逐漸被學(xué)者所重視，其在RA發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮一定作用。TLR能連接天然和獲得性免疫危險信號，可以促進(jìn)炎性因子受體表達(dá)[6]。當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染、免疫紊亂時，TLR可以分子模擬、表位擴(kuò)散、模糊識別等引起免疫紊亂，使大量炎性因子產(chǎn)生，參與炎性反應(yīng)，介導(dǎo)RA發(fā)生和發(fā)展過程。TLR4是目前研究最廣泛的TLR受體，主要識別細(xì)菌脂多糖，然后再CD14協(xié)助下調(diào)控炎性反應(yīng)。已有研究證實(shí)[7]，TLR4會于RA淋巴細(xì)胞和滑膜纖維母細(xì)胞的表面高表達(dá)。

IL-37主要由12條β鏈構(gòu)成，結(jié)構(gòu)與白介素-18具有相似性，存在5種不同異構(gòu)體，其中IL-37b結(jié)構(gòu)最大，是主要表達(dá)的功能單位。IL-37也是先天性炎癥免疫抑制劑，可以抑制促炎因子的信號通路，抑制STATs1-4磷酸化，進(jìn)而削弱炎癥作用，對炎癥反應(yīng)具有抑制作用；IL-37還可以與SMAD3形成復(fù)合物，對STAT1及STAT3具有拮抗作用，起到抑制炎癥反應(yīng)作用。有研究顯示[8-9]，IL-37能有效抑制腫瘤壞死因子α，抑制中性粒細(xì)胞活化，降低肝細(xì)胞分泌促炎性因子和趨化因子，也會減少對肝細(xì)胞的損傷，進(jìn)而形成良性循環(huán)。該研究顯示，研究組TLR4陽性率和IL-37水平為（28.43±3.21）%和（78.56±8.97）ng/L，均顯著高于骨關(guān)節(jié)炎組的（10.21±4.32）%、（17.25±5.68）ng/ L和對照組的（13.08±2.05）%、（10.08±2.56）ng/L，與姚茹冰等[9]，楊超等人[10]研究結(jié)果具有相似性，姚茹冰研究顯示RA組TLR4表達(dá)明顯高于健康對照組，楊超等人研究顯示，RA組治療前IL-37為 （244.31±50.42）ng/L明顯高于對照組的（14.35±8.18）ng/L，說明RA患者會出現(xiàn)TLR4表達(dá)上調(diào)，IL-37表達(dá)水平也會升高，分析其原因：RA發(fā)病與免疫紊亂存在較大關(guān)系，免疫紊亂會刺激TLR4表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)炎性反應(yīng)發(fā)生；IL-37能抑制炎性反應(yīng)，而RA患者機(jī)體存在較高炎性反應(yīng)，會刺激IL-37表達(dá)升高來抑制炎性反應(yīng)。不同炎性因子刺激IL-37水平升高，但是不同細(xì)胞及組織具體誘導(dǎo)機(jī)制尚不確切，有待進(jìn)一步解決。但I(xiàn)L-37和炎癥因子均參與RA的發(fā)生和發(fā)展，并能通過抑制炎性因子來發(fā)揮保護(hù)機(jī)制，提示臨床上可以通過提高IL-37水平來治療RA。該研究還發(fā)現(xiàn)，TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關(guān)關(guān)系，分析其原因?yàn)椋篟A患者會出現(xiàn)TLR4表達(dá)上調(diào)，且在炎性因子的刺激下，TLR4信號通路會反復(fù)激活，刺激炎性因子表達(dá)升高，IL-37是炎癥因子的抑制劑，可以代償性的因炎癥因子增加而增加，IL-37介導(dǎo)負(fù)反饋調(diào)節(jié)來降低RA患者過度炎性反應(yīng)，因此TLR4陽性率與IL-37水平呈正相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，RA患者外周血中會出現(xiàn)TLR4陽性率高表達(dá)，也會出現(xiàn)IL-37水平表達(dá)升高，IL-37水平升高對患者具有一定保護(hù)作用，TLR4與IL-37存在正相關(guān)關(guān)系。

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[1]錢雷,藺昕,陳瑋，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單核細(xì)胞亞群的變化及其意義[J].中國免疫學(xué)雜志,2016,32(10):1519-1523,1531.

[2]楊新蕾,張卓莉.多種信號通路在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的研究進(jìn)展[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2016,20(7):498-500.

[3]陳歡雪,王曉非.白細(xì)胞介素37在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,43(3):275-276,283.

[4]李雪,栗占國.2015年亞洲太平洋地區(qū)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會聯(lián)盟類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療建議[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2016,20(4): 286-288.

[5]王貴,黃晶,徐慧慧,等.高遷移率族蛋白1和Treg細(xì)胞與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎,2016, 5(7):60-64.

[6]王麗.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素17、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子和腫瘤壞死因子α水平檢測的臨床意義[J].中國基層醫(yī)藥,2016,23(16):2454-2457.

[7]楊濱州,張育.維生素D與TLR、Tregs、Th17在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究進(jìn)展[J].實(shí)用藥物與臨床,2015, 18(9):1115-1118.

[8]孫淑銀,王穎翠.血清白細(xì)胞介素－37水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病及病情進(jìn)展的相關(guān)性[J].中國老年學(xué)雜志,2016,36 (20):5115-5117.

[9]姚茹冰,王圓圓,蔡輝,等.脂多糖對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血單核細(xì)胞Toll樣受體4、髓樣分化因子88蛋白表達(dá)的影響[J].安徽醫(yī)藥,2016,20(9):1673-1675.

[10]楊超,劉榮臻,張曉延,等.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清中IL-37水平變化的探索研究[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2014,12 (7):1035-1037.

Expression of TLR4 in Peripheral Blood of Patients with Rheumatoid Arthritis and Its Correlation with IL-37 Level

WAN Li-li1，WANG Xiao-dong2，CI Chun-zeng2
1.Weifang Medical University,Clinical Medicine College，Weifang,Shandong Province,261042 China；2.Affiliated Hospital of Weifang Medical University,Immune Department of rheumatism,Weifang,Shandong Province,261042 China

Objective To study the expression level of Toll like receptor 4(TLR4)in peripheral blood in rheumatoid arthritis(RA),and to observe the interleukin-37 (IL-37)correlation.Methods 45 patients with RA who were admitted to affiliated Hospital of Weifang Medical University from May 2015 to May 2016 were selected as the study group,another 21 patients with osteoarthritis of the same period were selected as osteoarthritis group,21 cases of healthy persons were as control group,the expression of TLR4 in peripheral blood was detected by flow cytometry,and to observe the correlation between the level of IL-37 and the level of.Results The positive rate of TLR4 and the level of IL-37 in the study group were（28.43±3.21）%and（78.56±8.97）ng/L,they were significantly higher than（10.21±4.32）%,（17.25±5.68）ng/L in the osteoarthritis group and（13.08±2.05）%,（10.08±2.56）ng/L in the control group,the difference was statistically significant(P＜0.05),there was no significant difference between the osteoarthritis group and the control group(P＞0.05);Correlation analysis showed that:the positive rate of TLR4 was positively correlated with IL-37 level.Conclusion TLR4 expression in peripheral blood of patients with RA are up regulation,and it is positively correlated with the level of IL-37.

Rheumatoid arthritis;Toll like receptor 4;Interleukin-37

R36

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.08

2016-10-21；

2016-11-25

萬麗麗（1989.8-），女，山東臨沂人，碩士，研究方向：風(fēng)濕病學(xué)。

慈春增（1962.4-），男，山東濰坊人，本科，主任醫(yī)師，研究方向：風(fēng)濕病學(xué)，E-mail：986779932@qq.com。