白宗利，樂(lè)智勇，盧翠敏，萬(wàn)薇，陳華師，董婧婧，許冬瑾

(1.康美(北京)藥物研究院有限公司，北京 102629；2.康美藥業(yè)股份有限公司，廣東 普寧 515300；3.廣東康美藥物研究院有限公司，廣東 廣州 510000)

不同粉碎度三七粒度分布和皂苷類成分溶出曲線研究△

白宗利1*，樂(lè)智勇1，2，盧翠敏1，萬(wàn)薇1，陳華師3，董婧婧3，許冬瑾2

(1.康美(北京)藥物研究院有限公司，北京 102629；2.康美藥業(yè)股份有限公司，廣東 普寧 515300；3.廣東康美藥物研究院有限公司，廣東 廣州 510000)

目的：比較市售三七破壁飲片、三七細(xì)粉與自制三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒的粒度分布和溶出曲線。方法：對(duì)三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒進(jìn)行粒度分布測(cè)定，采用HPLC法，以三七中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總含量為指標(biāo)，測(cè)定并繪制溶出曲線。結(jié)果：三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒樣品粒度分布d(0.9)分別為51.543、124.142、27.760、107.539 μm，在15 min四者的累積溶出量均達(dá)到85%以上。結(jié)論：三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1總含量的溶出曲線相似。

三七；中藥破壁飲片；細(xì)粉；粒度分布；溶出曲線

三七為五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根莖，具有散瘀止血、消腫定痛的功能[1]。楊連威等[2]報(bào)道，中藥超微粉碎后可提高藥物中有效組分的溶出率，增大藥物的生物利用度，有利于保存生物活性成分，節(jié)省藥材，降低藥物用量等[3]。本試驗(yàn)對(duì)某市售三七破壁飲片、三七細(xì)粉及自制三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒的粒度分布進(jìn)行研究，同時(shí)采用HPLC法測(cè)定溶出液主要有效成分人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總含量，繪制溶出曲線，考察三七破壁飲片3種皂苷總含量90 min內(nèi)的溶出行為，及其與三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒的溶出曲線差異。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀；AL204型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；RC806型溶出試驗(yàn)儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司)；MS2000型激光粒度儀(馬爾文)；WZJ-12A型振動(dòng)式藥物超微粉碎機(jī)(濟(jì)南倍力粉技術(shù)工程有限公司)。

1.2 試藥

某市售三七破壁飲片(批號(hào)：20140401)；某市售三七細(xì)粉(批號(hào)：140750491)；三七藥材(康美藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20140627)；人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品、三七皂苷R1對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110703-201128，110704-201223，110745-200516)；無(wú)水乙醇為分析純；甲醇、乙腈為色譜純[賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司]；純化水為自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

2.1.1 三七超微粉的制備 取三七藥材，打碎，先用萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，過(guò)80目，再將80目粉末用振動(dòng)式藥物超微粉碎機(jī)在振幅5.5 mm、工作溫度-15 ℃條件下粉碎30 min，即得三七超微粉。

2.1.2 三七細(xì)粉顆粒 取某市售三七細(xì)粉500 g，加80%的乙醇，24目制粒，70 ℃干燥，即得。

2.2 粒度分布

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部通則0982第三法粒度和粒度分布測(cè)定法(濕法測(cè)定)[4]，以市售三七細(xì)粉為樣品，考察濕法測(cè)定中的分散介質(zhì)、超聲時(shí)間、遮光度3個(gè)因素[5]，并測(cè)定市售三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒樣品的粒度分布。

2.2.1 分散介質(zhì)的選擇 取市售三七細(xì)粉適量，分別以水、20%乙醇、35%乙醇、50%乙醇、無(wú)水乙醇為分散介質(zhì)，超聲3 min，測(cè)定樣品粒度分布，結(jié)果見(jiàn)表1。由結(jié)果可知，用35%乙醇作為分散介質(zhì)即可達(dá)到良好的分散效果。

2.2.2 超聲時(shí)間的選擇 取市售三七細(xì)粉適量，以35%乙醇為分散介質(zhì)，分別超聲1、3、5 min，測(cè)定樣品粒度分布，結(jié)果見(jiàn)表2。由結(jié)果可知，選擇超聲時(shí)間3 min，既能保證樣品良好的分散性，又能降低溶脹現(xiàn)象。

表1 不同分散介質(zhì)三七細(xì)粉粒度分布測(cè)定結(jié)果

表2 不同超聲時(shí)間三七細(xì)粉粒度測(cè)定結(jié)果

2.2.3 遮光度考察 取市售三七細(xì)粉適量，以35%乙醇為分散介質(zhì)，超聲3 min，分別在3個(gè)不同遮光度下測(cè)定樣品的粒度分布，結(jié)果見(jiàn)表3。由結(jié)果可知，不同遮光度對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響不大，應(yīng)控制遮光度在10%～20%。

表3 不同遮光度三七細(xì)粉粒度分布測(cè)定結(jié)果

2.2.4 重復(fù)性 分別取適量的市售三七細(xì)粉3份，以35%乙醇為分散介質(zhì)，超聲3 min，在遮光度10%～20%測(cè)定樣品的粒度分布，結(jié)果見(jiàn)表4。由結(jié)果可知，該方法重復(fù)性良好。

表4 三七細(xì)粉粒度分布重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

2.2.5 樣品粒度分布測(cè)定 分別取三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒樣品適量，按2.2.4項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明，4種三七粉樣品粒度分布d(0.9)排序：三七超微粉<三七破壁飲片<三七細(xì)粉顆粒<三七細(xì)粉。

表5 市售三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒粒度分布測(cè)定結(jié)果 /μm

2.3 溶出曲線

以三七中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總含量為考察指標(biāo)，依照《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部附錄0931第二法溶出度與釋放度測(cè)定法(槳法)[4]對(duì)三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉及三七細(xì)粉顆粒的溶出曲線進(jìn)行測(cè)定并比較。

2.3.1 色譜條件 色譜柱為ZDRBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈作為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，程序詳見(jiàn)表6；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm[1]。

表6 梯度洗脫程序表

2.3.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取人參皂苷Rg110.28 mg、人參皂苷Rb110.32 mg、三七皂苷R12.63 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液制備 精密稱取不同粉碎程度的三七樣品約1 g，每個(gè)樣品平行取6份，按《中華人民共和國(guó)藥典》2015版規(guī)定，采用槳法進(jìn)行溶出試驗(yàn)，以純化水500 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，溫度為(37±0.5)℃，分別于5、10、15、20、30、60、90 min取樣5 mL，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。每次取樣后及時(shí)補(bǔ)足等量減失的溶出介質(zhì)。

2.3.4 溶出曲線測(cè)定 精密吸取100 μL供試品溶液，按2.3.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總含量為指標(biāo)，考察不同時(shí)間點(diǎn)的累積溶出量，繪制溶出曲線。結(jié)果見(jiàn)表7、圖1。結(jié)果表明，4種樣品的溶出速率排序：三七破壁飲片>三七細(xì)粉顆粒>三七超微粉>三七細(xì)粉。

表7 4種三七粉樣品溶出曲線測(cè)定結(jié)果(n=6)

圖1 三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒溶出曲線圖

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)某市售三七破壁飲片、三七細(xì)粉、自制三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒的粒度分布進(jìn)行測(cè)定，并以純水為溶出介質(zhì)，對(duì)樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總含量溶出曲線進(jìn)行考察。通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，三七超微粉的粒度分布d(0.9)最小，4種樣品的溶出曲線相似，其中三七破壁飲片的溶出速率較快。

粒度和粒度分布測(cè)定法規(guī)定：濕法測(cè)定用于測(cè)定混懸供試品或不溶于分散介質(zhì)的供試品；干法測(cè)定用于測(cè)定水溶性或無(wú)合適分散介質(zhì)的固態(tài)供試品[4]。因此，測(cè)定三七粉粒度分布用干法、濕法均可，但三七破壁飲片、三七細(xì)粉顆粒是由三七粉制粒而得，需通過(guò)濕法超聲使顆粒充分分散后測(cè)得粒度分布。為保持結(jié)果的一致性，選擇濕法作為本試驗(yàn)粒度分布測(cè)定方法，并對(duì)測(cè)定條件進(jìn)行初步考察。

在濕法測(cè)定前，已用干法測(cè)定三七細(xì)粉的粒度分布d(0.9)，為128.510 μm，作為濕法檢測(cè)結(jié)果的對(duì)照。對(duì)分散介質(zhì)考察時(shí)，發(fā)現(xiàn)以水為分散介質(zhì)測(cè)得粒度分布結(jié)果較大，可能是三七粉在水中發(fā)生了團(tuán)聚或吸水溶脹，影響測(cè)定結(jié)果；當(dāng)乙醇濃度增大到35%以上時(shí)，粒度分布濕法測(cè)定結(jié)果與干法接近，因此，選擇35%乙醇作為分散介質(zhì)具有良好的分散性，粒子能在其中良好分散，控制團(tuán)聚或溶脹現(xiàn)象，同時(shí)又降低檢測(cè)成本。隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，樣品的遮光度略微增大，可能也是受樣品吸水溶脹的影響。超聲時(shí)間的選擇應(yīng)既能讓樣品在分散介質(zhì)中充分分散，又要控制吸水溶脹對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。鑒于濕法測(cè)定存在溶脹問(wèn)題，因而單獨(dú)對(duì)三七粉體粒度進(jìn)行測(cè)定時(shí)，建議用干法測(cè)定為宜。

三七類產(chǎn)品通常吞服或沖泡服用，因此，選擇水為溶出介質(zhì)對(duì)三七破壁飲片、三七細(xì)粉、三七超微粉、三七細(xì)粉顆粒的溶出行為進(jìn)行比較。試驗(yàn)中三七破壁飲片、三七細(xì)粉顆粒溶出速度優(yōu)于三七細(xì)粉、三七超微粉。說(shuō)明三七細(xì)粉、三七超微粉作為粉體在溶出過(guò)程中因?yàn)楸缺砻娣e大、表面能高出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象，不能被溶出介質(zhì)快速潤(rùn)濕分散，阻礙了有效成分的溶出[6]，而制成顆粒的三七破壁飲片、三七細(xì)粉顆粒能夠克服上述問(wèn)題，獲得良好的溶出效果。但在實(shí)際服用過(guò)程中，有效成分的吸收可能會(huì)受到胃酸、酶類及胃排空的影響。無(wú)論溶出的快慢，在時(shí)間足夠的情況下，有效成分的利用率是否有顯著差別，尚需通過(guò)相關(guān)研究來(lái)證實(shí)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2] 楊連威，趙曉燕，李婷，等.中藥超微粉碎后對(duì)其性能的影響研究[J].世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2008，10(6)：77-81.

[3] 羅剛，陳立庭，周晶.超微粉碎技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2011，26(2)：108-112.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[5] 陳勇軍，梁學(xué)良，錢錦花，等.激光法檢測(cè)中藥破壁飲片粒度的影響因素探討[J].今日藥學(xué)，2014，24(2)：102-105.

[6] 吳小明，梁少瑜，程文勝，等.三七普通細(xì)粉與超微粉中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1及人參皂苷Rg1體外溶出行為的比較研究[J].中草藥，2013，44(24)：3489-3492.

StudyonDifferentParticleDiametersandDissolutionProfilesofPanaxnotoginseng

BAI Zongli1*，LEZhiyong1，2，LUCuimin1，WANWei1，CHENHuashi1，XUDongjin2

(1.BeijingKangmeiPharmaceuticalResearchInstituteCo.Ltd，Beijing102629，China;2.KangmeiPharmaceuticalCo.Ltd.，Puning515300，China;3.GuangdongKangmeiPharmaceuticalResearchInstituteCo.Ltd.，Guangzhou510000，China)

Objective：To compare the particle size distribution and dissolution curves of cellwall-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles.Methods：The particle size distribution of cellwall-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles was detected.HPLC method was used for determination of three saponins including ginsenoside Rg1and Rb1，notoginsenoside R1，the dissolution curves were drawn.Results：The particle size distribution d(0.9)of cell-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles were 51.543，124.142，27.760 and 107.539 μm，respectively.The dissolution rates exceeded 85% within 15 min.Conclusion：The dissolution curves of three saponins including ginsenoside Rg1and Rb1，notoginsenoside R1of cellwall-broken pieces of notoginseng，notoginseng common powder，notoginseng micropowder and notoginseng particles were similar.

Panaxnotoginseng；cellwall-broken pieces of traditional Chinese medicine；common powder；particle size distribution；dissolution curves

2015-05-07)

廣東省創(chuàng)新型企業(yè)院線提升計(jì)劃項(xiàng)目(2013B07032007)

*

白宗利，中藥制藥工程師，研究方向：中藥炮制飲片工藝及質(zhì)量研究；E-mail：3050471@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.3.024