張永根，王一臻，李　洋，張幸怡，林　聰，張廣寧

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱　150030）

地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃發(fā)酵、微生物區(qū)系及血液生化指標(biāo)影響

張永根，王一臻，李洋，張幸怡，林聰，張廣寧

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱150030）

選擇四頭體重600 kg裝有永久性瘤胃瘺管荷斯坦奶牛，試驗(yàn)分為4組，分別為基礎(chǔ)日糧組及基礎(chǔ)日糧+10、20和30 g地頂孢霉培養(yǎng)物組（干物質(zhì)基礎(chǔ)）。采用4×4拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共4期，每期15 d。日糧中添加地頂孢霉培養(yǎng)物可降低瘤胃液pH，提高瘤胃中NH3-N、TVFA、乙酸和丙酸濃度并調(diào)節(jié)瘤胃部分微生物相對菌群數(shù)量，同時(shí)增加血液中血糖和球蛋白濃度，降低β-羥丁酸、非酯化脂肪酸和谷丙轉(zhuǎn)氨酶濃度。地頂孢霉培養(yǎng)物可改善瘤胃發(fā)酵環(huán)境，維持瘤胃代謝穩(wěn)定，對奶牛機(jī)體無不良影響。結(jié)果表明，30 g·頭-1·d-1為最適添加量。

地頂孢霉培養(yǎng)物；奶牛；瘤胃發(fā)酵；微生物區(qū)系；血液生化參數(shù)

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間2016-8-24 15:04:00[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20160824.1504.018.html

張永根,王一臻,李洋,等.地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃發(fā)酵和微生物區(qū)系及血液生化指標(biāo)影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,47 (8):60-66.

Zhang Yonggen,Wang Yizhen,Li Yang,et al.Effect ofAcremonium terricolaculture on ruminal fermentation,microflora and blood biochemical parameters in dairy cows[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(8):60-66.(in Chinese with English abstract)

補(bǔ)充外源添加劑可調(diào)控瘤胃微生物區(qū)系生長，改善瘤胃發(fā)酵功能[1]?？股仡愄砑觿?yīng)用受限，非抗生素飼料添加劑開發(fā)受關(guān)注[2]。因此，找到一種改善瘤胃發(fā)酵功能、調(diào)控瘤胃微生物作用的新型非抗生素飼料添加劑具有重要意義。

古尼蟲草是寄生于土中的蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲復(fù)合體[3]。其藥理成分與冬蟲夏草相似，包括蟲草多糖、蛋白質(zhì)和氨基酸、D-甘露醇、蟲草素、生物堿、抗菌活性物質(zhì)、免疫抑制劑等[4]。但價(jià)格昂貴限制其在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用。地頂孢霉培養(yǎng)物是由古尼蟲草提取的地頂孢霉菌SDAY培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)后，經(jīng)察氏培養(yǎng)基液體擴(kuò)大培養(yǎng)和固體發(fā)酵室培養(yǎng)得到滅活的真菌飼料添加劑，由于功能性成分相似，可作為天然古尼蟲草替代物質(zhì)。魏建忠等研究表明，地頂孢霉培養(yǎng)物能加快仔豬生長速率并提高仔豬免疫能力[5]。蟲草素能促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，加強(qiáng)體液免疫應(yīng)答，具有很強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)功能[6]。地頂孢霉培養(yǎng)物能提高蛋鴨體重、產(chǎn)蛋率、改善鴨蛋品質(zhì)，顯著增加蛋殼厚度[7-8]。Joonmo等指出，蟲草菌絲體（與地頂孢霉培養(yǎng)物成分相似）可改善奶牛瘤胃微生物發(fā)酵功能，提高產(chǎn)氣量和瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸（VFA）濃度，促進(jìn)纖維素濾紙消化[9]，增加瘤胃微生物纖維分解菌和纖維素酶活性[10]。國內(nèi)研究多針對地頂孢霉培養(yǎng)物對仔豬及蛋鴨影響，反芻動(dòng)物方面，特別是有關(guān)地頂孢霉培養(yǎng)物對瘤胃發(fā)酵和微生物區(qū)系影響研究相對較少。本試驗(yàn)旨在研究地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃發(fā)酵、瘤胃微生物區(qū)系和血液生化指標(biāo)影響，確定地頂孢霉培養(yǎng)物調(diào)控效果與適宜劑量，為地頂孢霉培養(yǎng)物在奶牛業(yè)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物和日糧組成

地頂孢霉培養(yǎng)物（Acremonium terricola culture，ATC）購自合肥邁可羅生物工程有限公司，是由古尼蟲草中提取地頂孢霉菌經(jīng)人工發(fā)酵得到滅活的真菌類添加劑，含有26.84%粗蛋白（CP），5.00%粗纖維（CF），3.06%粗脂肪（EE），4.04%粗灰分（Ash）和61.06%無氮浸出物（NFE），干物質(zhì)基礎(chǔ)。其中功能性成分含量為：蟲草酸84.50 g·kg-1，蟲草多糖44.60 g·kg-1，蟲草素0.432 g·kg-1，甾醇0.597 g·kg-1，總氨基酸218.1 g·kg-1。

試驗(yàn)選用4頭裝有永久性瘤胃瘺管的健康荷斯坦奶牛，體重均在600 kg，拴飼。預(yù)試期與正式期日糧一致，玉米青貯，羊草及苜蓿作粗飼料。先粗后精，于每日早晚6:00準(zhǔn)確飼喂日糧，全天自由飲水，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平Table 1　Ingredient and chemical composition of the diet

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用4×4拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分為A組、B組、C組和D組。A組：基礎(chǔ)日糧；B組：基礎(chǔ)日糧+10 g地頂孢霉培養(yǎng)物（干物質(zhì)基礎(chǔ)）/天；C組：基礎(chǔ)日糧+20 g地頂孢霉培養(yǎng)物/天；D組：基礎(chǔ)日糧+30 g地頂孢霉培養(yǎng)物/天。預(yù)飼期晨飼前，將地頂孢霉培養(yǎng)物與100 g基礎(chǔ)日糧混合，預(yù)飼奶牛，完全采食后繼續(xù)飼喂其他基礎(chǔ)日糧[11]，試驗(yàn)分4期，每期預(yù)飼期15 d，正式期3 d。

1.3樣品采集和指標(biāo)測定

1.3.1樣品采集與保存

分別于正式期3 d內(nèi)，晨飼后0、2、4、6、8、10和12 h對試驗(yàn)牛取瘤胃液50 mL，4層紗布過濾并當(dāng)場測定瘤胃液pH，離心后采集上清液存放于10 mL離心管，加入25%偏磷酸1 mL固氮，于-20℃冰箱保存，待測瘤胃液VFA和NH3-N濃度。

于正式期3 d內(nèi)，對所有牛頸靜脈采血10 mL，1次性真空采血管（規(guī)格：無添加劑管）收集，離心制得血漿，5 mL離心管收集，-20℃冷凍保存，待測血液生化指標(biāo)。

1.3.2瘤胃液pH測定

采樣后立即測定pH，儀器采用Sartorius Basic pH Meter PB-20型酸度計(jì)。

1.3.3瘤胃液NH3-N測定

瘤胃液NH3-N采用馮宗慈等比色法測定[12]。

1.3.4瘤胃液VFA濃度測定

氣相色譜儀(島津GC-2010，日本)測定瘤胃液中TVFA、乙酸、丙酸和丁酸含量[13]。

1.3.5血液生化指標(biāo)測定

采用意大利Fully全自動(dòng)生化分析儀測定血清生化指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST），甘油三酯（TG），膽固醇（CHOL），高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），血清尿素氮（BUN）和血糖（GLU），總蛋白（TP），白蛋白（ALB），球蛋白（GLB），堿性磷酸酶（ALP），β-羥丁酸（BH?BA），非酯化脂肪酸（NEFA）。試劑盒均購自北京中生北控生物科技股份有限公司，具體方法參見試劑盒說明書。

1.3.6瘤胃原蟲數(shù)量和菌群測定

于正式期最后2 d，晨飼后0、2、4、6、8、10和12 h采集瘤胃液，檢測瘤胃細(xì)菌數(shù)量。采用珠磨-十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法提取瘤胃液總DNA[14]。風(fēng)干后DNA溶于TE緩沖液，于-20℃待測。紫外可見分光光度計(jì)測定所提取總DNA濃度和純度，確保OD260與OD280比值在1.6～1.8。通過熒光定量PCR方法檢測瘤胃液總菌，普雷沃氏菌（Prevotella），黃色瘤胃球菌（Ruminococcus flavefa?ciens），白色瘤胃球菌（Ruminococcus albus），產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌（Fibrobacter succinogenes），牛鏈球菌（Streptococcus bovis），溶纖維丁酸弧菌（Butyrivibrio fibrisolvens）和原蟲（Protozoal population）相對含量，引物參考文獻(xiàn)[15]，全序列引物見表2。熒光定量所用儀器為ABI 7500型熒光定量PCR儀，Realtime PCR SYBR Green I RT-PCR試劑盒購自大連寶生物公司。Real-time PCR擴(kuò)增反應(yīng)參數(shù)包括95℃變性7 min，55℃1 min，72℃3 min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸7 min。

根據(jù)測得閾值循環(huán)（Ct），計(jì)算目標(biāo)菌的相對菌群數(shù)量（Relative population size，RPS）[16]。

表2　熒光定量PCR引物Table 2　Primers used for RT-PCR detection of microbial species

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

按照4×4拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)，采用SAS 9.1.2軟件包中PROC MIXED程序作數(shù)據(jù)分析。

模型如下：

其中，Yijk為因變量值，μ為總體平均值，Ti為處理（i=1-3），Pj為試驗(yàn)期（j=1-3），Ck為試驗(yàn)牛（k=1-3），Eijk為殘差值。

P<0.05代表差異顯著，結(jié)果用平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2　結(jié)果與分析

2.1地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃發(fā)酵影響

地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃發(fā)酵影響見表3，與A組相比，B、C、D組極顯著提高瘤胃中NH3-N濃度，C組和D組提高瘤胃液中總揮發(fā)酸（TVFA）和乙酸濃度且差異極顯著（P<0.01），其中D組極顯著提高瘤胃液中丙酸濃度（P<0.01）并顯著降低瘤胃pH（P< 0.05）。丁酸濃度各組間無顯著差異（P>0.05）。

2.2地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃菌群影響

由表4可知，與A組相比，D組可顯著提高瘤胃中原蟲相對菌群數(shù)量（P<0.05），其他各組差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)組黃色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌和溶纖維丁酸弧菌相對菌群數(shù)量極顯著高于A組（P<0.01），其中D組黃色瘤胃球菌相對數(shù)量極顯著高于B組（P<0.01），白色瘤胃球菌和溶纖維丁酸弧菌各試驗(yàn)組間差異不顯著（P>0.05）。C組和D組普雷沃氏菌和牛鏈球菌相對數(shù)量極顯著高于A組（P<0.01）。但與A組相比，試驗(yàn)組產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌相對數(shù)量極顯著降低（P<0.01）。

2.3地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛血液生化指標(biāo)影響

由表5可知，地頂孢霉培養(yǎng)物可極顯著提高奶牛血液中血糖濃度（P<0.01）。B組、C組和D組血糖濃度極顯著高于A組（P<0.01），其中C組和D組血液中球蛋白濃度極顯著高于A組（P<0.01），但B組和A組相比無顯著差異。C組和D組顯著降低血液中β-羥丁酸濃度（P<0.05），其中D組顯著降低血液中非酯化脂肪酸和谷丙轉(zhuǎn)氨酶濃度（P<0.05）。此外，添加地頂孢霉培養(yǎng)物可提高血液中堿性磷酸酶濃度，但各組間差異不顯著（P>0.05）。

綜合以上分析可知，地頂孢霉培養(yǎng)物最佳添加量為30 g·頭-1·d-1。

表3　地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃發(fā)酵影響Table 3　Effects of Acrermonium terricola culture on ruminal fermentation in dairy cows

表4　地頂孢霉培養(yǎng)物對瘤胃微生物影響Table 4　Effects of Acremonium terricola culture on ruminal microflora

表5　地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛血液生化指標(biāo)影響Table 5　Effects of Acrermonium terricola culture on the blood biochemical parameters of dairy cows

3　討論與結(jié)論

3.1地頂孢霉培養(yǎng)物對瘤胃發(fā)酵影響

評價(jià)瘤胃發(fā)酵效率一般采用瘤胃pH、VFA和NH3-N濃度及瘤胃菌群數(shù)量等指標(biāo)[17]。瘤胃微生物結(jié)構(gòu)與數(shù)量是決定瘤胃發(fā)酵功能重要因素，瘤胃微生物對日糧蛋白質(zhì)降解與自身合成速度直接影響NH3-N濃度[18]。研究表明，瘤胃微生物活性較強(qiáng)時(shí)產(chǎn)生相對較多VFA[17]。揮發(fā)酸產(chǎn)量則直接決定pH。

pH是評價(jià)瘤胃發(fā)酵狀況綜合性指標(biāo)，主要受唾液、日糧組成、瘤胃中揮發(fā)性脂肪酸和可消化碳水化合物等因素影響。本試驗(yàn)中，乙酸濃度、黃色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌與原蟲相對菌群數(shù)量均顯著升高，最大劑量組pH降低可能由于地頂孢霉培養(yǎng)物促進(jìn)原蟲和部分纖維分解菌增殖，提高日糧中纖維降解產(chǎn)生大量揮發(fā)酸所致。Krause等指出，瘤胃中VFA濃度增加也可導(dǎo)致瘤胃pH下降[19-20]。Yeo等研究表明，具有與地頂孢霉培養(yǎng)物相同功能性成分的蛹蟲草菌絲能增加瘤胃體外產(chǎn)氣量和揮發(fā)酸產(chǎn)量，降低瘤胃pH[10]，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

NH3-N是瘤胃微生物生長繁殖所需主要氮源之一，濃度反映瘤胃細(xì)菌微生物對NH3-N利用速度和日糧中氮降解速度平衡關(guān)系[21]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組普雷沃氏菌和原蟲數(shù)量高于對照組，NH3-N濃度提高由于地頂孢霉培養(yǎng)物促進(jìn)普雷沃氏菌和原蟲增殖。研究表明，普雷沃氏菌在蛋白降解菌中數(shù)量最多[22]。原蟲也參與蛋白降解過程[23]。因此，地頂孢霉培養(yǎng)物調(diào)節(jié)部分瘤胃微生物菌群數(shù)量改善日糧中蛋白質(zhì)降解程度。另一方面，地頂孢霉培養(yǎng)物含有豐富蛋白質(zhì)、氨基酸等重要功能性成分[6]，日糧中添加地頂孢霉培養(yǎng)物可提高瘤胃中微生物可利用蛋白濃度，使更多蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為NH3-N，提高瘤胃內(nèi)NH3-N濃度。

瘤胃發(fā)酵是反芻動(dòng)物獨(dú)特的營養(yǎng)生理功能，VFA可直接評價(jià)瘤胃發(fā)酵功能[17]。瘤胃內(nèi)VFA產(chǎn)生菌代謝能力增強(qiáng)或數(shù)量增加可提高瘤胃VFA濃度，增加碳水化合物降解速率[22]，改善瘤胃內(nèi)環(huán)境。因此，本試驗(yàn)中，瘤胃TVFA、乙酸和丙酸濃度提高可能與地頂孢霉培養(yǎng)物對原蟲和部分纖維分解菌和非纖維分解菌相對數(shù)量增殖作用有關(guān)。黃色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌、普雷沃氏菌和原蟲在改善瘤胃發(fā)酵功能方面發(fā)揮重要作用，以上菌種相對數(shù)量顯著提高改善瘤胃發(fā)酵功能，提高飼料營養(yǎng)物質(zhì)瘤胃降解速率[22]，產(chǎn)生大量乙酸、丙酸。Yeo等通過體外發(fā)酵試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蛹蟲草菌絲能顯著提高體外產(chǎn)氣量和揮發(fā)酸產(chǎn)量[10]，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

3.2地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛瘤胃菌群影響

瘤胃內(nèi)微生物主要包括原蟲和瘤胃細(xì)菌、真菌等。對反芻動(dòng)物而言，瘤胃微生物數(shù)量和結(jié)構(gòu)與粗飼料消化利用關(guān)系密切。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加地頂孢霉培養(yǎng)物提高部分纖維分解菌和非纖維分解菌數(shù)量，但產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌數(shù)量卻有所降低。Ahn等指出，蟲草素和蟲草菌絲與某些次級代謝產(chǎn)物具有抑制產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌生長作用[24-25]，證明地頂孢霉培養(yǎng)物可調(diào)節(jié)瘤胃菌群結(jié)構(gòu)，改善瘤胃內(nèi)環(huán)境。Yeo等通過體外發(fā)酵試驗(yàn)證明蛹蟲草菌絲能增加瘤胃內(nèi)總微生物數(shù)量，提高纖維分解菌數(shù)量和纖維酶活性[10]。蟲草類物質(zhì)及功能性成分具有增加益生菌數(shù)量潛力[26]。通過上述分析，可推斷日糧中添加地頂孢霉培養(yǎng)物能提高奶牛瘤胃中部分纖維分解菌和非纖維分解菌數(shù)量，促進(jìn)日糧中營養(yǎng)物質(zhì)分解，提高日糧在瘤胃中發(fā)酵潛力，但作用機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

3.3地頂孢霉培養(yǎng)物對奶牛血液生化指標(biāo)影響

GLU和NEFA、BHBA是衡量反芻動(dòng)物能量狀態(tài)重要指標(biāo)。研究表明，血液中高濃度NEFA和BHBA屬于酮病病理學(xué)特征[27-28]。血液中NEFA和BHBA濃度升高是能量負(fù)平衡主要特征，同時(shí)血糖濃度降低，使奶牛免疫力下降，影響奶牛生產(chǎn)性能。李國鵬指出，低GLU會導(dǎo)致血液中NEFA和BHBA升高[29]。遲景波發(fā)現(xiàn)，奶牛血液中GLU濃度與NE?FA和BHBA濃度呈負(fù)相關(guān)[30]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，地頂孢霉培養(yǎng)物可顯著降低血液中NEFA和BHBA濃度，可能是由于地頂孢霉培養(yǎng)物可改善奶牛機(jī)體能量負(fù)平衡狀態(tài)。因此推測GLU升高是NEFA和BHBA濃度降低關(guān)鍵。NEFA為TG分解產(chǎn)物，蟲草多糖能保持TG較低水平，并預(yù)防肝臟疾病和心血管疾病[31]。本試驗(yàn)中，B、C、D 3組TG含量降低，也可能由于地頂孢霉培養(yǎng)物對TG低水平維持作用導(dǎo)致其分解產(chǎn)物NEFA濃度相對降低。

正常情況下，血液中ALT和AST含量較低。血液中ALT和AST含量升高一般緣于貯藏于肝臟中ALT和AST釋放作用[32]。地頂孢霉培養(yǎng)物中蟲草多糖等功能性成分是D組血漿中ALT濃度顯著降低主要原因。余伯成等發(fā)現(xiàn)，蟲草多糖能抑制ALT和AST釋放，顯著降低ALT和AST活力水平，使肝細(xì)胞存活率上升[31]，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。

動(dòng)物機(jī)體肝臟合成是血清中蛋白主要來源，肝臟受損可能導(dǎo)致血清中蛋白含量降低，注射免疫抑制劑(環(huán)磷酰胺)會致使小鼠總蛋白、球蛋白、白蛋白降低[33]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，地頂孢霉培養(yǎng)物可提高奶牛血漿中球蛋白含量。余伯成等指出，蛹蟲草多糖能顯著降低環(huán)磷酰胺對小鼠免疫抑制作用，提高環(huán)磷酰胺所致免疫損傷小鼠血清蛋白含量，保護(hù)肝臟[31]，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。

[1]祁茹,趙軍,孫建鳳,等.提高反芻動(dòng)物粗飼料利用率的營養(yǎng)措施[J].中國奶牛,2011(13):33-37.

[2]王洪榮,陳旭偉,王夢芝.茶皂素和絲蘭皂苷對山羊人工瘤胃發(fā)酵和瘤胃微生物的影響[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,44(8):1710-1719.

[3] 中華人民共和國.中華人民共和國藥典1963年版一部[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1964.

[4]劉彥威,劉娜,劉利強(qiáng).冬蟲夏草有效成分的研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2004,25(3):51-53.

[5]魏建忠,張瑋,李郁,等.地頂孢霉培養(yǎng)物對保育仔豬生產(chǎn)性能及免疫水平的影響[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(2):33-35.

[6]Wu W C,Hsiao J R,Lian Y Y,et al.The apoptotic effect of cordy?cepin on human OEC-M1 oral cancer cell line[J].Cancer Chemo?therapy&Pharmacology,2007,60(1):103-111.

[7] 姜明君.籠養(yǎng)蛋雞鈣代謝對蛋殼質(zhì)量的影響及其機(jī)制研究[D].泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

[8]孫漢巨,李曉祥,丁琦,等.蟲草飼料添加劑對蛋鴨生產(chǎn)性能及鴨蛋品質(zhì)的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(6):3618-3620.

[9]Joonmo Y,Shinja L,Sangmin L,et al.Effects of cordyceps militar?is mycelia on in vitro rumen microbial fermentation[J].Asian-Australasian Journal of Animal Sciences,2009,22(2):201-205.

[10]Yeo J M,Lee S J,Shin S H,et al.Effects of cordyceps militaris mycelia on fibrolytic enzyme activities and microbial populations in vitro[J].Asian Australasian Journal of Animal Sciences,2011, 24(24):364-368.

[11]Sun P,Wang J Q,Deng L F.Effects of Bacillus subtilis natto on milk production,rumen fermentation and ruminal microbiome of dairy cows[J].Animal An International Journal of Animal Biosci?ence,2013,7(2):216-222.

[12]馮宗慈,高民.通過比色測定瘤胃液氨氮含量方法的改進(jìn)[J].畜牧與飼料科學(xué),2010(6):37-37.

[13]Erwin S,Marco G J,Eemery E M.Volatile fatty acid analyses ofblood and rumen fluid by gas chromatography[J].Journal of Dairy Science,1961,44(9):1768-1771.

[14]Zhong T Y,Mark M.Improved extraction of PCR-quality commu?nity DNA from digesta and fecal samples[J].Biotechniques,2004, 36(5):808-812.

[15]Ehsan K,Shoucong L,Plaizier J C,et al.Rumen microbiome com?position determined using two nutritional models of subacute ru?minal acidosis[J].Applied&Environmental Microbiology,2009, 75(22):7115-7124.

[16]辛杭書,段春宇,張永根,等.飼糧中添加海南霉素對奶牛瘤胃微生物區(qū)系的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2012,24(11):2249-2256.

[17]王洪榮,秦韜,王超.青蒿素對山羊瘤胃發(fā)酵和微生物氮素微循環(huán)的影響[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,47(24):4904-4914.

[18] 劉彩娟,孫滿吉,孫金艷,等.飼糧中添加復(fù)合益生菌對奶牛瘤胃發(fā)酵及纖維素酶活的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2011,23(5): 821-827.

[19]Krause K M,Oerzel G R.Understanding and preventing subacute ruminal acidosis in dairy herds:a review[J].Animal Feed Science &Technology,2006,126(3):215-236.

[20]Khafipour,Krause D O,Plaizier J C.A grain-based subacute ru?minal acidosis challenge causes translocation of lipopolysaccha?ride and triggers inflammation[J].Journal of Dairy Science,2009, 92(3):1060-1070.

[21]Devant M,Ferret A,Gaea J,et al.Effects of protein concentration and degradability on performance,ruminal fermentation,and ni?trogen metabolism in rapidly growing heifers fed high-concen?trate diets from 100 to 230 kg body weight[J].Journal of Animal Science,2000,78(78):1667-1676.

[22]馮仰廉.反芻動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2006.

[23]Nolan J V.Implications of protozoa and fungi for the protein nutri? tion of ruminants-invited review[C]//Australia:Oecd/une Inter?national Symposium.1989:211-221

[24]Ahn Y J,Park S J,Lee S G,et al.Cordycepin:selective growth in?hibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp.[J].Journal of Agricultural&Food Chemistry, 2000,48(7):2744-2748.

[25]Yeon S H,Kim J R,Ahn Y J.Comparison of growth-inhibiting ac?tivities of Cordyceps militaris and Paecilomyces japonica cultured on Bombyx mori pupae towards human gastrointestinal bacteria [J].Journal of the Science of Food&Agriculture,2006,87(1):54-59.

[26]Koh J H,Suh H J,Ahn T S.Hot-water extract from mycelia of Cordyceps sinensis as a substitute for antibiotic growth promoters [J].Biotechnology Letters,2003,25(7):585-590.

[27]張玉明.NEFAs和BHBA對奶牛中性粒細(xì)胞TLR2/4-NF-κB信號通路的影響[D].長春:吉林大學(xué),2015.

[28]Roche J R,Sheahan A J,Chagas L M,et al.Short communication: change in plasma ghrelin in dairy cows following an intravenous glucose challenge[J].Journal of Dairy Science,2008,91(91): 1005-1010.

[29]李國鵬.圍產(chǎn)期奶牛低血糖癥、高酮血癥、亞臨床低鈣血癥血液生化指標(biāo)的監(jiān)測[D].長春:吉林大學(xué),2015.

[30]遲景波.圍產(chǎn)期酮病、脂肪肝奶牛血液生化指標(biāo)的研究[D].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2007.

[31]余伯成,唐亮,茅孝先,等.蟲草多糖藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].世界科學(xué)技術(shù):中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2011,13(3):585-590.

[32]李洋.濕玉米纖維飼料對奶牛瘤胃代謝特性和血液生化指標(biāo)的影響[D].哈爾濱:東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2014.

[33]江南,劉翠霞,但漢雄,等.甘草酸二銨對大鼠環(huán)磷酰胺損傷的保護(hù)作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004,9(3):326-328.

EffectofAcremoniumterricolacultureonruminalfermentation, microflora and blood biochemical parameters in dairy cows/ZHANG

Yonggen,WANG Yizhen,LI Yang,ZHANG Xingyi,LIN Cong,ZHANG Guangning(School of Animal Science and Technology,NortheastAgricultural University,Harbin 150030,China)

Four ruminally cannulated multiparous Holstein cows averaging 600 kg of body weight were used in a 4×4 latin square design.Trials were basal diet group and basal diet+10,20 and 30 g ACT (dry matter basis),each lasting 15 d,a total of four supplementation of ATC could reduce the rumen pH, improve concentration of NH3-N,TVFA,acetate and propionate,and regulate relative population size of ruminal microorganism.Supplementation of ATC could improve the concentration of blood glucose and globulin,and reduce the concentration of beta hydroxybutyric acid,non-esterified fatty acid and alanine aminotransferase.The ATC could improve rumen fermentation and maintain stabilization of rumen metabolism,without adverse effects to dairy cow.In the present study,the optimal dose was 30 g·cow-1·d-1.

Acremonium terricolaculture;dairy cow;ruminal fermentation;microflora;blood biochemical parameters

S816

A

1005-9369（2016）08-0060-07

2016-06-07

國家奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-37）

張永根（1962-），男，教授，博士，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)榉雌c動(dòng)物生產(chǎn)。E-mail:zhangyonggen@sina.com