趙菊芳，韋麗琴，郝金奇，侯瑞麗，趙若望，黃倩，鄧樂(lè)樂(lè)

包頭醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014060

*病理研究*

蒙古族結(jié)核患者藥物代謝酶GST基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物致肝損傷的關(guān)系研究

趙菊芳，韋麗琴，郝金奇，侯瑞麗，趙若望，黃倩，鄧樂(lè)樂(lè)

包頭醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014060

目的 研究蒙古族結(jié)核病患者GSTM1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物致肝損傷的關(guān)系以及其他可能易感因素。方法2015年6月—2016年6月在內(nèi)蒙古通遼市結(jié)核病防治所收集蒙古族結(jié)核患者85例，追蹤肝功能檢查結(jié)果至少3個(gè)月（ALT≥2 UL），其中出現(xiàn)肝損傷者為病例組21例，未出現(xiàn)肝損傷者為對(duì)照組64例，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）對(duì)GSTM1基因進(jìn)行分型。結(jié)果85例研究對(duì)象中病例組GSTM1缺失基因型11例，對(duì)照組GSTM1缺失基因型35例，GSTM1缺失基因型在兩組間分布沒(méi)有差別。結(jié)論 未發(fā)現(xiàn)蒙古族結(jié)核患者人群中GSTM1缺失基因型與抗結(jié)核藥物致肝損傷的發(fā)生有關(guān)，檢驗(yàn)效能1-β=0.7157。

蒙古族；ATLI；GSTM1；基因多態(tài)性

肺結(jié)核是嚴(yán)重危害人類健康的傳染病之一，也是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，近幾年由于各種原因，結(jié)核病的發(fā)病率又呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。然而我國(guó)是全球第2大結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家，僅低于印度。結(jié)核病中肺結(jié)核是最常見(jiàn)、最為人們所熟知。肺結(jié)核是由結(jié)核桿菌引起的一種慢性呼吸道傳染病，是威脅人類生命健康的主要疾病之一。目前，全球有活動(dòng)性肺結(jié)核病人大約為2 000萬(wàn)，且每年有超過(guò)300萬(wàn)人死于肺結(jié)核[1,2]。根據(jù)2010全國(guó)第5次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告數(shù)據(jù)顯示[3]，我國(guó)肺結(jié)核患者高達(dá)499萬(wàn)，較2000年有所增加。目前肺結(jié)核的一般治療以異煙肼（INH）、利福平（RIF）、吡嗪酰胺（PZA）為主的三聯(lián)用藥，這3種藥物會(huì)引起不同程度的藥物性不良反應(yīng)，其中最嚴(yán)重的不良反應(yīng)為肝損傷[4]。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象和標(biāo)本收集

在內(nèi)蒙古通遼市結(jié)核病防治所收集蒙古族結(jié)核病患者抗凝靜脈血，追蹤肝功能檢查結(jié)果至少3個(gè)月，其中出現(xiàn)肝損傷者為病例組21例，未出現(xiàn)肝損傷者為對(duì)照組64例。病例的選擇：①經(jīng)臨床診斷確診的肺結(jié)核患者且為第1次治療；②結(jié)核桿菌染色陽(yáng)性；③抗結(jié)核治療有效、排除其它肺部疾??；病例的排除:①患肺結(jié)核前存在肝功能異常；②既往有肝炎、肝癌等肝病史者；③近三月服用影響肝功能的藥物；④其他影響肝功能的全身性疾病。所有入選實(shí)驗(yàn)患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 基因的提取及聚合酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）

利用人類全血基因組DNA提取試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)提取全血基因組DNA。提取的DNA于-20℃保存?zhèn)溆?。從NCBI中查詢獲得GSTM1基因序列，利用引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)并合成引物，引物序列如下：上游引物：5'-GAACTCCCTGAATAGCTAAAGC-3'；下游引物：5'-GTTGGGCTCATATATACGGTGG-3'；白蛋白為陽(yáng)性內(nèi)對(duì)照，引物序列為：上游引物：5'-GCCCTCTGCTAACAAGTCCTAC-3'，下游引物：5'-GCCCTAAAAAGAAAATCGCCAATC-3'。PCR反應(yīng)體系（50 uL）：50 uLPCR反應(yīng)體系中兩對(duì)引物各1 uL，模板DNA1 uL，ddH2O20 uL，2×TaqMasterMi×25 uL。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，94℃變性55 s，58℃退火45 s，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)后72℃延伸10 min。電泳條件：用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物，電泳緩沖液為0.5倍Tris-硼酸緩沖液（TBE），電泳電壓為100 V，電泳25 min，在凝膠成像儀觀察結(jié)果，將結(jié)果記錄并分析。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

該研究采用病例對(duì)照研究，病例組21例，對(duì)照組64例，肝損傷的發(fā)生率為24.7%（21/85）。年齡構(gòu)成：病例組平均年齡為56.39歲，對(duì)照組平均年齡為57.48歲；性別構(gòu)成：病例組男性15例，女性6例，男女比例為2.5：1；對(duì)照組男性45例，女性19例，男女比例約為2.4:1；吸煙飲酒情況：病例組吸煙5例，飲酒16例；對(duì)照組吸煙14例，飲酒50例；性別、吸煙、飲酒在病例組和對(duì)照組間分布均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 GSTM1基因型的分布

85例蒙古族結(jié)核病患者中，GSTM1缺失基因型為46例，占54.1%，其中男性32例，女性14例；GSTM1非缺失基因型為39例，占45.9%，其中男性28例，女性11例；GSTM1基因型在病例組和對(duì)照組間分布，其中病例組GSTM1非缺失基因型10例，GSTM1缺失基因型11例；對(duì)照組GSTM1非缺失基因型29例，GSTM1缺失基因型35例，GSTM1基因型在病例組和對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 GSTM1基因類型分析（n）

2.3 ATLI的影響因素分析

在多因素非條件Logistic模型中，治療類型、吸煙史、飲酒史3個(gè)變量的系數(shù)不為0（P＜0.05）；結(jié)果顯示吸煙史、飲酒史與ATLI的發(fā)生有關(guān)，其OR（95%CI）分別為2.205（1.140～4.265）、1.937（1.022～3.626）、2.403（1.600～4.236），結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 抗結(jié)核藥物所致肝損害影響因素多因素Logistic回歸分析

3 討論

目前抗結(jié)核藥物所致肝損傷的發(fā)生機(jī)理比較模糊，學(xué)術(shù)界沒(méi)有統(tǒng)一研究結(jié)果，但研究學(xué)者普遍認(rèn)為藥物所致肝損傷的發(fā)生過(guò)程比較復(fù)雜，由多環(huán)節(jié)組成，受多種因素影響，其中主要包括藥物進(jìn)入肝臟組織，藥物在肝臟組織中的代謝，代謝產(chǎn)物對(duì)肝細(xì)胞的直接或者間接毒性作用。其中藥物代謝酶在代謝產(chǎn)物對(duì)肝細(xì)胞的毒性作用中起到關(guān)鍵性作用[5]。參與藥物代謝的主要酶類有細(xì)胞色素酶P450、谷胱甘肽琉基轉(zhuǎn)移酶、N-乙?；D(zhuǎn)移酶2。

國(guó)外許多學(xué)者研究探討了GSTM1和GSTT1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物致肝損傷的關(guān)系[6]。其中Roy等[7]在對(duì)印度人群抗結(jié)核藥物致肝損傷組與未發(fā)生肝損傷組的病例對(duì)照研究中發(fā)現(xiàn)：GSTM1缺失基因型發(fā)生抗結(jié)核藥物性肝損傷的風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)高于GSTM1非缺失基因型，GSTM1純合子缺失基因型對(duì)抗結(jié)核藥物性肝損害的發(fā)生有提示作用。Huang等[8]對(duì)115例抗結(jié)核藥物性肝損傷病例采用病例對(duì)照研究所得結(jié)果與上述Roy結(jié)果一致。但是，Leiro等[9]對(duì)西班牙1 200例活動(dòng)性肺結(jié)核患者進(jìn)行大樣本回顧性隊(duì)列研究，結(jié)果卻發(fā)現(xiàn)GSTM1與肝損傷的發(fā)生無(wú)顯著聯(lián)系，目前研究學(xué)者存在不同的研究結(jié)果以及不同的研究觀點(diǎn)。該研究結(jié)果顯示病例組對(duì)照組GSTM1基因缺失型頻率分別為52.4%（11/21）、54.7%（35/64），GSTM1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物致肝損傷的易感性無(wú)關(guān)，但多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示吸煙、飲酒可能是ATLI的易感因素，OR值分別為 1.937、2.403，與顧佳怡[2]對(duì)新疆地區(qū)2 791例結(jié)核患者采用病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)吸煙、飲酒與肝損傷的發(fā)生有關(guān)的研究結(jié)果一致。出現(xiàn)上述結(jié)果的可能原因是由于不同地區(qū)、不同種族的基因存在較大差異，蒙古族人民熱情好客，喜歡飲酒，而酒精的代謝主要集中在肝臟；香煙中含有多種有害物質(zhì)，也會(huì)間接影響肝臟的代謝。該實(shí)驗(yàn)收集的樣本例數(shù)較少，而且只做了GSTM1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥致肝損傷的關(guān)系，下一步需要繼續(xù)擴(kuò)大樣本量進(jìn)行GSTTI、GSTM1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物致肝損傷的關(guān)系研究。

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[1]周林.抗結(jié)核藥物研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床醫(yī)生,2013（3）:14-17.

[2]顧佳怡.GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物所致肝損害之間的關(guān)聯(lián)研究[D].烏魯木齊：新疆醫(yī)科大學(xué),2015.

[3]王黎霞，成詩(shī)明，陳明亭，等.2010年全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告[J].中國(guó)防癆雜志，2012（8）:485-508.

[4]孔楠.青海藏、漢族肺結(jié)核患者CYP2E1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥血藥濃度的研究[D].西寧：青海大學(xué),2015.

[5]趙紅,程澄,謝雯.抗結(jié)核藥物致肝損傷的發(fā)病機(jī)制[J].中國(guó)肝臟病雜志：電子版,2015（4）:11-13.

[6]李賀.青海藏、漢族人群CYP2E1、GST基因多態(tài)性比較[D].西寧：青海大學(xué),2016.

[7]Roy B,Chowdhury A,Kundu S,et al.Increased risk ofantituberculosis drug-induced hepatotoxicity in individualswith glutathione S-transferase M1 ‘null’mutation[J].JGastroenterol Hepatol,2001,16(9):1033-1037.

[8]Huang Y S,Su W J,Huang Y H,et al.Genetic polymorphismsof manganese superoxide dismutase,NAD (P)H: quinoneoxidoreductase,glutathione S-transferase M1 and T1,and thesusceptibility to drug-induced liver injury[J].J Hepatol,2007,47(1):128-134.

[9]Leiro V,Fern′andez-Villar A,Valverde D,et al.Infuenceof glutathione S-transferase M1 and T1 homozygous nullmutations on the risk of antituberculosis drug-inducedhepatotoxicity in a Caucasian population[J].Liver Int,2008,28(6): 835-839.

Relationship Between GeneticPolymorphisms of GSTM1 and the Susceptibility to Antituberculosis Drug-induced Liver Injuryin Mongolian Patients

ZHAO Ju-fang,Wei Li-qin,Hao Jin-qi,HOU Rui-li，ZHAO Ruo-wang,HUANG Qian,DENG Le-le
School of Public Health,Baotou Medical College,Baotou,InnerMongolia,014060 China

Objective To investigate the relationship between the genetic polymorphisms of glutathione S-transferase M1,and the susceptibility of antituberculosis drug-induced hepatotoxicity in the Mongolian tuberculosis patients and otherpossible predisposing factors.Methods 85 cases of Mongolian tuberculosis were collected in Tongliao City,Inner Mongolia,and liver function test results were followed up for at least 3 months (ALT≥2 UL).21 cases ofpatients with liver injury and 64 cases without liver injury were control Groupsince June 2015 to June 2016.The GSTM1 gene was analyzed by polymerase chain reaction(PCR)inthe patients with tuberculosis Results samong the 85 subjects,there were 11 cases of GSTM1 deletion genotype in case group,35 cases of GSTM1 deletion genotype in control group,and no difference in GSTM1 deletion genotype distribution between the two groups.Conclusion GSTM1 genotypesnot associated with risk of the ATLI in Mongolian patients,the test efficacy was 1-β=0.7157.

Mongolian nationality;ATLI;GSTM1;Genetic polymorphism

R52；R575

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.03.06

2016-07-21；

2016-08-21

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金資助，項(xiàng)目編號(hào)：2014MS0805。

趙菊芳（1989.8-），女，內(nèi)蒙古呼和浩特人，碩士研究生，研究方向：傳染病防治研究。