裴文楠,李寶善,蔣　宜,唐渝平,李　婷,周　敏,柴李殷

(重慶市急救醫(yī)療中心老年科　400014)

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論著·臨床研究

老年高血壓病與血漿Klotho、FGF23蛋白水平的相關(guān)性研究*

裴文楠,李寶善,蔣宜△,唐渝平,李婷,周敏,柴李殷

(重慶市急救醫(yī)療中心老年科400014)

目的研究血漿Klotho蛋白、成纖維生長(zhǎng)因子23(FGF23)與老年高血壓病的相關(guān)性。方法選擇年齡大于60歲高血壓病患者180例作為研究組，按血壓水平不同分為高血壓1級(jí)組(60例)，高血壓2級(jí)組(60例)，高血壓3級(jí)組(60例)，另選年齡、男女比例大致一致、無(wú)高血壓病老年人60例作為對(duì)照組，應(yīng)用ELISA檢測(cè)血漿Klotho、FGF23蛋白水平，應(yīng)用生化自動(dòng)分析儀檢測(cè)血脂水平，并與對(duì)照組進(jìn)行比較，分析其相關(guān)性。結(jié)果高血壓1、2、3級(jí)組血漿Klotho低于對(duì)照組，F(xiàn)GF23蛋白水平高于對(duì)照組，BMI高于對(duì)照組(P<0.05)。隨血壓水平升高，血漿Klotho蛋白水平逐漸降低，而FGF23蛋白水平逐漸升高。Klotho與FGF23之間有負(fù)相關(guān)性(r=-0.282，P=0.001)，Klotho、FGF23與BMI無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.063,-0.098,P>0.05)。結(jié)論血漿Klotho蛋白、FGF23蛋白水平與血壓水平有明顯相關(guān)性，可能共同參與高血壓的發(fā)生、發(fā)展。

Klotho蛋白；老年人；高血壓；相關(guān)性

Kuro等[1]從衰老表現(xiàn)的模型小鼠中成功克隆Klotho基因，并發(fā)現(xiàn)該基因表達(dá)缺陷的小鼠會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似人衰老的一系列表型變化，如動(dòng)脈硬化、糖代謝異常、骨質(zhì)疏松、肺氣腫等。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者[2-5]研究發(fā)現(xiàn)，Klotho基因及Klotho蛋白與高血壓進(jìn)程、老年高血壓、高血壓腦損傷關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)成纖維生長(zhǎng)因子23(fibroblast growth factor 23，F(xiàn)GF23)基因缺陷小鼠與Klotho基因表達(dá)缺陷小鼠顯現(xiàn)出類(lèi)似的過(guò)早衰老表型，推測(cè)FGF23與Klotho缺陷小鼠所出現(xiàn)的過(guò)早衰老表型可能是由于Klotho-FGF23這一共同的信號(hào)通路受到破壞的結(jié)果[6]。后續(xù)研究證實(shí)Klotho與FGF23相互作用及其在下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮了極其重要的作用[7]。為此，本研究應(yīng)用ELISA法定量檢測(cè)老年高血壓病患者及對(duì)照組血漿Klotho、FGF23蛋白水平，揭示Klotho、FGF23蛋白與老年高血壓病的相關(guān)性，為高血壓病的防治開(kāi)辟新的思路。

1　資料與方法

1.1一般資料選自2014 年5月至2015年5月本科住院老年高血壓病患者180例作為研究組，入組時(shí)均經(jīng)過(guò)詢(xún)問(wèn)病史、體格檢查、X線(xiàn)片檢查、心電圖、超聲心動(dòng)圖檢查、相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查等。采用水銀柱血壓計(jì)測(cè)量患者右側(cè)上臂血壓。對(duì)照組60例老年人，收縮壓(SBP)<140 mm Hg和舒張壓(DBP)<90 mm Hg；高血壓1 級(jí)組60例，SBP 140～159 mm Hg和(或) DBP 90～99 mm Hg；高血壓2 級(jí)組60例，SBP 160～179 mmHg和(或) DBP 100～109 mm Hg；高血壓3級(jí)組60例，SBP≥180 mm Hg和(或)DBP≥110 mm Hg。入選標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡大于或等于60歲；(2)符合《中國(guó)高血壓防治指南2010》[8]定義的高血壓標(biāo)準(zhǔn)；(3)血、尿、糞常規(guī)、肝、腎功能、電解質(zhì)檢測(cè)均正常；(4)既往有高血壓，但未服藥治療或未規(guī)律服藥治療，現(xiàn)血壓仍大于或等于140/90 mm Hg。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)患者既往有高血壓病史，正在使用降壓藥物治療，目前血壓小于140/90 mm Hg;(2)患有急慢性肝、腎疾病、腫瘤、冠心病、腦血管病、自身免疫性疾病、其他感染性疾病;(3)血、尿、糞常規(guī)、肝、腎功能不在正常范圍;(4)繼發(fā)性高血壓患者。

1.2試劑與儀器人Klotho、FGF23蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒(編號(hào)：DY5334-05、DY2604-05、DY008)購(gòu)自美國(guó)R&D公司。Bio-Rad 680型酶標(biāo)儀由美國(guó)Bio-Rad公司生產(chǎn)；L400臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)由湖南湘儀離心機(jī)廠(chǎng)生產(chǎn)。

1.3方法患者入院次日清晨空腹抽取靜脈血，肝素抗凝，3 000 r/min離心5 min分離血漿，部分血-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。取血漿樣品100 μL按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定血漿Klotho蛋白水平。余血促凝離心，分離血清使用日立7060自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總膽固醇(total cholesterol，TC)、總?cè)８视?total triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)。收集身高、體質(zhì)量、BMI等資料。

表1　　各組一般臨床情況對(duì)比±s)

表2　　4組間BMI、Klotho、FGF23蛋白水平對(duì)比

a：P<0.05,與高血壓1級(jí)組比較；b:P<0.05,與高血壓2級(jí)組比較；c:P<0.05,與高血壓3級(jí)組比較。

2　結(jié)　　果

2.1各組一般情況比較高血壓1、2、3級(jí)組年齡、性別比例、TC、TG、LDL-C、HDL-C 與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而B(niǎo)MI明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2各組BMI、血漿Klotho、FGF23蛋白水平比較高血壓1級(jí)組、高血壓2級(jí)組、高血壓3級(jí)組BMI均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而B(niǎo)MI在高血壓1、2、3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組Klotho 蛋白、FGF23蛋白水平比較，隨血壓水平升高，血漿Klotho蛋白水平逐漸降低，而FGF23蛋白水平逐漸升高，Klotho 蛋白水平在高血壓2級(jí)組、高血壓3級(jí)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，高血壓1級(jí)組與高血壓3級(jí)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，高血壓1級(jí)組與對(duì)照組比較、高血壓1級(jí)組與高血壓2級(jí)組比較、高血壓2級(jí)組與高血壓3級(jí)組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。FGF23蛋白水平在高血壓3級(jí)組、高血壓2級(jí)組分別與對(duì)照組、高血壓1級(jí)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3血漿Klotho 蛋白、FGF23蛋白水平之間的相關(guān)性采用Pearson 分析法分析得，Klotho蛋白與FGF23蛋白之間呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.282，P=0.001)，Klotho、FGF23與BMI無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.063，-0.098，均P>0.05)。

3　討　　論

高血壓病作為最常見(jiàn)的衰老相關(guān)性心血管疾病之一，已成為影響老年人健康和長(zhǎng)壽的重要因素。我國(guó)高血壓患病率近年來(lái)呈增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，每5個(gè)成人中就有1人患高血壓，估計(jì)目前全國(guó)高血壓患者至少2億[8]。隨著其病程發(fā)展，?？蓪?dǎo)致心、腦、腎等重要靶器官損傷，隨著病程的持續(xù)性進(jìn)展，包括心力衰竭、心源性猝死、心肌梗死等心血管事件的發(fā)生率明顯增高，嚴(yán)重危及患者生命。為此，探究影響或調(diào)控高血壓病發(fā)生、發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制及其可能的信號(hào)調(diào)節(jié)通路，對(duì)人們尋找有效防治高血壓病的方法有著十分重要的研究意義。

Kuro等[1]在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，Klotho基因表達(dá)缺陷的小鼠會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似人衰老的的一系列表型變化，如動(dòng)脈硬化等。Masashi 等[9]也研究發(fā)現(xiàn)血清Klotho蛋白水平降低與慢性腎臟疾病患者動(dòng)脈硬化有關(guān)。而Klotho 基因的正常表達(dá)可抑制并逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈硬化等病理生理過(guò)程，如降低血壓、防止動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及血管纖維化等。本課題組參與的前期研究[10]證實(shí)Klotho基因單核苷酸多態(tài)性與高血壓病有明確相關(guān)性，應(yīng)用rAAV.mKL(含小鼠全長(zhǎng)Klotho cDNA 的腺相關(guān)病毒載體)在自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Klotho蛋白可以阻止高血壓進(jìn)程、降低體質(zhì)量指數(shù)、抑制心肌肥大和心肌纖維化，改善心肌微結(jié)構(gòu)損傷[5]。Aizawa等[11]、蘇顯明等[12]研究發(fā)現(xiàn)高血壓病患者血清Klotho 蛋白水平下降，并且血清Klotho 蛋白的水平隨高血壓的發(fā)展而呈逐漸下降趨勢(shì)。這就提示Klotho基因及其蛋白表達(dá)與高血壓病發(fā)生發(fā)展及心臟靶器官損傷有關(guān)。

FGF23是多肽激素成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族的成員，是體內(nèi)血磷和1，25-二羥活性維生素D3(1，25-(OH)2D3)的調(diào)節(jié)因子[13]。Yilmaz 等[14]研究顯示，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，F(xiàn)GF23-FGFR復(fù)合體通過(guò)干擾NO合成酶的活性引起NO合成減少，致使血管舒張功能降低，引起血壓升高。Sigala等[15]在增厚的動(dòng)靜脈內(nèi)膜中層發(fā)現(xiàn)了FGFR1及FGFR4的表達(dá)，并證明FGF23激活FGFR后可誘發(fā)血管內(nèi)膜增生及纖維化。Kim等[16]研究發(fā)現(xiàn)FGF23需要與Klotho蛋白及FGF受體(FGFR)結(jié)合形成FGF23-FGFR-Klotho復(fù)合體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。本研究中，老年高血壓1、2、3級(jí)組患者血清FGF23水平顯著高于對(duì)照組，且FGF23水平隨血壓分級(jí)上升而遞增，提示FGF23可能參與老年高血壓的發(fā)病過(guò)程，對(duì)評(píng)估高血壓病情有一定意義。

本研究結(jié)果可能是老年高血壓患者血清Klotho蛋白水平降低，F(xiàn)GF23蛋白升高，引起血管內(nèi)皮功能障礙及動(dòng)脈硬化，從而導(dǎo)致血壓升高。有研究報(bào)道血清Klotho蛋白水平隨年齡增加而降低，本研究在除去年齡、性別等因素后，Klotho蛋白與血壓水平仍呈負(fù)相關(guān)，推測(cè)內(nèi)源性Klotho蛋白減少、FGF23蛋白升高可能是高血壓發(fā)生f發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，血漿Klotho蛋白、FGF23蛋白水平與高血壓病及高血壓病嚴(yán)重程度有相關(guān)性，所以通過(guò)檢測(cè)血漿Klotho蛋白、FGF23蛋白水平來(lái)評(píng)估高血壓病嚴(yán)重程度、判斷預(yù)后具有臨床指導(dǎo)意義。同時(shí)高血壓患者經(jīng)治療后血漿Klotho蛋白、FGF23蛋白水平變化情況如何，還有待后續(xù)進(jìn)一步研究。因此，本研究為進(jìn)一步研究Klotho蛋白的功能及高血壓病的防治提供了新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]Kuro M,Matsumura Y,Aizawa H,et al.Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing[J].Nature,1997，390:45-51.

[2]Wang Y,Sun Z.Klotho gene delivery prevents the progression of spontaneous hypertension[J].Hypertension,2009,54(4):810-817.

[3]劉曉林,馬厚勛,田小春,等，Klotho基因單核苷酸多態(tài)性及其組合與老年高血壓病的相關(guān)性研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,36(4):389-393.

[4]李湘民,周巧玲.高血壓腦損害患者血清Klotho蛋白水平測(cè)定及相關(guān)危險(xiǎn)因素分析[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,32(8):839-841.

[5]李寶善,馬厚勛,王艷嬌,等.Klotho基因轉(zhuǎn)導(dǎo)延緩自發(fā)性高血壓大鼠高血壓進(jìn)程及改善其心臟損害的作用研究[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜,2012,29(6):662-668.

[6]Urakawa I,Yamazaki Y,Shimada T,et al.Klotho converts canonical FGF receptor into a specific receptor for FGF23[J].Nature,2006,444(7120):770-774.

[7]Kurosu H,Ogawa Y,Miyoshi M,et al.Regulation of fibroblast growth factor-23 signaling by klotho[J].J Biol Chem,2006,281(10):6120-6123.

[8]中國(guó)高血壓防治指南修訂委員會(huì).中國(guó)高血壓防治指南2010[J].中華心血管病雜志,2011,39(7):579-616.

[9]Masashi K,Hitoshi S,Hiroshi M,et al.A decreased level of serum soluble Klotho is an independent biomarker associated with arterial stiffness in patients with chronic kidney disease[J].PLoS One,2013,8(2):e56695.

[10]劉曉林,馬厚勛,田小春，等.Klotho基因3個(gè)SNP位點(diǎn)與老年高血壓及脂代謝的相關(guān)性[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2010,30(23):3429-3432.

[11]Aizawa H，Saito Y，Nakamura T，et al． Downregulation of the Klotho gene in the kidney under sustained circulatory stress in rats[J].Biochem Biophys Res Commun，1998,249(3):865-871.

[12]蘇顯明,何亞軍,劉景委,等.Klotho蛋白與老年高血壓發(fā)病的關(guān)系[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2011,65(5):653-654.

[13]Komaba H，F(xiàn)ukagawa M．FGF23-parathyroid interaction:implications in chronic kidney disease[J].Kidney Int，2010，77(4):292-298．

[14]Yilmaz MI，Sonmez A，Saglam M，et al．FGF-23 and vascular dysfunction in patients with stage 3 and 4 chronic kidney disease[J].Kidney Int，2010，78(7):679-685．

[15]Sigala F，Savvari P，Liontos M，et al．Increased expression of bFGF is associated with carotid atherosclerotic plaques instability engaging the NF-kappaB pathway[J]．J Cell Mol Med，2010，14(9):2273-2280．

[16]Kim JH,Hwang KH,Park KS,et al.Biological Role of Anti-aging Protein Klotho[J]．J Lifestyle Med,2015，5(1):1-6.

Study on correlation between plasma Klotho,FGF23 protein level and senile hypertension

PeiWennan,LiBaoshan,JiangYi△,TangYuping，LiTing,ZhouMin,ChaiLiyin

(DepartmentofGeriatrics，ChongqingEmergencyMedicalCenter，Chongqing400014，China)

ObjectiveTo explore the correlation between plasma Klotho and FGF23 levels with senile hypertension.MethodsTotally 180 cases of hypertension aged more than 60 years old were selected as the research group and divided into the grade 1 hypertension group(60 cases),grade 2 hypertension group(60 cases) and grade 3 hypertension group(60 cases).The age and proportion of male to female were basically consistent.60 elderly people without hypertension were selected as the control group.The level of plasma Klotho and FGF23 protein were tested by ELISA.The lipid level was detected by the automatic biochemical analyzer.The detection results were compared with those in the control group for analyzing their correlation.ResultsPlasma Klotho protein level in each hypertension group was lower than that in the control group,while plasma FGF23 protein level and BMI were significantly higher than those in the control group(P<0.05).With the blood pressure level increase,plasma Klotho protein level was gradually decreased,while FGF23 protein level was gradually increased.The negative correlation was found between plasma Klotho protein and FGF23 protein (r=-0.282,P=0.001).Plasma Klotho protein and FGF23 protein had no obvious correlation with BMI (r=-0.063,-0.098,P>0.05).ConclusionPlasma Klotho protein and FGF23 protein levels have obvious correlation with the blood pressure level,which may jointly participate in the occurrence and development of hypertension.

Klotho protein；aged；hypertension；correlation

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.12.020

重慶市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研計(jì)劃項(xiàng)目(2014-2-079,2013-2-104)；重慶市渝中區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(20150139)。作者簡(jiǎn)介：裴文楠(1966-)，副主任醫(yī)師，本科，主要從事老年心血管病研究。△

,E-mail:254080551@qq.com。

R544.1

A

1671-8348(2016)12-1647-03

2015-12-08

2016-01-26)