張 燕

（新疆實驗動物研究中心，新疆烏魯木齊 830002）

不同環(huán)境設(shè)施內(nèi)BALB/C裸鼠兩種繁育方式的生產(chǎn)性能初步比較

張 燕

（新疆實驗動物研究中心，新疆烏魯木齊 830002）

BALB/C裸鼠在不同環(huán)境設(shè)施內(nèi)（SPF屏障系統(tǒng)和IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)）分別采取1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）和2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）繁育方式，觀察記錄雌鼠交配分娩間隔、胎數(shù)、平均產(chǎn)仔數(shù)、平均純合仔鼠及純合仔鼠離乳率等數(shù)據(jù)，分析不同環(huán)境設(shè)施內(nèi)BALB/C裸鼠在2種繁育方式中的生產(chǎn)性能。結(jié)果顯示，4組裸鼠的繁殖性能差異在各胎次內(nèi)不顯著（P＞0.05），而2種環(huán)境中繁育方式為2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）組中純合仔鼠離乳率均高于1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）組。SPF屏障系統(tǒng)和IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)均能保證BALB/C裸鼠的正常生產(chǎn)繁殖性能，2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）的繁育方式可提高純合仔鼠離乳率。

BALB/C裸鼠 SPF屏障系統(tǒng) IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng) 生產(chǎn)性能 繁育方式

由于免疫缺陷，裸鼠是應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究，特別在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、毒理病理學(xué)、生物制品和新型藥品的安全性評價及優(yōu)選等方面是極好的模型動物［1］。近年來，BALB/C裸鼠生產(chǎn)繁殖一般在SPF屏障系統(tǒng)、隔離包、層流柜、IVC等系統(tǒng)內(nèi)［2］。由于裸鼠易受病原體感染，裸鼠的飼養(yǎng)和繁殖要求條件比較嚴(yán)格，國內(nèi)外飼育者對提高裸鼠的存活期和繁殖性能進(jìn)行了許多研究，我國早有這方面的經(jīng)驗報道［3］。作者通過統(tǒng)計分析新疆實驗動物研究中心SPF屏障系統(tǒng)內(nèi)BALB/C裸鼠種鼠繁育性能的各項指標(biāo)，初步總結(jié)得出裸鼠種鼠血緣擴大群中大量生產(chǎn)裸鼠可采用的繁育方式及環(huán)境經(jīng)驗。

1 材料與方法

1.1 環(huán)境設(shè)施

1.1.1 SPF屏障系統(tǒng)

新疆實驗動物研究中心SPF屏障實驗室，本實驗室是2003年正式投入運轉(zhuǎn)使用，并在2005年通過國家食品藥品監(jiān)督管理局實驗室認(rèn)證管理中心的驗收，由新疆實驗動物研究中心與新疆維吾爾醫(yī)藥研究所共同籌建的藥物非臨床安全性評價中心，溫度變化范圍18℃～22℃。

1.1.2 IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)

IVC-Ⅱ型（智能型）獨立送風(fēng)隔離籠具（蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司），溫度變化范圍24℃～28℃。

由于IVC籠具放置于SPF屏障實驗室內(nèi)，兩種環(huán)境設(shè)施的照明控制均設(shè)定為12h明暗交替，相對濕度變化范圍均為30%～60%［4-5］。

1.2 實驗動物

本中心引自中國科學(xué)院上海動物中心國家種子庫BALB/C裸鼠種鼠，雌雄種鼠均為2～3月齡，雌種鼠40只，基因型為（nu/+），雄鼠30只，基因型（nu/nu）。

1.3 分組

BALB/C裸鼠在SPF屏障系統(tǒng)和屏障內(nèi)IVC籠具中，分別采用1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）和2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）兩種交配方式。SPF屏障系統(tǒng)內(nèi)裸鼠種鼠1：1方式交配的10♀10♂為實驗組一，1：2方式交配的10♀5♂為實驗組二；屏障內(nèi)IVC籠具中裸鼠種鼠1：1方式交配的10♀10♂為實驗組三，1：2方式交配的10♀5♂為實驗組四。

1.4 繁育方式

飼育鼠料來自新疆實驗動物中心提供的全價種小鼠飼料（粗蛋白22.59 %，水分7.82 %，粗脂肪4.51 %，粗纖維2.04%，粗灰分6.68 %等），經(jīng)Co60放射滅菌處理。飲用水經(jīng)實驗動物飲用水處理器（杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司）過濾，加鹽酸酸化至pH值為3.0～3.5，適量添加多維（超能精制魚肝油VAD3E預(yù)混料，濟南迅達(dá)康生物科技有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號：10071201）。飲水和飼料采用自由攝入方式。每周適量添加雞蛋和葵花籽。每周更換1～2 次飲水瓶和籠具。所有物品和器具進(jìn)入SPF屏障系統(tǒng)前都必須進(jìn)行嚴(yán)格消毒，可以耐受高壓蒸汽的物品經(jīng)由真空滅菌器（山東新華醫(yī)療器械廠）121℃，30min高壓滅菌進(jìn)入屏障系統(tǒng)，不能耐受高壓的物品用0.02%的過氧乙酸擦拭物品表面，再經(jīng)傳遞窗紫外燈照射30min后進(jìn)入屏障系統(tǒng)。BALB/C裸鼠生產(chǎn)管理工作均按照新疆實驗動物研究中心屏障系統(tǒng)實驗動物生產(chǎn)管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程運作［4］。

飼養(yǎng)于IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)的裸鼠種鼠，在超凈工作臺上用0.5 %過氧乙酸擦拭消毒籠具表面，更換無菌墊料，添加飲水、飼料、雞蛋和葵花籽［6］。

實驗組種鼠生仔后為確保純合子（nu/nu）幼鼠充分哺乳和健康成長，一般在仔鼠出生后第3 d左右保留部分健壯雌性雜合子（nu/+），根據(jù)仔鼠觸須的多少和性別剔除其余雜合子［7］，雜合子21d離乳，純合子28d離乳。在此期間，記錄裸鼠種鼠的生仔日期、胎次、生仔數(shù)、離乳日期、離乳純合子仔數(shù)。

1.5 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理

根據(jù)BALB/C裸鼠種鼠繁殖記錄卡的詳細(xì)數(shù)據(jù)資料，用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

2 結(jié)果

各實驗組種鼠平均胎間隔、平均胎產(chǎn)仔數(shù)、平均胎產(chǎn)純合子數(shù)、純合子仔鼠離乳率等繁育性能相關(guān)數(shù)據(jù)見表1。各胎次內(nèi)四組實驗裸鼠種鼠繁殖性能均無明顯差異（P＞0.05）。

BALB/C裸鼠種鼠由國家種子庫引進(jìn)后，在SPF屏障系統(tǒng)中，有兩只雄性種裸鼠（nu/nu）死亡；IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)中的裸鼠種鼠交配繁殖正常，無死亡現(xiàn)象。引進(jìn)的40只雌性裸鼠種鼠，實驗觀察期間有1只始終未見懷孕，第1胎種鼠懷孕率達(dá)到97.5%，第2胎和第3胎的生產(chǎn)繁殖中種鼠懷孕率為87.5%。

3 討論

（1）由于BALB/C純合子裸鼠對飼養(yǎng)室內(nèi)溫濕度要求較高［5］，裸鼠種鼠自中國科學(xué)院上海動物中心國家種子庫到新疆運輸過程漫長，新疆獨特的地理環(huán)境造成新疆秋冬季相對溫濕度較低，SPF屏障系統(tǒng)內(nèi)穩(wěn)定的通風(fēng)換氣系統(tǒng)也影響使用，加濕設(shè)備對屏障實驗室大面積相對濕度的調(diào)控困難，可能是造成雄性純合子裸鼠種鼠死亡的一個原因。

（2）新疆實驗動物研究中心SPF屏障實驗室溫度變化范圍18℃～22℃，IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)溫度變化范圍24℃～28℃，兩環(huán)境設(shè)施的照明控制均為12h明暗交替，相對濕度變化范圍為20%～30%，其中相對濕度與文獻(xiàn)相比較低［3，5，8］，各胎次的BALB/C裸鼠種鼠的繁育指標(biāo)與文獻(xiàn)相比并未發(fā)現(xiàn)明顯差異。但是較高溫度的IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)組（24℃～28℃）純合子裸仔鼠離乳率并未明顯高于SPF屏障組（18℃～22℃），可能是溫度較高而相對濕度較低的環(huán)境特點影響到純合子無被毛裸仔鼠的生長。因此，調(diào)節(jié)合適的相對濕度與溫度，可能會增加BALB/C裸鼠純合仔鼠離乳率。

（3）純合子雌性裸鼠（nu/nu）的乳腺發(fā)育不良，因此裸鼠的繁育方式通常采用♂（nu/+）：♀（nu/+）和♂（nu/nu）：♀（nu/+）?！幔╪u/+）：♀（nu/+）的繁育方式從遺傳上來說只能得到約25%的純合子裸鼠，通常不采用此方式進(jìn)行裸鼠生產(chǎn)群的建立。本次實驗中選定的是裸種鼠血緣擴大群中常用的♂（nu/ nu）：♀（nu/+）繁育法［3］。繁育方式為2♀：1♂的實驗組，在SPF屏障系統(tǒng)和IVC獨立通風(fēng)系統(tǒng)內(nèi)飼育，其剔除部分雜合仔鼠后純合仔鼠離乳率均高于1♀：1♂組，初步證明兩雌性裸鼠同步妊娠分娩，共同哺育仔鼠的繁育方式可能提高裸鼠仔數(shù)及其離乳率，其可行性還需進(jìn)一步通過實驗確認(rèn)。雜合子裸鼠仔鼠（nu/+）天生強壯，具備極強的搶乳能力，嚴(yán)重影響同窩純合仔鼠的生長發(fā)育，根據(jù)吳芳潔等［7］報道，在仔鼠出生3d內(nèi)保留部分健壯雌性雜合子，剔除剩余雜合子仔鼠能夠提高純合子仔數(shù)裸鼠的離乳率，本實驗采用此經(jīng)驗，純合子裸鼠仔數(shù)離乳率均達(dá)到85%以上。

（4）根據(jù)文獻(xiàn)報道［3，5，8］和作者多年飼養(yǎng)實驗動物的經(jīng)驗，裸鼠等小鼠的種鼠繁殖性能在第2、3 胎各項指標(biāo)表現(xiàn)為最好，可能是由于第1胎體成熟不夠完全、雌鼠種鼠母性經(jīng)驗不足和第4、5胎種鼠老齡化導(dǎo)致生殖機能下降。另外，裸鼠比近交系小鼠抵抗力差，繁殖周期稍長，為保證實驗動物的正常供應(yīng)，繁殖到第4胎要更換種鼠。本文為給生產(chǎn)實踐者提供更清晰的實驗數(shù)據(jù)，只對繁殖性能最佳的第2、3胎數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

表1　兩種環(huán)境BALB/C 系裸鼠不同繁育方式的生產(chǎn)性能

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