王娟，馬春梅，袁紹莉，王丹

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·藥物與臨床·

正交試驗(yàn)法優(yōu)選赤芍的醇提工藝

王娟，馬春梅，袁紹莉，王丹

目的：優(yōu)選赤芍的最佳提取工藝。方法：以芍藥苷含量及干浸膏的收率(權(quán)重系數(shù)分別為0.8和0.2)作為該提取工藝綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法考察乙醇用量、乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)的影響。結(jié)果：赤芍的最佳提取工藝為乙醇濃度為90%，液料比為8：1，提取次數(shù)為2次，提取時(shí)間為90 min。結(jié)論：該工藝簡(jiǎn)單可行，乙醇可回收使用，提取成本較低，可用于赤芍制劑的工業(yè)化生產(chǎn)。

赤芍； 芍藥苷； 正交試驗(yàn)法； 醇提取工藝

赤芍為毛茛科多年生草本植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍 Paeonia veitchii Lynch的干燥根。其味苦，微寒，歸肝經(jīng)，具有散瘀止痛，清熱涼血的功效，是臨床常用的中藥[1]。赤芍作為腦寧膠囊處方中的君藥，其化學(xué)成分為單萜苷類(lèi)包括芍藥苷、氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等成分，有水溶性及脂溶性的兩類(lèi)成分，以芍藥苷的含量最大，芍藥苷作為該天然藥物的主要有效成分[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明,赤芍在治療心腦血管疾病方面效果顯著，能有效抑制血小板聚集，同時(shí)具有抗凝和抗血栓、擴(kuò)張冠脈血管、抗動(dòng)脈粥樣硬化等藥理作用，作為該藥物制劑工藝研究的主要指標(biāo)性成分[3]。赤芍的醇提工藝研究選擇醇的用量、乙醇的濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)作為考察因素。以芍藥苷的含量和干膏率的綜合評(píng)價(jià)為指標(biāo)，綜合指標(biāo)為芍藥苷的含量：干膏率(4:1)。利用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選最佳醇提工藝，提高藥材的最大利用度。

1　儀器與材料

1.1儀器日本島津LCl0A-VP高效液相色譜儀；Shimadzu CLASS．VP色譜工作站；紫外檢測(cè)器SPD-10AVP；FA20413分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；JK-VO-6020 臺(tái)式真空干燥箱(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2材料赤芍(購(gòu)于北京同仁堂藥店)，其赤芍產(chǎn)地為四川，經(jīng)鑒定赤芍來(lái)源于毛茛科多年生草本植物川赤芍 Paeonia veitchii Lynch的干燥根。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均符合《中國(guó)藥典》(2015版)的各項(xiàng)規(guī)定。甲醇為色譜純(江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司)，乙醇為分析純(上海中秦化學(xué)試劑有限公司)，水為自制的蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1赤芍中芍藥苷的分析方法的建立

2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參照《中國(guó)藥典》(2015)一部中赤芍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下芍藥苷含量測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)[1]。色譜條件：日本島津LCl0A-VP高效液相色譜儀；Shimadzu CLASS．VP色譜工作站；紫外檢測(cè)器SPD-10AVP；流動(dòng)相：甲醇-水(1：3)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：室溫。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制取干燥36 h的芍藥苷對(duì)照品適量，其在五氧化二磷減壓干燥器中進(jìn)行干燥，精密稱(chēng)定后加入甲醇溶解，制成每1 ml中含0.21 mg的對(duì)照品溶液。精密移取上述對(duì)照品溶液置于10 ml容量瓶中，移取體積分別為1.0 ml，2.0 ml，4.0 ml，6.0 ml，8.0 ml，分別在上述容量瓶中加入甲醇溶液(甲醇：水=1：3)至刻度線(xiàn)，即得到芍藥苷的系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液適量進(jìn)樣20 μl，按照上述條件測(cè)定芍藥苷含量。以芍藥苷濃度為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并回歸方程為Y=2E+06X+7144，r2=0.998。結(jié)果表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.42～3.36 μg之間兩者線(xiàn)性關(guān)系良好。見(jiàn)表1。

表1　芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)數(shù)據(jù)

2.1.3精密度試驗(yàn)精密移取上述對(duì)照品溶液1.0 ml,轉(zhuǎn)移至10 ml的容量瓶中加入甲醇溶液(甲醇：水=1:3)至刻度線(xiàn)，取稀釋液適量進(jìn)樣20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次,按照上述條件測(cè)定芍藥苷含量。結(jié)果芍藥苷的峰面積的平均值為801257，RSD%為0.13%<0.2%符合精密度試驗(yàn)要求，表明該儀器精密度良好。見(jiàn)表2。

表2　芍藥苷精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.1.4醇浸膏得率的測(cè)定天然藥物中的化學(xué)成分較為復(fù)雜,有效成分往往是幾種單體化合物的混合物,提取的浸膏是發(fā)揮其質(zhì)量作用中主要物質(zhì)，浸膏的得率反映了制劑的生產(chǎn)工藝水平和工藝設(shè)計(jì)的合理性，將浸膏的收率作為其工藝評(píng)價(jià)的指標(biāo)具有一定的合理性。將提取浸膏置于已知質(zhì)量(m2)的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干后,置于干燥器中冷卻0.5 h,取出,迅速稱(chēng)重,記為質(zhì)量為(m1),赤芍飲片的質(zhì)量為m,按照下式計(jì)算赤芍的浸膏的得率。浸膏得率=(m1-m2)/m×100%

2.2赤芍的醇提工藝優(yōu)化影響赤芍醇提工藝主要因素有乙醇用量、乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)，在資料分析和預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)選擇乙醇用量、乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)作為考察因素,以芍藥苷含量及干浸膏的收率(權(quán)重系數(shù)分別為0.8和0.2)作為為該提取工藝綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)[4],稱(chēng)取經(jīng)干燥后的赤芍飲片每份取100 g,共取9份,利用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選最佳醇提工藝[5]，提高藥材的最大利用度。見(jiàn)表3，表4。

表4　L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)分析

通過(guò)對(duì)表2中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行直觀(guān)的分析，同時(shí)參考表2中各因素的極差值(R)的大小,可以判斷分析得到乙醇用量、乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)各因素對(duì)赤芍醇提取效果的影響的主次順序?yàn)? D>A>B>C。比較乙醇用量、乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)各個(gè)因素在3個(gè)水平下實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的平均值k1,k2,k3的大小順序可以得到的水平優(yōu)勢(shì)為A2>A1>A3,B3>B2>B1,C3>C2>C1,D2>D3>D1。通過(guò)直觀(guān)分析結(jié)果可判定為A2B2C3D3為最佳提取工藝。為了進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析結(jié)果，見(jiàn)表5。

表5　醇提取工藝正交試驗(yàn)方差分析

注：F0.05(2,2)=19.0；F0.01(2,2)=99.00

經(jīng)過(guò)方差分析判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直觀(guān)分析結(jié)果一致，最終確定乙醇提取赤芍的最佳工藝條件為A2B3C3D2。將藥材用其重量8倍量的乙醇，用90%的乙醇提取2次，每次提取90 min。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化選擇出了赤芍的醇提工藝條件。

3　討論

赤芍中含有化學(xué)成分，以芍藥苷的含量最大，芍藥苷作為該天然藥物的有效成分。現(xiàn)代藥理研究表明,赤芍在治療心腦血管疾病方面效果顯著，能有效抑制血小板聚集，同時(shí)具有抗凝和抗血栓、擴(kuò)張冠脈血管、抗動(dòng)脈粥樣硬化等藥理作用，作為腦寧膠囊制劑工藝研究的主要指標(biāo)性成分。本試驗(yàn)通過(guò)用正交試驗(yàn)法優(yōu)化赤芍的醇提取工藝,最終確定了赤芍的最佳提取工藝為液料比為8：1，提取次數(shù)為2次，提取時(shí)間為90 min。此工藝操作簡(jiǎn)便，提取全過(guò)程使用乙醇作為溶劑對(duì)環(huán)境無(wú)污染，而且乙醇可回收蒸餾后重復(fù)使用，故提取成本較低，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：158-159.

[2]王文祥,蔣小崗,顧明,等．芍藥的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2000,12(6):37-39.

[3]田樹(shù)革,周曉英．維藥新疆赤芍及不同炮制品中芍藥苷與微量元素的含量分析[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志, 2005(5): 32-33.

[4]黃群蓮,王利國(guó),唐燦．赤芍提取工藝條件優(yōu)選[J]. 中成藥，2010(2):303-304.

[5]鄧一鳴,孫曉霞,薛立安．赤芍中芍藥苷的提純工藝研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 20(6): 363-364.

徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015KY01)

單位] 徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物工程系，江蘇 徐州 221006

[作者簡(jiǎn)介] 王娟(1982-)，女，講師，研究生。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.05.042

TQ 461

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1008-7044(2016)05-0595-03

2016-04-06)