汪金云，周東枝，徐亞麗

體外釋放酶免疫技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的臨床應(yīng)用

汪金云，周東枝，徐亞麗

目的 評(píng)價(jià)體外釋放酶免疫技術(shù)在檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌中的臨床應(yīng)用。方法 選擇臨床病例201例包括肺內(nèi)結(jié)核81例、肺外結(jié)核25例、不明原因發(fā)熱95例（其中45例為肺結(jié)核），另選健康人群30例，采用體外釋放酶免疫技術(shù)（TB-IGRA）、膠體金法（TB-Ab）、痰涂片抗酸染色鏡檢及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（TB-PCR）檢測(cè)。結(jié)果 TBIGRA檢測(cè)肺內(nèi)結(jié)核組、肺外結(jié)核組以及不明原因發(fā)熱組的陽(yáng)性率明顯高于其他檢測(cè)組，4種檢測(cè)方法在肺內(nèi)結(jié)核組、肺外結(jié)核組、不明原因發(fā)熱組與健康對(duì)照組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05）；TB-IGRA、TB-AB、痰涂片鏡檢、TB-PCR的靈敏度分別為91.4%、43.1%、30.9%、23.8%，特異度分別為91.3%、90.0%、98.7%、97.5%；126例肺結(jié)核患者中，痰涂片39例陽(yáng)性和87例陰性，TB-IGRA檢測(cè)陽(yáng)性率分別為92.3%、83.9%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。結(jié)論 TB-IGRA有更好的優(yōu)越性和臨床應(yīng)用，可推廣用于臨床。

結(jié)核分枝桿菌；體外釋放酶聯(lián)免疫法；-干擾素

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌所致以呼吸系統(tǒng)感染為主的慢性傳染病，是造成人類死亡最多的疾病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)結(jié)核病年發(fā)病100萬(wàn)，發(fā)病率78/10萬(wàn)，全國(guó)現(xiàn)有活動(dòng)性肺結(jié)核患者499萬(wàn)，患病率119/10萬(wàn)，結(jié)核病年死亡人數(shù)5.4萬(wàn)，死亡率4.1/10萬(wàn)[1]。所以早期診斷和合理用藥對(duì)結(jié)核病患者尤為重要。目前臨床普遍采用的結(jié)核病診斷主要依賴于臨床癥狀、影像學(xué)特征和病原學(xué)診斷。至今沒(méi)有一種準(zhǔn)確、快速、可靠檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的方法[2]。本文比較幾種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)核分支桿菌感染的方法，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集浙江省寧?？h第一醫(yī)院2013年1月至2014年4月收治的結(jié)核分枝桿菌疑似病例201例，其中男135例，女66例；年齡16～65歲；經(jīng)臨床確診肺內(nèi)結(jié)核81例，肺外結(jié)核25例，不明原因發(fā)熱就診病例95例。另選本院健康體檢職工30例，設(shè)為健康對(duì)照組，其中男16例，女14例；年齡25～55歲。

1.2 儀器和設(shè)備 北京萬(wàn)泰生物有限公司體外釋放酶免疫技術(shù)（TB-IGRA）試劑盒；杭州艾博生物有限公司膠體金法（TB-Ab）試劑盒；中山大學(xué)達(dá)安生物有限公司聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（TB-PCR）試劑盒；上?？迫AKHB ST-360酶標(biāo)儀；美國(guó)ABI PRISM 7000型熒光定量基因擴(kuò)增分析儀；德國(guó)徠卡DM500普通光學(xué)顯微鏡、離心機(jī)、水浴箱等。

1.3 方法 空腹采集靜脈血5 ml，一管肝素鋰抗凝管和一管生化管，分別用TBIGRA和TB-Ab；再采集2份痰標(biāo)本分別用于痰涂片抗酸染色鏡檢和TB-PCR，標(biāo)本采集嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本采集規(guī)范要求。TB-IGRA采用體外釋放酶免疫技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌，采集靜脈血分3 管24 h培養(yǎng)，再應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（Elisa）檢測(cè)，間接判斷結(jié)核分枝桿菌的感染，具體操作方法和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)。TB-AB用膠體金技術(shù)檢測(cè)血清結(jié)核抗體，具體操作方法和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)；痰涂片用抗酸染色鏡檢找抗酸分枝桿菌，由資深專業(yè)人員進(jìn)行檢測(cè)；TB-PCR用PCR體外擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌DNA，具體操作方法和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料比較采用2檢驗(yàn)。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同對(duì)象組 4種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果 TB-IGRA檢測(cè)肺內(nèi)結(jié)核、肺外結(jié)核、不明原因發(fā)熱陽(yáng)性率明顯高于其他檢測(cè)方法（均＜0.05），其中肺外結(jié)核組痰涂片和 TB-PCR由于未收集到標(biāo)本，未檢測(cè)。見(jiàn)表1。

表1 不同對(duì)象組4種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果 例（%）

2.2 95例不明原因發(fā)熱4種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果 不明原因發(fā)熱95例患者經(jīng)臨床確診為肺結(jié)核45例，非結(jié)核桿菌感染50例。肺結(jié)核組TB-IGRA檢測(cè)方法陽(yáng)性率明顯高于其他3種方法（＜0.05），而非結(jié)核組4種檢測(cè)方法間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不明原因發(fā)熱95例4種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果 例（%）

2.3 不同方法的靈敏度和特異度比較TB-IGRA靈敏度明顯高于其他3種方法，4種方法特異度相差不大。見(jiàn)表3。

表3 4種方法的靈敏度和特異度 %

2.4 痰涂片陽(yáng)性與陰性肺結(jié)核患者TBIGRA結(jié)果比較 在126例肺結(jié)核患者中，痰涂片結(jié)核桿菌39例陽(yáng)性同時(shí)用TB-IGRA檢測(cè)36例陽(yáng)性（92.3%），而痰涂片87例陰性同時(shí)用TB-IGRA檢測(cè)73例陰性（83.9%），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=80.2，＜0.05）。

3 討論

目前結(jié)核分枝桿菌感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)主要依賴病原體檢測(cè)，隨著免疫學(xué)技術(shù)快速發(fā)展，體外釋放酶聯(lián)免疫法是利用致病性結(jié)核分枝桿菌特有而卡介苗、其他分枝桿菌缺失的開(kāi)放讀碼框區(qū)域 1 （RD1）基因編碼的早期分泌靶向抗原6-kD（ESAT-6）和培養(yǎng)濾過(guò)蛋白 10kD （CFP10）肽段庫(kù)為抗原刺激全血標(biāo)本中結(jié)核抗原特異性T細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，誘發(fā)結(jié)核感染T細(xì)胞分泌 -干擾素，再通過(guò) ELESA方法檢測(cè)計(jì)算 -干擾素的含量，間接判斷結(jié)核分枝桿菌感染狀況。本文結(jié)果顯示，TB-IGRA在肺內(nèi)和肺外結(jié)核陽(yáng)性率和靈敏度，明顯高于其他3種方法，其對(duì)診斷肺結(jié)核肺外結(jié)核具有較高的敏感性和準(zhǔn)確性。通過(guò)檢測(cè) -干擾素含量可以判斷患者病程進(jìn)展和體內(nèi)細(xì)菌含量，還可以作為病情治療療效的一個(gè)指標(biāo)，這已在Prabhu Anand[3]及方顏敏等[4]的實(shí)驗(yàn)著作中得到了證實(shí)。特別在對(duì)一些不明原因發(fā)熱的患者 TB-IGRA陽(yáng)性率也明顯高于其他3種方法，可以用于一些不明原因發(fā)熱患者的早期篩查，如果TB-IGRA結(jié)果陽(yáng)性，可進(jìn)一步有針對(duì)性檢查，提高結(jié)核菌檢測(cè)的陽(yáng)性率。對(duì)痰涂片39例陽(yáng)性和87例陰性肺結(jié)核患者TB-IGRA的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），說(shuō)明TB-IGRA也可用于痰涂片陰性結(jié)核病的診斷。而血清結(jié)核抗體靈敏度只有43.1%，血清結(jié)核抗體檢測(cè)主要以分枝桿菌外膜抗原為包被抗原，其他分枝桿菌感染也呈陽(yáng)性，這樣給檢測(cè)帶來(lái)干擾。

病原體檢測(cè)是診斷結(jié)核分枝桿菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是其陽(yáng)性率普遍都較低，文獻(xiàn)報(bào)道痰涂片和痰細(xì)菌培養(yǎng)的陽(yáng)性率約為40%[5]。本文痰涂片鏡檢和TBPCR在肺內(nèi)結(jié)核陽(yáng)性率也是只有32.1%、24.7%，靈敏度為30.9%、23.8%，和文獻(xiàn)報(bào)道相差不大。病原體的檢測(cè)標(biāo)本采集十分重要，不合格標(biāo)本大大降低其陽(yáng)性率，鏡檢、痰培養(yǎng)、TB-PCR檢測(cè)對(duì)人員和環(huán)境要求較高，且檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)。綜上所述，病原體檢測(cè)是診斷結(jié)核分枝桿菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但檢出率低，血清結(jié)核抗體檢測(cè)陽(yáng)性率也不高且干擾大。

而TB-IGRA作為結(jié)核桿菌感染診斷有效方法，特別是早期不明原因發(fā)熱臨床癥狀不明顯，可用其作早期篩查指標(biāo)，且檢測(cè)耗時(shí)短，便于操作，可用于臨床。

[1] 2010年全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查[J].中國(guó)防癆雜志,2012,8(34): 485-508.

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.01.016

R446.5

A

1671-0800(2016)01-0032-02

2015-08-10（本文編輯：孫海兒）

315600浙江省寧海，寧?？h第一醫(yī)院

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