魏學(xué)鋒（吉林省延吉市醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 延吉 133000）

酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原假陽性的影響因素分析

魏學(xué)鋒
（吉林省延吉市醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 延吉 133000）

目的 分析酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原出現(xiàn)假陽性的影響因素。方法 把血清標(biāo)本分為兩組，抗凝組和不抗凝組，采用膠體金標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)比較，全部的標(biāo)本進(jìn)行同步檢測(cè)，分析兩組乙型肝炎病毒表面抗原的陽性率。結(jié)果 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)不同血清狀態(tài)乙型肝炎病毒表面抗原的陽性率，抗凝組的陽性率明顯高于不抗凝組（P＜0.05），抗凝組的假陽性率比較高；酶聯(lián)免疫吸附法比金標(biāo)法的靈敏度高，特異性相比則略低。結(jié)論 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原產(chǎn)生不同結(jié)果的原因是多方面的，標(biāo)本溶血是最主要的原因，因此對(duì)血清標(biāo)本實(shí)行必要的處理可提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。

酶聯(lián)免疫吸附法；金標(biāo)法；乙型肝炎表面抗原；假陽性

我國是乙型肝炎病毒的高發(fā)區(qū)，乙型肝炎是一種具有傳染性和病毒性最具危害性的肝炎，乙型肝炎表面抗原一般是在感染乙型肝炎病毒1～2周之后出現(xiàn)，是感染乙型肝炎病毒的血清標(biāo)志物，也會(huì)乙型肝炎病毒感染的主要指標(biāo)之一。目前酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）已成為醫(yī)學(xué)上檢測(cè)感染性疾病的抗原、抗體的最普遍方法，具有靈敏度高、簡便快速、特異性較強(qiáng)、可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)，因此，在各類型醫(yī)院的檢驗(yàn)科中被廣泛應(yīng)用［1］。但是酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原可能會(huì)出現(xiàn)假陽性、假陰性等誤差現(xiàn)象。現(xiàn)就可能影響的因素作如下報(bào)道。

1　資料與方法

1.1一般資料：選取我院2012年1月至2014年1月接受的無償獻(xiàn)血者500例檢測(cè)的血標(biāo)本作為研究對(duì)象，按照血清標(biāo)本的不同狀態(tài)分為抗凝組和不抗凝組，每組250例，男性300例，女性200例，年齡在20～70歲，均無相關(guān)的肝病病史。。

1.2方法：嚴(yán)格按照ELISA試劑和金標(biāo)法試劑的說明書，分別對(duì)500例血清標(biāo)本進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)和金標(biāo)法檢測(cè)。

1.3評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)時(shí)，當(dāng)樣品的A 值大于或者等于2.1×陰性對(duì)照的平均值時(shí)，結(jié)果定性為陽性，相反則為陰性；以金標(biāo)方法檢測(cè)時(shí)，如果出現(xiàn)紅色的反應(yīng)線和質(zhì)控線則為陽性，若只出現(xiàn)紅色的質(zhì)控線則為陰性。ELISA法和金標(biāo)法檢測(cè)的結(jié)果均為陽性的，出具陽性報(bào)告書；若二者的檢測(cè)結(jié)果均為陰性，出具陰性報(bào)告書。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有研究數(shù)據(jù)均采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并進(jìn)行對(duì)比分析，卡方檢驗(yàn)，P＜0.05表明存在顯著差異性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。

2　結(jié) 果

2.1兩組陽性率對(duì)比分析：抗凝組和不抗凝組經(jīng)ELISA法檢測(cè)后的陽性率比較，抗凝組的陽性率比不抗凝組明顯要高，存在顯著差異性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義，P＜0.05，見表1。

表1　抗凝組和不抗凝組經(jīng)ELISA法檢測(cè)后的陽性率比較

2.2ELISA法和金標(biāo)法檢測(cè)的敏感性比較：經(jīng)ELISA法和金標(biāo)法檢測(cè)的HBsAg陽性率對(duì)比分析，結(jié)果顯示采用ELISA法檢測(cè)的HBsAg的陽性率為90%，而采用膠體金標(biāo)法檢測(cè)HBsAg的陽性率為75%，由此可見，ELISA法檢測(cè)的敏感性明顯高于金標(biāo)法檢測(cè)HBsAg的陽性率敏感性；但ELISA法檢測(cè)的特異度為96%，金標(biāo)法檢測(cè)的特異度為98%，ELISA法檢測(cè)相對(duì)于采用金標(biāo)法檢測(cè)的特異性要略低。

3　討 論

乙型肝炎病原的主要標(biāo)志物和判斷依據(jù)是乙型肝炎病毒表面抗原，準(zhǔn)確的判斷和及時(shí)對(duì)乙型肝炎進(jìn)行預(yù)防和治療有著極其重要的意義。檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的方法有ELISA法、膠體金標(biāo)法、化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）等。膠體金法常用于急診中，速度快是其優(yōu)點(diǎn)，但與其他的方法相比，漏檢或誤讀關(guān)于弱陽性結(jié)果的可能性大。CMIA法是一種免疫分析技術(shù)，實(shí)行封閉式操作、全自動(dòng)儀器和配套試劑進(jìn)行檢測(cè)，具有較高的靈敏度和較好的特異性，將人為因素降至最低限度。但由于該試劑主要依靠進(jìn)口，價(jià)格比較昂貴，因此通常應(yīng)用于弱陽性反應(yīng)性的標(biāo)本的確認(rèn)。ELISA法由于具備快速簡便、靈敏度高、特異性好等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)。但是同一個(gè)人在不同醫(yī)院乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)結(jié)果可能不一致，甚至在同一檢驗(yàn)室檢查的同一標(biāo)本得出的結(jié)果也可能出現(xiàn)不同［2］。ELISA操作的每一個(gè)步驟以及血液標(biāo)本的處理，如操作不當(dāng)，當(dāng)中的任何一個(gè)環(huán)節(jié)都有可能影響到最終的檢測(cè)結(jié)果，導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性或假陽性的錯(cuò)誤結(jié)果［3］。在實(shí)際的操作過程當(dāng)中要嚴(yán)格按照說明書的操作步驟實(shí)行操作，同時(shí)做好室間評(píng)價(jià)和室內(nèi)質(zhì)控，謹(jǐn)慎認(rèn)真地檢測(cè)每一份標(biāo)本，對(duì)檢查的結(jié)果存在疑義要進(jìn)行復(fù)查，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，以免出現(xiàn)假陽性和假陰性的判斷結(jié)果。

本研究選取不同狀態(tài)的血清標(biāo)本作為研究對(duì)象，以酶聯(lián)免疫吸附法和膠體金標(biāo)法兩種不同的檢測(cè)方法對(duì)比檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原。結(jié)果表明，在不同狀態(tài)的血清分組檢測(cè)中，抗凝組的陽性率比不抗凝組的陽性率明顯要高很多，由此可見抗凝組的假陽性率比較高。而兩種不同檢測(cè)方法的比較顯示酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的靈敏度高于膠體金標(biāo)法檢測(cè)的靈敏度，但在特異性方面略低于膠體金標(biāo)法檢測(cè)。即標(biāo)本中殘留的纖維蛋白是導(dǎo)致乙型肝炎病毒表面抗原出現(xiàn)假陽性的主要原因，由于標(biāo)本溶血或分離不夠徹底，造成在操作中洗滌比較困難，最終導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差。

為了盡可能將ELISA法檢測(cè)的誤差降到最低限度，減少檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽性，獲取更為準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，可以從以下幾個(gè)方面著手：①使用充分凝固的血清標(biāo)本（抗凝血標(biāo)本），使標(biāo)本的離心徹底分離；②將標(biāo)本隔夜后檢測(cè)或者進(jìn)行加熱處理，確保標(biāo)本血塊濃縮，使其中的非特異性活性物質(zhì)全部或部分失活，降低由于異物所產(chǎn)生的假陽性結(jié)果；③加大離心轉(zhuǎn)速分離血清，將離心的時(shí)間延長，避免纖維蛋白和紅細(xì)胞對(duì)離心的影響，徹底分離離心標(biāo)本；④按照說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間；⑤加樣操作的時(shí)候一定要嚴(yán)格注意操作手法的精確，不能吸到纖維蛋白或紅細(xì)胞，以免這兩種物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成誤判影響［4］。

綜上所述，乙型肝炎病毒表面抗原是診斷乙型肝炎病的重要依據(jù)，為了提高對(duì)患者診斷的準(zhǔn)確性，在采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原的時(shí)候，必須要嚴(yán)格按照操作步驟，注意操作的手法，避免由于人為的因素出現(xiàn)誤判，防止出現(xiàn)假陰性、假陽性的結(jié)果，充分發(fā)揮酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原的臨床應(yīng)用價(jià)值，讓患者受益。

［1］ 王一丁.酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)HBsAg結(jié)果的影響因素探討［J］.海南醫(yī)學(xué)，2012，23（24）：103-105.

［2］ 劉文琴，張雄，董明國，等.確認(rèn)試驗(yàn)在乙型肝炎表面抗原弱陽性標(biāo)本中的臨床應(yīng)用［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21（10）：2152-2153.

［3］ 陳冰.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙肝表面抗原的影響因素探討［J］.北方藥學(xué)，2013，10（4）：61.

［4］ 胡越，蔣瑞馨，邵家幼.兩種酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙肝表面抗原的結(jié)果比較［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，30（3）：269-270.

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1671-8194（2016）23-0113-02