吳大鵬，路　坦，馬　超，徐海斌，趙　斌，梁秋冬，董玉珍

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨外科，河南新鄉(xiāng) 453100)

?

垂體瘤轉(zhuǎn)化基因1在骨肉瘤中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系*

吳大鵬，路坦，馬超，徐海斌，趙斌，梁秋冬，董玉珍△

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨外科，河南新鄉(xiāng) 453100)

目的分析垂體瘤轉(zhuǎn)化基因1(PTTG1)在骨肉瘤組織中的表達(dá)，并探討其表達(dá)與骨肉瘤患者預(yù)后的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)71例骨肉瘤組織和對(duì)應(yīng)的71例正常骨組織中PTTG1蛋白的表達(dá)，并分析其表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理學(xué)參數(shù)和預(yù)后之間的關(guān)系。結(jié)果PTTG1蛋白在骨肉瘤組織中的陽性表達(dá)率(77.46%，55/71)顯著高于正常骨組織(18.31%，13/71)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTTG1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者的肺轉(zhuǎn)移和臨床階段密切相關(guān)(P<0.05)。PTTG1高表達(dá)的骨肉瘤患者的存活時(shí)間明顯低于PTTG1低表達(dá)的骨肉瘤患者(P<0.05)。結(jié)論P(yáng)TTG1蛋白在骨肉瘤組織中的表達(dá)率顯著增高，且與肺轉(zhuǎn)移和生存時(shí)間有一定相關(guān)性。

垂體瘤轉(zhuǎn)化基因1；骨肉瘤；臨床病理學(xué)參數(shù)；預(yù)后

垂體瘤轉(zhuǎn)化基因1(pituitary transforming gene 1，PTTG1)定位于人染色體5q33.3，于20世紀(jì)90年代從GH4大鼠垂體腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因，證實(shí)其促進(jìn)轉(zhuǎn)化和體內(nèi)致瘤作用[1]。越來越多的研究表明，PTTG1在許多腫瘤中高表達(dá)，牽涉到許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、進(jìn)展及預(yù)后[2-6]，并可能成為腫瘤治療的新的分子靶點(diǎn)[7]。在本研究中，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了骨肉瘤組織中PTTG1蛋白表達(dá)，并分析其表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系，進(jìn)而闡明其在骨肉瘤患者預(yù)后判定中的可能作用，探討以PTTG1為分子靶點(diǎn)的骨肉瘤患者的診斷、治療及預(yù)后判定提供新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料71例骨肉瘤組織和71例正常骨組織取自新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2001～2011年手術(shù)切除標(biāo)本，并經(jīng)病理組織學(xué)專家診斷并確診。整個(gè)試驗(yàn)均與患者或者家屬簽署知情同意書，經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)審查實(shí)驗(yàn)方案并通過。所有骨肉瘤患者在術(shù)前均未接受任何形式的治療，包括放療、化療及免疫治療。其中20例患者病理確診時(shí)，通過常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)了肺轉(zhuǎn)移灶，單側(cè)肺轉(zhuǎn)移13例，雙側(cè)肺轉(zhuǎn)移7例；治療過程中出現(xiàn)16例肺轉(zhuǎn)移患者。所有患者活檢取材后，均經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化手術(shù)和至少3個(gè)療程的標(biāo)準(zhǔn)化化療。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學(xué)PTTG1鼠抗人多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，免疫組織化學(xué)SP試劑盒和DAB顯色劑均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)操作步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。PTTG1抗體稀釋濃度為1∶50。以PBS代替Ⅰ抗作為陰性對(duì)照。

1.2.2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果評(píng)估免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)是骨肉瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒。其評(píng)判的標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[8]。隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)(每例組織樣本至少計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞)，陽性細(xì)胞數(shù)小于10%，計(jì)1分；10%～<50%，計(jì)2分；50～<80%，計(jì)3分；≥80%，計(jì)4分。輕度染色，計(jì)1分；中度染色，計(jì)2分；強(qiáng)染色，計(jì)3分。陽性細(xì)胞數(shù)比率與染色強(qiáng)度的乘積是每例骨肉瘤標(biāo)本的染色總分?？偡譃?～3為陰性，4～12為陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，預(yù)后分析采用Kaplan-Meier曲線進(jìn)行，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1PTTG1蛋白在正常骨組織和骨肉瘤組織中的表達(dá)PTTG1蛋白主要定位于骨肉瘤的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，呈淺黃色至棕黃色顆粒(圖1)。PTTG1在骨肉瘤組織的陽性表達(dá)率(77.46%，55/71)顯著高于正常骨組織(18.31%，13/71)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

A：正常骨組織；B：骨肉瘤組織。

圖1　　　　　正常骨組織和骨肉瘤組織PTTG1蛋白的表達(dá)(×400)

2.2PTTG1蛋白的表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系PTTG1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者肺轉(zhuǎn)移和臨床階段密切相關(guān)，但與骨肉瘤患者的年齡、性別、腫瘤大小及解剖位置無關(guān)(P>0.05)，見表2。在20例具有轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者中，PTTG1蛋白表達(dá)的陽性率為100%。

表2　　PTTG1蛋白表達(dá)和骨肉瘤患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系[n(%)]

2.3PTTG1蛋白表達(dá)對(duì)骨肉瘤患者預(yù)后的影響骨肉瘤患者存活曲線分析結(jié)果顯示，55例PTTG1陽性染色的患者中有34例死亡，病死率為61.8%，而16例PTTG1陰性染色的患者中有4例死亡，病死率為25.0%。PTTG1陽性的染色患者的存活時(shí)間顯著低于PTTG1陰性染色患者的存活時(shí)間，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。

圖2　　PTTG1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者預(yù)后之間的關(guān)系

3　討　　論

惡性腫瘤從正常組織中演變的過程牽涉到很多基因表達(dá)及其功能的變化，目前研究顯示，PTTG1是一種重要的原癌基因，在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，并牽涉到許多腫瘤的發(fā)生和演進(jìn)過程。Wondergem等[9]研究報(bào)道顯示，PTTG1定位于染色體5q區(qū)域，腎透明細(xì)胞癌在這一區(qū)域中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)PTTG1的擴(kuò)增，從而提示PTTG1的過表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。此外，對(duì)于124例的子宮內(nèi)膜癌組織、28例不典型增生組織和35例正常組織的表達(dá)譜分析顯示，PTTG1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，是正常組織向子宮內(nèi)膜癌組織演進(jìn)中參與的主要基因之一，因而表明PTTG1與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展之間的密切聯(lián)系[10]。Liang等[11]研究表明，PTTG1 mRNA和蛋白在肝癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織，抑制肝癌中PTTG1的表達(dá)顯著降低肝癌細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并且caspase-3、bax、p21、p53的表達(dá)均顯著增加，表明抑制PTTG1的表達(dá)可能是肝癌分子靶向治療的新的策略。有研究發(fā)現(xiàn)，通過上調(diào)bax基因表達(dá)可以誘導(dǎo)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的凋亡[12]。

本研究先前的研究發(fā)現(xiàn)，PTTG1表達(dá)下調(diào)可以降低骨肉瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞侵襲能力[13]。因此在本研究中，為了闡明PTTG1與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展之間的可能的作用，利用免疫組織化學(xué)檢測(cè)了71例正常骨組織和71例骨肉瘤組織中PTTG1蛋白的表達(dá)，本研究發(fā)現(xiàn)71例骨肉瘤樣本中，55例呈現(xiàn)PTTG1的陽性表達(dá)，而71例正常骨組織樣本中，13例為PTTG1的陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示PTTG1可能是正常骨組織向骨肉瘤轉(zhuǎn)變過程中發(fā)揮重要作用的基因之一，因而骨肉瘤中PTTG1水平的調(diào)控可能成為骨肉瘤分子靶向治療的新的分子標(biāo)記。

目前，許多研究已經(jīng)鑒定了骨肉瘤大量的分子標(biāo)記，這些標(biāo)記對(duì)于預(yù)測(cè)患者的預(yù)后發(fā)揮重要的作用，包括診斷患者的臨床階段、肺轉(zhuǎn)移的狀態(tài)和患者總生存率等[14]。盡管這些大量的分子標(biāo)記可能在骨肉瘤診斷和預(yù)后的判定中發(fā)揮重要作用，但尚需要進(jìn)一步的臨床證實(shí)。鑒于上述PTTG1與骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展中的可能作用，作者提出是否PTTG1與骨肉瘤的轉(zhuǎn)移以及臨床階段密切相關(guān)，是否可能成為骨肉瘤預(yù)后判定的分子標(biāo)記？為了解決上述問題，本文進(jìn)一步分析了PTTG1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者臨床病理學(xué)參數(shù)和預(yù)后之間的關(guān)系，本研究發(fā)現(xiàn)PTTG1蛋白表達(dá)與骨肉瘤患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和臨床階段密切相關(guān)(P<0.05)，但與患者的年齡、性別、腫瘤大小及解剖位置無關(guān)(P>0.05)。本研究發(fā)現(xiàn)，在所有發(fā)生轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者中，均呈現(xiàn)出PTTG1蛋白的陽性表達(dá)，這些研究提示PTTG1可能成為骨肉瘤患者轉(zhuǎn)移判定的預(yù)測(cè)因子。

進(jìn)一步的骨肉瘤患者存活曲線分析結(jié)果表明，PTTG1陽性表達(dá)的骨肉瘤患者的存活時(shí)間顯著低于PTTG1陰性表達(dá)的骨肉瘤患者(P<0.05)，這與PTTG1在腎透明細(xì)胞癌預(yù)后中的作用研究報(bào)道一致[13]。這一研究提示PTTG1有望成為骨肉瘤患者預(yù)后判定的重要基因。

總之，本研究結(jié)果證實(shí)了骨肉瘤組織中PTTG1蛋白的高表達(dá)，因而其在骨肉瘤中發(fā)揮癌基因的功能。PTTG1的高表達(dá)與骨肉瘤患者的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和臨床階段密切相關(guān)，進(jìn)一步的分析提示PTTG1可能成為骨肉瘤患者預(yù)后的分子標(biāo)記。未來進(jìn)一步詳細(xì)闡明骨肉瘤中PTTG1基因的功能和分子調(diào)控機(jī)制有望為骨肉瘤患者的診斷、治療和預(yù)后判斷奠定基礎(chǔ)。

[1]Hamid T,Kakar SS.PTTG and cancer[J].Histol Histopathol,2003,18(1):245-251.

[2]Zou H,McGarry TJ,Bernal T,et al.Identification of a vertebrate sister-chromatid separation inhibitor involved in transformation and tumorigenesis[J].Science,1999,285(5426):418-422.

[3]Salehi F,Scheithauer BW,Sharma S,et al.Immunohistochemical expression of PTTG in brain tumors[J].Anticancer Res,2013,33(1):119-122.

[4]Lewy GD,Sharma N,Seed RI,et al.The pituitary tumor transforming gene in thyroid cancer[J].J Endocrinol Invest,2012,35(4):425-433.

[5]Xiao JQ,Liu XH,Hou B,et al.Correlations of pituitary tumor transforming gene expression with human pituitary ademomas:a meta-analysis[J].PLoS One,2014,9(3):e90396.

[6]Zhang J,Yang Y,Chen L,et al.Overexpression of pituitary tumor transforming gene(PTTG)is associated with tumor progression and poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma[J].Acta Histochem,2014,116(3):435-439.

[7]Wang HT,Zhang YJ,Zhou AQ,et al.Effects of silencing connexin43 on expression of pituitary tumor-transforming gene in prolactinomas[J].Neurol Res,2015,37(2):153-158.

[8]Kuester D,Dar AA,Moskaluk CC,et al.Early involvement of death-associated protein kinase promoter hypermethylation in the carcinogenesis of Barrett′s esophageal adenocarcinoma and its association with clinical progression[J].Neoplasia,2007,9(3):236-245.

[9]Wondergem B,Zhang ZF,Huang DC,et al.Expression of the PTTG1 oncogene is associated with aggressive clear cell renal cell carcinoma[J].Cancer Res,2012,72(17):4361-4371.

[10]Feng ZZ,Chen JW,Yang ZR,et al.Expression of PTTG1 and PTEN in endometrial carcinoma:correlation with tumorigenesis and progression[J].Med Oncol,2012,29(1):304-310.

[11]Liang M,Chen X,Liu W,et al.Role of the pituitary tumor transforming gene 1 in the progression of hepatocellular carcinoma[J].Cancer Biol Ther,2011,11(3):337-345.

[12]黃煜朗，唐毓金，王俊利，等．白花蛇舌草對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞Bax基因表達(dá)的影響[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2014，43(35)：4708-4710．

[13]吳大鵬，夏永華，徐海斌，等．垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1表達(dá)下調(diào)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞侵襲能力的影響及其分子機(jī)制[J]．中華病理學(xué)雜志，2014，43(10)：695-698．

[14]Chen D,Zhang YJ,Zhu KW,et al.A systematic review of vascular endothelial growth factor expression as a biomarker of prognosis in patients with osteosarcoma[J].Tumour Biol,2013,34(3):1895-1899.

Expression of pituitary transforming gene 1 in osteosarcoma tissues and its association with prognosis*

WuDapeng,LuTan,MaChao,XuHaibin,ZhaoBin,LiangQiudong,DongYuzhen△

(DepartmentofOrthopedics,theFirstAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Xinxiang,Henan453100,China)

ObjectiveTo investigate the expression of pituitary transforming gene 1 (PTTG1) in osteosarcoma (OS) tissues and explore its association with the prognosis.MethodsExpression of PTTG1 protein was detected by immunohistochemistry in 71 cases of OS tissues and 71 cases of paired normal bone tissues,and its associations with clinicopathological features and prognosis were investigated.ResultsPositive expression ratio of PTTG1 in OS tissues (77.46%,55/71) was significantly higher than that in normal bone tissues (18.31%,13/71),and there was significant difference (P<0.05).Expression of PTTG1 protein was tightly associated with lung metastasis and clinical staging of OS patients (P<0.05).The survival time of OS patients with high PTTG1 level was significantly lower than those with low PTTG1 level (P<0.05).ConclusionPositive expression ratio of PTTG1 protein in OS tissues is elevated significantly,and is associated with lung metastasis as well as survival time.

pituitary transforming gene 1;osteosarcoma;clinicopathological features;prognosis

論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.24.018

河南省高?？萍紕?chuàng)新人才支持計(jì)劃(2010HASTIT036)。作者簡(jiǎn)介：吳大鵬(1980-)，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事關(guān)節(jié)及脊柱外科、骨腫瘤的臨床與基礎(chǔ)研究?！?/p>

,Tel：(0373)4404430;E-mail:xxyxydyz@163.com。

R738.1

A

1671-8348(2016)24-3366-03

2016-01-15

2016-03-21)