劉 沛（河南省鎮(zhèn)平縣人民醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 474250）

肌酸激酶同工酶CK-MB試劑盒抗干擾性能的評(píng)估

劉 沛
（河南省鎮(zhèn)平縣人民醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 474250）

目的 對(duì)不同廠家的肌酸激酶同工酶（CK-MB）檢測(cè)試劑盒抗干擾性能進(jìn)行評(píng)估。方法 采用奧林巴斯AU2700 全自動(dòng)生化分析儀對(duì)不同廠家的肌酸激酶同工酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗干擾性能比較。結(jié)果 各廠家試劑對(duì)膽紅素、血紅蛋白、維生素C、乳糜的抗干擾能力差別不大，另外對(duì)于癌癥患者等樣本檢測(cè)結(jié)果中出現(xiàn)CKMB大于CK的情況均類似；然而，僅美康試劑對(duì)于臨床中肝素血漿樣本的檢測(cè)正常，未出現(xiàn)結(jié)果為負(fù)值的情況。結(jié)論 各廠家的試劑抗干擾性能普遍一致，對(duì)于出現(xiàn)CKMB大于CK的現(xiàn)象是由方法學(xué)本身的缺陷所致；另外，對(duì)于檢測(cè)肝素血漿樣本中出現(xiàn)負(fù)值現(xiàn)象，可能與各廠家的試劑配方有關(guān)。

肌酸激酶同工酶；抗干擾；性能評(píng)估

肌酸激酶是一種與細(xì)胞內(nèi)能量轉(zhuǎn)運(yùn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶，其主要功能在于催化磷酸根的轉(zhuǎn)運(yùn)，在三磷酸腺苷（ATP）的參與下，催化肌酸磷酸化，從而形成磷酸肌酸（CP）和二磷酸腺苷（ADP）。作為臨床診斷心肌損傷的常規(guī)指標(biāo)，因此必須重視其檢測(cè)結(jié)果的正確性。然而，由于臨床檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)該試劑檢測(cè)結(jié)果常出現(xiàn)異常現(xiàn)象。為此，我們按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）指南文件要求對(duì)5個(gè)不同廠家CKMB試劑的抗干擾性能進(jìn)行了比對(duì)評(píng)估，報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本收集：收集同一人日常進(jìn)行CKMB檢測(cè)的新鮮、無(wú)溶血、黃疸、乳糜血清標(biāo)本及其肝素血漿標(biāo)本（同時(shí)采集）共200份，收集確診為癌癥患者的血清標(biāo)本40份，儲(chǔ)存于4 ℃冰箱。

1.1.2試劑：購(gòu)自瑞士Roche公司CKMB試劑（批號(hào)：688815-01）、愛爾蘭歐迪診斷公司CKMB試劑（批號(hào)：P5671）、北京九強(qiáng)公司CKMB試劑（批號(hào)：13-07020P）、利德曼公司CKMB試劑（批號(hào)：301241L）、寧波美康公司CKMB試劑（批號(hào)：20140108）、寧波美康公司CK試劑（批號(hào)：20140124）。

1.1.3儀器：奧林巴斯AU2700全自動(dòng)生化分析儀。

1.2檢測(cè)原理：CK由M和B兩個(gè)亞單位組成三種不同的二聚體，分別為CK-BB、CK-MB和CK-MM。該試劑盒采用免疫抑制法測(cè)定，通過利用抗人M亞單位的抗體，抑制M亞單位，然后測(cè)定剩余的BB亞單位活性，乘2即得CK-MB活力。

1.3方法

1.3.1測(cè)定參數(shù)：按照各廠家試劑說明書要求設(shè)置檢測(cè)參數(shù)。

1.3.2常規(guī)干擾檢測(cè)：試劑的抗干擾性能按CLSI-7A［1］中的方法進(jìn)行試驗(yàn)評(píng)價(jià)：分別向高濃度、低濃度混合血清中分別加入病理最高濃度的干擾物質(zhì)（膽紅素、人血紅蛋白、維生素C、乳糜）進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3肝素血漿樣本干擾的檢測(cè)：選取100個(gè)體檢正常人的肝素血漿樣本和同時(shí)采集的血清樣本，用5個(gè)廠家的試劑進(jìn)行檢測(cè)比較。另外，將檢測(cè)結(jié)果為負(fù)值的肝素血漿樣本對(duì)應(yīng)的血清樣本中挑出，加入常規(guī)濃度的肝素進(jìn)行模擬干擾，并對(duì)模擬樣本進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.3.4癌癥患者樣本的檢測(cè)：選取40個(gè)已確診為癌癥患者的血清樣本與100份體檢正常的血清樣本，用5個(gè)廠家的CKMB試劑及寧波美康公司的CK試劑進(jìn)行檢測(cè)。

2　結(jié) 果

2.1常規(guī)干擾檢測(cè)結(jié)果：將高、低濃度血清混合得中濃度血清，將該血清樣本分成若干份，分別加入最高病理濃度的干擾物質(zhì)，測(cè)定加入干擾物質(zhì)前后CKMB值，當(dāng)結(jié)果相對(duì)偏差超過10%時(shí)作為有明顯干擾的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。檢測(cè)結(jié)果見表1，當(dāng)添加膽紅素（288 mg/L）時(shí)，僅歐迪試劑受膽紅素負(fù)干擾，其他抗干擾能力各廠家均在10%的偏差以內(nèi)。當(dāng)添加人血紅蛋白（5 g/L）時(shí)，各廠家試劑均呈正干擾。而對(duì)于維生素C（30 mg/L）、乳糜（1450濁度），各廠家均不受干擾。

表1　各廠家CKMB常規(guī)干擾檢測(cè)結(jié)果

2.2肝素血漿樣本檢測(cè)結(jié)果：通過對(duì)100個(gè)體檢正常人的肝素血漿樣本和同時(shí)采集的血清樣本用以上5個(gè)廠家的試劑進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅有寧波美康生物的CKMB試劑在檢測(cè)肝素血漿樣本時(shí)未出現(xiàn)負(fù)值檢測(cè)結(jié)果，其余4家試劑均出現(xiàn)部分肝素血漿樣本結(jié)果為負(fù)值（表2）。同時(shí)，將檢測(cè)結(jié)果為負(fù)值的肝素血漿樣本對(duì)應(yīng)的血清樣本中挑出，加入常規(guī)濃度的肝素進(jìn)行模擬干擾檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5個(gè)廠家的試劑均未出現(xiàn)負(fù)值，檢測(cè)結(jié)果與未加入肝素前的血清樣本檢測(cè)結(jié)果一致。

表2　各廠家CKMB試劑對(duì)血清、肝素血漿樣本檢測(cè)結(jié)果異常值統(tǒng)計(jì)

2.3癌癥患者樣本的檢測(cè)結(jié)果：在對(duì)40份已確診為癌癥患者的血清樣本與100份體檢正常的血清樣本進(jìn)行檢測(cè)比較中，同時(shí)利用5個(gè)廠家的CKMB試劑及寧波美康公司的CK試劑進(jìn)行樣本檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示，在40份癌癥患者中，5個(gè)廠家的試劑均存在超過一半的樣本CKMB結(jié)果大于CK的現(xiàn)象，而在100份體檢正常的血清樣本中，未發(fā)現(xiàn)有CKMB檢測(cè)結(jié)果大約CK的現(xiàn)象（表3）。

表3　各廠家CKMB試劑對(duì)癌癥、正常樣本檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3　討 論

肌酸激酶同工酶CK-MB作為診斷急性心肌梗死或心肌壞死的特異性指標(biāo)，已經(jīng)得到臨床檢驗(yàn)的廣泛認(rèn)可與應(yīng)用，因此，CKMB試劑結(jié)果對(duì)于臨床診斷的準(zhǔn)確性保證尤為重要。然而在臨床檢驗(yàn)中，常遇到在檢測(cè)肝素血漿樣本時(shí)出現(xiàn)負(fù)值檢測(cè)結(jié)果的現(xiàn)象，通過本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肝素血漿樣本對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的影響不是由于肝素造成的。鑒于血漿與血清的成分存在差異，可初步推斷是由于血漿中的某些蛋白成分造成了對(duì)檢測(cè)的干擾，從而使得檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值。而去除這種干擾可通過優(yōu)化試劑配方達(dá)到抗干擾的效果，在本研究中所選用的5個(gè)廠家試劑中，寧波美康的CKMB試劑效果在檢測(cè)肝素血漿樣本中的抗干擾效果最佳。

同時(shí)，在臨床檢驗(yàn)過程中，常出現(xiàn)血清中CK-MB活性假陽(yáng)性升高，甚至大于總CK活性的現(xiàn)象，也給臨床診斷增加了難度。然而，造成此類異常檢測(cè)結(jié)果主要還是由免疫抑制法的局限性所導(dǎo)致的。因?yàn)榛诿庖咭种品ǖ臋z測(cè)原理，當(dāng)血清樣本中CK含量很高，而試劑中抗M亞基的抗體量相對(duì)不足時(shí)，M亞基活性沒有得到完全抑制，因而造成CK-MB檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性升高［1］。同時(shí)，由于免疫抑制法是基于完全忽略了血清中CK-BB的活性，因此，當(dāng)血清中CK-BB含量增加時(shí)，也會(huì)導(dǎo)致CK-MB檢測(cè)結(jié)果異常［1-2］。此外，當(dāng)樣本中存在巨CK分子時(shí)，由于抗M亞基的抗體無(wú)法抑制巨CK分子中M亞基或B亞基的活性，同樣會(huì)使CK-MB檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性升高。正是由于大部分癌癥患者體內(nèi)存在巨CK分子，導(dǎo)致了其CKMB大于CK的原因［3-4］。另外，當(dāng)樣本存在溶血現(xiàn)象時(shí)，紅細(xì)胞和血小板中大量存在的腺苷酸激酶也可影響CK-MB的檢測(cè)結(jié)果，造成假陽(yáng)性偏高。

［1］ 王愛華，蔣永康，劉靖，等.高活力CK不稀釋可致CK-MB假性增高［J］.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2009，7（1）:45.

［2］ 李小冬，吳杰，許紹輝.血清中巨CK1、巨CK2和CK-BB的臨床意義［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，1998，2（1）:46-47.

［3］ 劉群，王敏，楊玉萍，等.非心源性疾病患者M(jìn)B型肌酸激酶活性假性升高原因分析［J］.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，35（12）:1296-1298.

［4］ 王英春，邱廣斌.血清巨CK_2檢測(cè)在腫瘤診斷中的意義探討［C］.第十屆全軍檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議，2005.

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1671-8194（2016）22-0166-02