遲濤　錢東　王銳　郭亞飛　袁中旭

端粒結(jié)合蛋白PinX1在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義

遲濤1錢東2王銳1郭亞飛1袁中旭1

目的：研究端粒結(jié)合蛋白PinX1在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法：收集共86例接受根治性手術(shù)的大腸癌病人術(shù)后標(biāo)本，運(yùn)用免疫組化的方法（IHC）檢測(cè)標(biāo)本中PinX1的表達(dá)并分析PinX1的表達(dá)與病人臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：與正常結(jié)腸上皮相比，PinX1在大腸癌組織中呈低表達(dá)。生存分析發(fā)現(xiàn)PinX1的低表達(dá)預(yù)示著病人的不良預(yù)后，多因素分析揭示PinX1的表達(dá)是預(yù)測(cè)病人預(yù)后的獨(dú)立因素。結(jié)論：研究揭示PinX1是大腸癌病人預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，其可作為臨床大腸癌患者預(yù)后分析判斷依據(jù)之一。

大腸癌PinX1臨床預(yù)后

大腸癌的發(fā)病率占據(jù)歐美國(guó)家癌癥發(fā)病率的第2位，全世界每年大約有100萬(wàn)新增病例，同時(shí)至少50萬(wàn)人死亡［1～2］。在中國(guó)，大腸癌的發(fā)病率逐年上升，排在惡性腫瘤第4～6位。大腸癌從遺傳學(xué)上實(shí)質(zhì)是基因相關(guān)病，癌基因的激活和（或）抑癌基因的失活與其發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。尋找更多更有效的可以預(yù)測(cè)病人預(yù)后及治療的基因靶標(biāo)對(duì)于優(yōu)化病人的治療方案及改善臨床治療效果十分必要。

1　資料與方法

1.1一般資料從天津市腫瘤醫(yī)院收集2005～2010年86例大腸癌病人及25例正常大腸組織石蠟標(biāo)本（標(biāo)本來(lái)源于結(jié)直腸良性腫瘤患者）。所有組織均為術(shù)后標(biāo)本并經(jīng)過病理學(xué)確診。所有納入研究的病人均具有完整的隨訪資料。病人的臨床病理特征見表1。

1.2方法

1.2.1免疫組化染色常規(guī)石蠟包埋組織，4μm厚連續(xù)切片后脫蠟，梯度酒精水化后進(jìn)行抗原修復(fù)，自然冷卻至室溫。加3%雙氧水（H2O2）室溫孵育5～10min，PBS沖洗。滴加正常山羊血清封閉非特異性抗原后，加一抗，4℃孵育過夜，PBS沖洗。滴加二抗37℃反應(yīng)15min，PBS沖洗。DAB顯色。蘇木素輕度復(fù)染，脫水、透明、封片。免疫組織化學(xué)陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：免疫組化結(jié)果以陽(yáng)性染色腫瘤細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比進(jìn)行打分，將PinX1陽(yáng)性染色細(xì)胞比率＞50%定為高表達(dá)組，而＜50%定為低表達(dá)組。病理結(jié)果由兩位病理醫(yī)生在不知病例資料的情況下，獨(dú)立進(jìn)行閱片并評(píng)分，當(dāng)出現(xiàn)分歧時(shí)，由兩位專家將不同的判斷結(jié)果進(jìn)行重新評(píng)估，直到兩位專家得到一致的意見。

1.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用Kaplan-Meier法計(jì)算不同分組病人的生存率，Log-rank法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，Cox回歸模型進(jìn)行單變量及多變量預(yù)后分析，相關(guān)計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)以±s表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　PinX1的表達(dá)和病人臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

2　結(jié)果

2.1PinX1蛋白在大腸癌組織中呈低表達(dá)通過免疫組化檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)，PinX1在細(xì)胞核中表達(dá)（圖1A-D）。根據(jù)我們的評(píng)分原則（見材料與方法），總共86例病人腫瘤組織中，PinX1低表達(dá)的為52例（60%），而在25例正常大腸黏膜組織中，PinX1低表達(dá)的僅為6例（24%），兩者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.012）。此外，PinX1的表達(dá)水平和腫瘤的分化程度呈正相關(guān)（P=0.037；圖1）。未發(fā)現(xiàn)PinX1的表達(dá)與病人其它臨床病理因素之間的相關(guān)性（P＞0.05；圖1）。

圖1　PinX1在正常結(jié)腸腺體及大腸癌組織中的表達(dá)（免疫組化染色）

2.2腫瘤組織中PinX1低表達(dá)預(yù)示病人不良預(yù)后根據(jù)我們的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將病人分別分為兩個(gè)亞組：PinX1高表達(dá)組和PinX1低表達(dá)組。我們發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是比較總生存率（圖2A，P=0.016）還是無(wú)病生存率（圖2B，P=0.042），PinX1高表達(dá)組病人的預(yù)后均明顯好于PinX1低表達(dá)組，比較數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。多因素分析顯示，和病人TNM分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等指標(biāo)一樣，PinX1的表達(dá)可以作為預(yù)測(cè)病人生存的獨(dú)立指標(biāo)（P=0.015；見表2）。

圖2　Kaplan-Meier分析PinX1的表達(dá)和入組的大腸癌病人的生存預(yù)后關(guān)系

表2　多因素Cox回歸分析結(jié)直腸癌總生存期

3　討論

從分子水平尋找預(yù)測(cè)腫瘤病人預(yù)后生物標(biāo)志物的研究越來(lái)越廣泛，而相關(guān)研究成果也越來(lái)越多地應(yīng)用于腫瘤的診斷、治療及預(yù)后判斷。PinX1是在進(jìn)化上高度保守并與端粒/端粒酶相互作用的核蛋白。因?yàn)槠渑c端粒酶結(jié)合并且其蛋白炭端有較強(qiáng)的抑制端粒酶活性的功能，PinX1被認(rèn)為是一種端粒酶抑制因子和潛在的抑癌基因［3］。有研究報(bào)道PinX1在肝癌中低表達(dá)，而錢東等［4～5］研究提示其在食管鱗癌組織中呈高表達(dá)并與病人放化療抵抗相關(guān)。這提示PinX1在腫瘤中的表達(dá)及作用具有腫瘤特異性。本研究旨在研究PinX1在大腸癌組織中的表達(dá)情況及其對(duì)病人生存預(yù)后的影響。

我們的研究發(fā)現(xiàn)：與正常的結(jié)腸組織相比，PinX1在大腸癌病人組織中普遍呈現(xiàn)低表達(dá)。我們知道，比較正常組織與腫瘤組織遺傳學(xué)及表觀遺傳學(xué)的差異是現(xiàn)代腫瘤分子生物學(xué)的基石，也是發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)基因（包括癌基因和抑癌基因）的有效途徑［6～7］。PinX1的這種差異表達(dá)提示我們其可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著一定的功能。進(jìn)一步，我們根據(jù)PinX1在大腸癌中的表達(dá)強(qiáng)度不同，將病人分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。生存分析的結(jié)果清晰的顯示，PinX1高表達(dá)組病人的預(yù)后明顯好于PinX1低表達(dá)組，PinX1的表達(dá)可以作為預(yù)測(cè)病人預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。這些結(jié)果和之前在腸癌及肝癌中的相關(guān)研究結(jié)果一致［4～7］。但是，也有研究提示PinX1在食管鱗癌中呈高表達(dá)，PinX1高表達(dá)是接受根治性放化療食管鱗癌病人預(yù)后不良因素［5］。這提示PinX1在腫瘤中的表達(dá)、狀態(tài)及功能并非一成不變，而是具有腫瘤特異性。腺癌和鱗癌中PinX1參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)功能可能不同。

綜上所述，我們的研究發(fā)現(xiàn)，PinX1在大腸癌中呈低表達(dá)，而大腸癌中表達(dá)PinX1較高的患者總體預(yù)后較PinX1較低的患者好，PinX1可以作為預(yù)測(cè)大腸癌患者預(yù)后判斷分子生物學(xué)標(biāo)志之一。

1Henry LR，Lee HO，Lee JS，et al.Clinical implications of fibroblast activation protein in patients with colon cancer.Clinical cancer research：an official journal of the American Association for Cancer Research.2007；13：1736～1741.

2Cancer statistics.Jama.2013，310：982.

3Zhou XZ，Lu KP.The Pin2/TRF1-interacting protein PinX1 is a potent telomerase inhibitor.Cell.2001，107：347～359.

4Zhou XZ，Huang P，Shi R.The telomerase inhibitor PinX1 is a major haploinsufficient tumor suppressor essential for chromosome stability in mice.The Journal of clinical investigation.2011，121：1266～1282.

5Qian D，Zhang B，He LR.The telomere/telomerase binding factor PinX1 is a new target to improve the radiotherapyeffectofoesophagealsquamouscellcarcinomas.The Journal of pathology.2013，229：765～774.

6Campbell RM，Tummino PJ.Cancer epigenetics drug discovery and development：the challenge of hitting the mark.The Journal of clinical investigation. 2014，124：64～69.

7Dawson MA，Kouzarides T.Cancer epigenetics：from mechanism to therapy.Cell.2012，150：12～27.

/（編審：劉文斌施仲賦）

Expression and Clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma

1.Anhui No.2 People's Hospital，Hefei 230041，Anhui
2.Tianjin Medical University，Tianjin 300060，China
CHI Tao1，QIAN Dong2，WANG Rui1，et al

Objective:To investigate the expression and clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma （CRC）.Methods:The expression dynamics of PinX1 was detected byimmunohistochemistry（IHC）in one cohort of CRC patients；The prognostic significance of PinX1 in CRC patients was analysis by Kaplan-Meier；Results:the expression of PinX1 in CRC tissues was lower than that in normal non-cancerous tissues.Low expression of PinX1 was an independent predictor for short overall survival（OS）and disease-specific survival（DFS）of CRC patients.Conclusion:our data suggested that PinX1 was a novel prognostic biomarker for CRC patients survival，and it can be used as one analysis judgment of the clinical prognosis of patients with colorectal cancer.

Colorectal Carcinoma；PinX1；clinical prognosis

R735.34【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

1671－8054（2016）01-0030-03

1.安徽省第二人民醫(yī)院普外科合肥230041 2.天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院放射治療科天津300060

許榕生，男，主任醫(yī)師

2015-11-10收稿，2016-01-12修回