劉芳平　鄭素芳　羅慶豐　高　文　饒華民

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HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中表達(dá)的臨床意義

劉芳平鄭素芳羅慶豐高文饒華民

目的分析HELQ 蛋白表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。方法收集71例原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)情況。結(jié)果HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中的陽性表達(dá)率為30.99%，HELQ蛋白陽性表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌患者的腫瘤大小、衛(wèi)星灶、腫瘤Edmonson-steiner分級、血清AFP水平、TNM分期有顯著相關(guān)性，HELQ蛋白陽性表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌患者的性別、年齡、包膜受侵、門靜脈癌栓脈和脈管浸潤無顯著相關(guān)性。結(jié)論HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中表達(dá)水平下降，HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中發(fā)揮抑癌基因的作用。

原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌；HELQ蛋白；抑癌基因

(The Practical Journal of Cancer,2016,31:1222～1224)

我國為原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，HCC，簡稱肝癌)高發(fā)地區(qū)，原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌高侵襲性和高增殖活性是導(dǎo)致原發(fā)性肝細(xì)胞癌導(dǎo)致較高死亡率的原因之一，同時(shí)肝內(nèi)播散及多中心發(fā)生，及其癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程都需借助于其細(xì)胞表面的活性分子相互作用。研究表明HELQ基因可幫助修復(fù)細(xì)胞增殖時(shí)DNA復(fù)制過程中所發(fā)生的所有的DNA損傷,如果這一基因缺失或發(fā)生缺陷，DNA錯(cuò)誤就有可能增加，從而提高了癌癥形成的機(jī)會[1]。本研究通過檢測HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)情況，并分析原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌患者的臨床病理特征和HELQ蛋白表達(dá)的相關(guān)性，探討HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1一般資料

收集江西省腫瘤醫(yī)院收治的原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌患者單純手術(shù)切除的癌組織標(biāo)本71例，年齡32～72歲，平均(45.0±4.5)歲，男性65例，女性6例。所有患者術(shù)前均未接受放射治療、化學(xué)治療及射頻消融治療，術(shù)后腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)病理檢查診斷為原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌。

1.2方法

兔抗人HELQ蛋白多克隆抗體免疫組化試劑盒購自(美國Novus biologicals公司)。對原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的組織石蠟塊進(jìn)行4 μm連續(xù)切片，經(jīng)過二甲苯脫蠟后，過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶，構(gòu)櫞酸鹽緩沖液(PH=6.0)進(jìn)行熱抗原修復(fù)，滴加 HELQ蛋白抗體(滴度為1∶300)于標(biāo)本玻片上，置于濕盒內(nèi)4 ℃冰箱過夜。復(fù)溫至室溫，PBS洗去多余的HELQ蛋白抗體，滴加Maxvision二抗試劑，濕盒內(nèi)室溫孵育1 h；以磷酸鹽緩沖液(PBS)替代抗體為陰性對照。DAB光鏡下監(jiān)控顯色，出現(xiàn)淡黃色顆粒時(shí)終止顯色，蘇木精復(fù)染，封片。顯微鏡下觀察及其分析記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果采用免疫組化半定量法[2]，用染色強(qiáng)度聯(lián)合陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評分：染色強(qiáng)度分為：0分，陰性；1分，弱陽性；2分，中度；3分，強(qiáng)陽性；陽性細(xì)胞百分比分級：陽性細(xì)胞0%，0分；0%～25%，1分；25%～50%，2分；50%～75%，3分；>75%，4分。染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比評分分為4個(gè)等級：0分為陰性，1～3分為+，4～8分為++，9～12分為+++。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用χ2檢驗(yàn)分析HELQ蛋白表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌臨床病理特征之間的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中陽性表達(dá)率為30.99%，HELQ蛋白陽性表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌患者的腫瘤大小、衛(wèi)星灶、腫瘤Edmonson-steiner分級、血清AFP水平、TNM分期具有顯著相關(guān)性(P<0.05)，HELQ蛋白陽性表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌患者的性別、年齡、包膜受侵、門靜脈癌栓脈和脈管浸潤無顯著相關(guān)性(P>0.05)，見表1。

3　討論

我國為原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌高發(fā)地區(qū)，無論是原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生、發(fā)展還是轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的防治均是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)，研究表明原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生發(fā)展過程都需借助于其細(xì)胞核內(nèi)的活性分子之間的一系列相互作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)腫瘤的生長。本究通過檢測原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌腫瘤組織HELQ蛋白表達(dá)和其臨床病理參數(shù)關(guān)系，探索HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌表達(dá)臨床意義，探索HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的診斷和預(yù)測預(yù)后中臨床價(jià)值。

HELQ因子是近年來發(fā)現(xiàn)的1種多功能DNA解螺旋酶，能催化雙鏈DNA沿3-5’方向解螺旋功能酶，在DNA損傷修復(fù)及維護(hù)基因組穩(wěn)定性中起著重要作用,HELQ(又名Hel308)是1種核因子，其基因定位于4q21，蛋白質(zhì)相對分子量為124.5 kDa，由1101個(gè)氨基酸構(gòu)成[3-4]。HELQ因子可幫助修復(fù)細(xì)胞增殖時(shí)DNA復(fù)制過程中所發(fā)生的所有的DNA損傷，維持肝細(xì)胞穩(wěn)定。如果這一基因缺失或發(fā)生缺陷，DNA錯(cuò)誤就有可能增加，從而提高了癌癥形成的機(jī)會[5]。本研究檢測結(jié)果顯示HELQ蛋白的表達(dá)隨著原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌患者的腫瘤增大、衛(wèi)星灶增加和腫瘤Edmonson-steiner分級、血清AFP水平增加而減少，表明HELQ蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌中起著抑癌基因的作用，有研究證實(shí)原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌當(dāng)其腫瘤直徑超過3 cm時(shí)腫瘤的分化程度將會降低，腫瘤的惡性程度和侵襲能力將會升高，同時(shí)研究結(jié)果表明HELQ蛋白表達(dá)的缺失與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的增殖能力的指標(biāo)密切相關(guān)。對于其功能引起原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生機(jī)制的研究目前還處于起步階段，仍需要進(jìn)行更多的實(shí)驗(yàn)以證實(shí)。英國癌癥研究中心倫敦研究所發(fā)現(xiàn)缺失HELQ基因一個(gè)拷貝的小鼠其形成卵巢癌的可能性提高2倍，甚至缺失僅一個(gè)拷貝也足以導(dǎo)致小鼠形成更多的腫瘤,進(jìn)一步研究是否能做為卵巢癌的治療靶點(diǎn)[6]。因此HELQ在腫瘤生長中起著十分重要的作用。同時(shí)研究表明HELQ蛋白的表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的脈管浸潤，門靜脈癌栓無關(guān)，可能與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的轉(zhuǎn)移浸潤的機(jī)制與HELQ基因的調(diào)控途徑不同，需要進(jìn)一步研究。

表1　HELQ蛋白表達(dá)水平與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌臨床病理特征的關(guān)系/例

深入地研究HELQ 基因功能將有助于闡明原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)一步探索HELQ 基因是否與原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的抑癌基因，進(jìn)而為今后更準(zhǔn)確地治療原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌提供新的靶點(diǎn)。

[1]Alabert C,Bukowski-Wills JC,Lee SB,et al.Nascent chromatin capture proteomics determines chromatin dynamics during DNA replication and identifies unknown fork components〔J〕.Nat Cell Biol,2014,16(3):281.

[2]許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國癌癥雜志，1996，6(4)：229.

[3]Adelman CA,Lolo RL,Birkbak NJ,et al.HELQ promotes RAD51 paralogue-dependent repair to avert germ cell loss and tumorigenesis〔J〕.Nature,2013，502(7471):381.

[4]Muzzini DM,Plevani P,Boulton SJ,et al.Caenorhabditis elegans POLQ-1 and HEL-308 function in two distinct DNA interstrand cross-link repair pathways〔J〕.DNA Repair (Amst),2008,7(6):941.

[5]Huehls AM,Wagner JM,Huntoon CJ,et al.Identification of DNA repair pathways that affect the survival of ovarian cancer cells treated with a poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor in a novel drug combination〔J〕.Molec Pharmacol,2012,82(4):767.

[6]Meindl A,Eirich K,Engert S,et al.Germline RAD51C mutations confer susceptibility to ovarian cancer〔J〕.Nature Genet,2012,44(5):475.

(編輯：吳小紅)

Clinical Significance of HELQ Protein in Primary Hepatocellular Carcinoma

LIU Fangping,ZHENG Sufang,LUO Qingfeng,et al.

Wannian Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shangrao,335500

ObjectiveTo investigate the correlation of HELQ protein expression and clinicopathological features and prognosis of primary hepatocellular carcinoma(HCC).MethodsImmunohistochemistry staining was used to detect HELQ protein expression in 71 cases of primary hepatocellular carcinoma.ResultsThe positive expression rate of the MORC2 protein was 30.99% in the 71 primary hepatocellular carcinoma cases,there had significant relation between the positive rate of the HELQ protein and size,satellite focal,Edmonson-steiner grade,AFP of blood,and TNM stage of the primary hepatocellular carcinoma (P<0.05).There had no significant relation between the positive rate of the HELQ protein and age,sex,tumor capsule invasion,invasion of portal vein(PV)and vessel of the primary hepatocellular carcinoma.ConclusionHELQ protein expression decreases in the primary hepatocellular carcinoma,and it is a tumor suppressor gene of the primary hepatocellular carcinoma .

Primary hepatoceIlular carcinoma；HELQ protein；Tumor suppressor gene

江西省衛(wèi)生廳基金項(xiàng)目(編號：20164068)

335500 江西萬年縣中醫(yī)院(劉芳平,鄭素芳)；330029 江西省腫瘤醫(yī)院(羅慶豐,高文,饒華民)

鄭素芳

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.08.002

R735.7

A

1001-5930(2016)08-1222-03

2016-03-08

2016-03-21)