劉明華，黃群蓮，劉中飛，稅丕先

（1西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室；四川瀘州646000，2西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科）

趕黃草對(duì)雄性大鼠正常性功能的影響*

劉明華1，黃群蓮2，劉中飛1，稅丕先1

（1西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室；四川瀘州646000，2西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科）

目的：研究趕黃草（Penthorum Chinense Pursh）對(duì)雄性大鼠正常性功能的影響。方法：將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陽性對(duì)照萬艾可（枸櫞酸西地那非片，15 mg/kg）組和趕黃草三個(gè)劑量組（0.5g生藥/kg、1.0 g生藥/kg、2.0 g生藥/kg），連續(xù)灌胃28 d，測(cè)定趕黃草對(duì)大鼠交配能力、性器官重量、陰莖勃起功能、正常雄性大鼠精子的影響。結(jié)果：趕黃草各劑量組對(duì)大鼠交配能力、性器官指數(shù)、陰莖勃起功能、精子存活率等無明顯影響，與空白對(duì)照組比較，差異無顯著性（P＞0．05）。結(jié)論：趕黃草對(duì)雄性大鼠正常性功能無明顯影響，作為新食品原料應(yīng)用是安全的。

趕黃草；性功能；交配能力

趕黃草（Penthorum Chinense Pursh）學(xué)名扯根菜，又名水楊柳、水澤蘭，為虎耳草科（saxifraganceae）扯根菜屬扯根菜的地上部分，是四川瀘州古藺出產(chǎn)的一種苗家藥材。始載于明代《救荒本草》，現(xiàn)載于《中藥大辭典》、《全國(guó)中草藥匯編》、《四川中藥志》、《湖南藥物志》、《內(nèi)蒙古植物藥志》等。民間以全草入藥，性溫，味甘，無毒，具有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、退黃、平肝的功效，可治經(jīng)閉、水腫、血崩、帶下、跌打損傷[3-4]?，F(xiàn)代研究表明[3，4]趕黃草內(nèi)含多種有效成份均對(duì)肝損傷具保護(hù)作用，并對(duì)甲肝、乙肝、慢性活動(dòng)性肝炎具有一定的治療作用，但民間流傳趕黃草有減弱男性性功能的副作用。本研究探討趕黃草對(duì)雄性大鼠正常性功能的影響，為趕黃草在新食品原料的開發(fā)應(yīng)用，以及民間流傳的科學(xué)與否提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 受試品

趕黃草，采自四川瀘州古藺縣，經(jīng)西南醫(yī)科大學(xué)生藥教研室稅丕先教授鑒定。按《中國(guó)藥典》2010版有關(guān)最細(xì)粉的規(guī)范要求將趕黃草粉碎為125 μm＜粒徑＜150 μm的中藥最細(xì)粉。實(shí)驗(yàn)時(shí)稱取1 kg趕黃草粉，加蒸餾水10 L，加熱至80～90℃，浸泡提取30～60 min，過濾，收集浸泡提取液，殘?jiān)诱麴s水10L，加熱至80～90℃浸泡提取30～60 min，過濾，合并浸泡提取液，將浸泡提取液在60～70℃減壓濃縮至0.5 L即可。水提濃縮液的濃度為2.0 g（趕黃草粉）/mL。

1.2 樣品的配制

趕黃草在臨床上用法用量為口服，一次2 g，每日三次，若按成人60 kg計(jì)算，其臨床日用量為0.1 g生藥/kg。本實(shí)驗(yàn)受試品趕黃草低、中、高劑量分別設(shè)置為臨床日用量的5、10、20倍，即0.5g生藥/kg、1.0 g生藥/kg、2.0 g生藥/kg。大鼠灌胃體積設(shè)為0.5 mL/ 100g體重，則配制方法如下：

低劑量組：取水提濃縮液[2.0 g（趕黃草粉）/ mL]100 mL，加入1 900 mL雙蒸水，濃度為0.1g（趕黃草粉）/mL，按0.5 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為0.5 g生藥/kg，為臨床日用量的5倍；

中劑量組：取水提濃縮液[2.0 g（趕黃草粉）/ mL]100 mL，加入900 mL雙蒸水，濃度為0.2 g（趕黃草粉）/mL，按0.5 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為1.0 g生藥/kg，為臨床日用量的10倍；

高劑量組：取水提濃縮液[2.0 g（趕黃草粉）/ mL]100 mL，加入400 mL雙蒸水，濃度為0.4 g（趕黃草粉）/mL，按0.5 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為2.0 g生藥/kg，為臨床日用量的20倍；

萬艾可（枸櫞酸西地那非片）為陽性對(duì)照，100 mg/片，美國(guó)輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20140708。臨用時(shí)將其壓成粉末并用生理鹽水配成濃度為1.5 mg/mL的溶液。按1 mL/100g體重灌胃，則灌胃劑量為15 mg/kg。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，體重（180±20）g，雌雄各半，購(gòu)自西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2013-17，使用許可證號(hào)：SCXK（川）2013-065。

1.4 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

實(shí)驗(yàn)在西南醫(yī)科大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行，動(dòng)物為籠養(yǎng)（籠具容積為20 cm×39 cm×54 cm），每籠飼養(yǎng)同性別動(dòng)物5只。基礎(chǔ)飼料為實(shí)驗(yàn)鼠全價(jià)顆粒飼料，各組動(dòng)物常規(guī)喂飼，自由飲水。籠底墊料為刨花木屑，使用前經(jīng)消毒烘干；籠具經(jīng)消毒后使用。平均每隔2日更換一次墊料。溫度：空調(diào)恒溫，約22～25℃。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)正常雄性大鼠交配能力的影響

SD大鼠30只，雄性，體重（180±20）g，按體質(zhì)量序隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組（生理鹽水）、陽性對(duì)照組（萬艾可15 mg/kg）及趕黃草低、中、高3個(gè)劑量組（0.5 g生藥/kg、1.0 g生藥/kg、2.0 g生藥/kg）。每日灌胃1次，連續(xù)給藥28 d。

2.1.1 雌性大鼠的準(zhǔn)備

取30只雌性大鼠，體質(zhì)量（180±20）g，腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液，0.14 mL／100 g麻醉，行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，術(shù)后連續(xù)3 d肌肉注射青霉素2萬U／kg，術(shù)后2周分組實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前48 h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4 h皮下注射黃體酮500 ug/只。

2.1.2 交配實(shí)驗(yàn)觀察方法

將雄性大鼠單獨(dú)放人籠中使其適應(yīng)環(huán)境5 min，然后放人1只雌鼠，開始記錄下列數(shù)據(jù)：①自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時(shí)間（捕捉潛伏期）；②20 min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背的動(dòng)作次數(shù)（捕捉次數(shù)）；③雄鼠自爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的時(shí)間（射精潛伏期）；④20 min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的次數(shù)（射精次數(shù)）。

2.1.3 對(duì)性器官重量的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用T-100型電子天平（感量0.1 g）稱取小鼠體重（g），處死動(dòng)物，剖腹取睪丸和附睪，去盡筋膜，濾紙吸干臟器表面血污，用賽多利斯BS200S-WE1型電子天平（感量0.001 g）稱睪丸和附睪重量（mg），計(jì)睪丸（附睪）指數(shù)。

脾（胸腺）指數(shù)=脾（胸腺）重量（mg）／體重（g）

2.2 對(duì)大鼠陰莖勃起功能的影響

灌胃第28 d，末次灌胃后1 h，將4 mA電流強(qiáng)度刺激大鼠陰莖頭部。記錄刺激開始至陰莖勃起時(shí)間（勃起潛伏期）和陰莖勃起持續(xù)時(shí)間。

2.3 對(duì)正常雄性大鼠精子的影響

灌胃第28 d，取大鼠左側(cè)附睪，在附睪尾縱向劃一個(gè)小口，置于3 mL RPMI-1640培養(yǎng)基（含10%左右的動(dòng)物血清）內(nèi)孵育15 min，制備精子懸液。取少量精子懸液用培養(yǎng)基稀釋50倍，加到血球計(jì)數(shù)板上，在27℃～30℃條件下用高倍鏡隨機(jī)觀察200個(gè)精子的活動(dòng)狀態(tài)（活動(dòng)的精子：活動(dòng)良好、呈直線或曲線游動(dòng)；不活動(dòng)的精子：活動(dòng)遲緩，原地打轉(zhuǎn)或不活動(dòng)），并統(tǒng)計(jì)精子存活率（活動(dòng)的精子數(shù)×100%／200）。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料均采用（x± s）表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般情況

試驗(yàn)周期內(nèi)，空白對(duì)照組動(dòng)物行為活動(dòng)如常，一般情況良好。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物灌胃趕黃草后，一般情況良好，除個(gè)別時(shí)間點(diǎn)某個(gè)動(dòng)物體重、食量有所減少之外，在灌胃后大鼠活動(dòng)無明顯異常改變。與空白對(duì)照組比較，趕黃草低、中、高劑量組和陽性對(duì)照組雄性大鼠灌胃給藥前后體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 大鼠體重的變化（x±s）

3.2 對(duì)正常雄性大鼠交配能力的影響

陽性對(duì)照組雄性大鼠捕捉潛伏期明顯縮短，射精潛伏期明顯延長(zhǎng)，捕捉次數(shù)和射精次數(shù)明顯增加，與空白對(duì)照比較，P＜0.05，提示萬艾可能提高雄性大鼠的交配能力。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物灌胃趕黃草后，交配能力正常，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 對(duì)大鼠交配能力的影響（x±s）

3.3 對(duì)雄性大鼠性器官的影響

陽性對(duì)照組和趕黃草低、中、高劑量組睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)正常，與空白對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 對(duì)性器官重量的影響（x±s）

3.4 對(duì)大鼠陰莖勃起功能的影響

將4 mA電流強(qiáng)度刺激大鼠陰莖頭部，陽性對(duì)照組陰莖勃起潛伏期縮短，勃起時(shí)間延長(zhǎng)，與空白對(duì)照比較，P＜0.05，提示萬艾可能增強(qiáng)大鼠的勃起功能。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物灌胃趕黃草后，陰莖勃起功能正常，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

3.5 對(duì)正常雄性大鼠精子的影響

陽性對(duì)照組和趕黃草低、中、高劑量組大鼠精子存活率正常，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表5。

表5 各組大鼠的精子存活率（x±s）

4 討論

性功能指動(dòng)物性活動(dòng)的能力，是衡量雄性動(dòng)物生殖機(jī)能強(qiáng)弱的主要指標(biāo)[5-6]。雄性性活動(dòng)包括求偶反射、陰莖勃起、爬跨、插入、射精等幾個(gè)環(huán)節(jié)，其中陰莖勃起是產(chǎn)生正常性活動(dòng)的基礎(chǔ)。陰莖勃起過程表現(xiàn)為在性刺激引導(dǎo)下，海綿體內(nèi)小動(dòng)脈和海綿竇壁內(nèi)的平滑肌松弛，流人海綿體的血流增加，海綿體內(nèi)壓升高，壓迫白膜下靜脈叢和穿支靜脈后使海綿體流出靜脈血減少，勃起發(fā)生。在此過程中，普遍認(rèn)為非膽堿能、非腎上腺素能神經(jīng)末梢的激活和釋放NO增加促進(jìn)小動(dòng)脈和海綿體平滑肌舒張是導(dǎo)致陰莖勃起的主要機(jī)制[7]。

雄性性活動(dòng)受多種因素的影響，如神經(jīng)機(jī)制、體液因素、情緒、年齡、疾病等，機(jī)理又十分復(fù)雜。因此，要評(píng)判性能力，僅僅依靠某一個(gè)指標(biāo)很難作出準(zhǔn)確判斷[8-9]。雄性大鼠性行為的發(fā)生依賴于雌性大鼠的性誘感，也即雌性大鼠的發(fā)情狀態(tài)直接影響雄鼠的性行為，因而我們選擇了交配能力這一主要指標(biāo)來觀察大鼠性能力的影響。但由于雌鼠對(duì)雌、孕激素的敏感性，雄鼠對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)性、對(duì)新的性伴侶的容納性，是否也存在類似心理因素等問題，使得這一指標(biāo)也難以準(zhǔn)確地反映其性能力。因而我們同時(shí)選擇了捕捉次數(shù)、射精次數(shù)、勃起潛伏期和射精潛伏期等觀察指標(biāo)[10]。勃起潛伏期和射精潛伏期可以反映雄鼠對(duì)陰莖刺激的性反應(yīng)速度和性活動(dòng)能力狀況，也即性興奮的程度和性興奮持續(xù)的時(shí)間。將這三組指標(biāo)結(jié)合起來觀察，基本上可以較為準(zhǔn)確地判斷雄鼠的性能力狀況。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)陽性對(duì)照萬艾可明顯縮短雄性大鼠捕捉潛伏期，延長(zhǎng)射精潛伏期，增加捕捉次數(shù)和射精次數(shù)，與空白對(duì)照比較，P＜0.05，提示萬艾可能提高雄性大鼠的交配能力，說明本研究方法可靠。但趕黃草連續(xù)灌胃28 d，三個(gè)劑量組分別相當(dāng)于臨床應(yīng)用量（0.1 g生藥/kg）的5倍、10倍和20倍，動(dòng)物行為活動(dòng)如常，一般情況良好。實(shí)驗(yàn)各組動(dòng)物交配能力、性器官指數(shù)、陰莖勃起功能、精子存活率等無明顯促進(jìn)或抑制作用，與空白對(duì)照組比較未見明顯差異（P＞0.05）。因此，趕黃草對(duì)雄性大鼠正常性功能無明顯影響，作為新食品原料，應(yīng)用是安全的。

1.郭艷，曾凡駿，劉敏，等．趕黃草有效成分及生物活性研究進(jìn)展[J].職業(yè)衛(wèi)生與病傷，2016，31（1）：41-43.

2.付明，魏麟、余娟，等．扯根菜的化學(xué)成分研究[J]．中國(guó)藥學(xué)雜志，2013，48（22）:1911-1914.

3.石曉，卓菊．趕黃草總黃酮抗大鼠酒精性肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]．中藥材，2015，38（7）：1485-1487.

4.Ikura Y,Caldwell SH.Lipid droplet-associated proteins in alcoholic liver disease:a potential linkage with hepatocellular damage[J].International Journal of CLin-icaland Experimental Pathology,2015;8（8）:8699-8708.

5.楊建成，吳高峰，馮穎，等．?；撬釋?duì)不同齡雄性大鼠性功能的影響[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志,2008，151（5）：285-287.

6.邵祥龍，羅瓊，秦芹，等．山茱萸多糖對(duì)雄性大鼠性功能損傷的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（6）：772-77

7.王濟(jì)，白明華，劉保興，等．疏肝益陽膠囊對(duì)動(dòng)脈性勃起功能障礙大鼠性功能及性腺質(zhì)量的作用[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，32（2）：54-56.

8.Goswami Sk,Gangadarappa Sk,Vishwanath M,et al. Antioxidant potential and abiLity of phloroglucinol to decrease formation of advanced glycation end products increase efficacy of siLdenafiL in diabetes-induced sexual dysfunction of rats.[J].Sex Med,2016 Jan 28.pii:S2050-1161（15）00003-3.[Epub ahead of print]

9.劉建榮，周安方．興靈湯對(duì)正常雄性大鼠性能力的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2006，12（3）：54-55.

10.范源，劉竹煥，陳少紅，等．生力膠囊對(duì)大鼠性功能的影響[J].中華男科學(xué)雜志,2007，13（7）：660-663.

（2016-05-24收稿）

Effect of Penthorum Chinense Pursh on sexual function of male rats

Liu Minghua1，Huang Qunliang2，Liu Zhongfei1，Shui Pixian1*1Department of Pharmacognosy School of Pharmacy,Departmenf of Pharmacy the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou,Sichuan Province,646000,China

Objective：To study the effect of pursh on sexual function of male rats.Methods：The rats were randomly divided into no treatment control group,Viagra（sildenafil citrate tablets,15 mg/Kg）positive control group,and three dosage groups of pursh of（0.5 g crude drug/Kg,1 g crude drug/Kg,and 2 g crude drug/Kg）. All treatment had lasted for a consecutive 28 days,and the mating ability,the weight of sexual organs,penile erectile function and the quality of sperms were compared among groups.Results：Each dosage group of pursh had no significant effect on the mating ability,organ index,penile erectile function,and sperm survival rate compared to the control group（P＞0.05）.Conclusion：Pursh has no obvious effect on the sexual function in male rats and therefore is safe for long-term use.

Penthorum Chinense Pursh;Sexual function;Mating ability

R285.5

A

10.3969/j.issn.1000-2669.2016.06.014

*四川省科技廳資助項(xiàng)目（2014ZC0052，2014JC0147），瀘州市科技局（2013LZLY-K66）

劉明華（1972-），男，教授

通迅作者：稅丕先（1967-），男，教授，碩導(dǎo)，E-mail:spx06702@163.com