陳怡娟,郭　渝,王婉蝶,黃靖軒

(成都雙楠醫(yī)院檢驗(yàn)科　610041)

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快速制作LIAISON化學(xué)發(fā)光孕酮測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法

陳怡娟,郭渝,王婉蝶,黃靖軒

(成都雙楠醫(yī)院檢驗(yàn)科610041)

目的通過每日定標(biāo)快速手工制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，使孕酮測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性得到保證。方法根據(jù)LIAISON化學(xué)發(fā)光計(jì)算原理和孕酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線，借用Excel軟件的對(duì)數(shù)回歸方程快速計(jì)算孕酮實(shí)際的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)該試驗(yàn)進(jìn)行校準(zhǔn)。結(jié)果通過該方法計(jì)算得出的濃度值符合臨床診斷。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，得到臨床科室的認(rèn)可，值得在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。

孕酮；標(biāo)準(zhǔn)曲線；化學(xué)發(fā)光；數(shù)學(xué)模型

意大利LIAISON全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀測(cè)定孕酮的方法為競(jìng)爭(zhēng)法，標(biāo)準(zhǔn)品為外定標(biāo)，按試劑說明書要求每盒100人份試劑均需要外定標(biāo)。在實(shí)際操作過程中，雖然嚴(yán)格按照試劑說明書的要求外定標(biāo)與廠家設(shè)定的主反應(yīng)曲線比對(duì)后定標(biāo)通過，但隨試劑開封后時(shí)間延長(zhǎng)實(shí)際測(cè)得的孕酮值不穩(wěn)定，與臨床診斷有偏差。為此，作者根據(jù)LIAISON全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀的使用說明書和孕酮試劑說明書利用Excel軟件，每次測(cè)定均進(jìn)行外部定標(biāo)并繪制測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線，極大提高了該實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。現(xiàn)將此方法的詳細(xì)過程介紹如下：

1　材料與方法

1.1儀器與試劑意大利LIAISON化學(xué)發(fā)光分析儀、孕酮試劑盒、孕酮外部定標(biāo)品(2 ng/mL，20 ng/mL)。

1.2方法

1.2.1按照LIAISON使用說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作，即沖洗管路和進(jìn)行光路檢測(cè)。要求光路檢測(cè)后的值符合要求才能進(jìn)行試驗(yàn)。即：空白孔相對(duì)光單位在120～320，變異系數(shù)在8%以內(nèi)；左右針的相對(duì)光單位在20 000～180 000，變異系數(shù)在2.5%以內(nèi)，且左右針的相對(duì)光單位差值在8 000之內(nèi)。

1.2.2將定標(biāo)品復(fù)溫編號(hào)為8000(2 ng/mL定標(biāo)品)、8001(20 ng/mL定標(biāo)品)，放置在“A”標(biāo)本架上并放入儀器樣品倉(cāng)中進(jìn)行檢測(cè)，8000號(hào)相對(duì)光單位：136538，8001號(hào)相對(duì)光單位：44381。

1.2.3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.3.1輸入試驗(yàn)數(shù)據(jù)啟動(dòng)Excel電子表格，建立一個(gè)名為“孕酮”的文件，將工作表重命名為當(dāng)天日期。用表2的試驗(yàn)結(jié)果，在A1：D1單元格分別輸入編號(hào)、濃度、RLU、待測(cè)血清濃度。A2：C2單元格輸入8000號(hào)的編號(hào)、濃度、RLU，A3：C3單元格輸入8001號(hào)的編號(hào)、濃度、RLU。

1.2.3.2繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線用鼠標(biāo)點(diǎn)擊Excel電子表格軟件“插入”菜單→圖表→標(biāo)準(zhǔn)類型→XY散點(diǎn)圖→散點(diǎn)圖，在圖形方框中點(diǎn)右鍵“選擇數(shù)據(jù)”→添加→“X軸系列值”選擇C2：C3單元格的數(shù)據(jù)→“Y軸系列值”選擇B2：B3單元格的數(shù)據(jù)→確定。根據(jù)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，計(jì)算回歸方程，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線：先點(diǎn)擊圖上標(biāo)準(zhǔn)值點(diǎn)，然后按右鍵，點(diǎn)擊“添加趨勢(shì)線”。添加對(duì)數(shù)回歸方程，點(diǎn)擊趨勢(shì)線(即標(biāo)準(zhǔn)曲線)，然后按右鍵，選“趨勢(shì)線格式”，在彈出的對(duì)話框中，選擇“選項(xiàng)”，在“顯示公式”和“顯示R平方值”前打勾，再點(diǎn)“確定”，回歸方程式和相關(guān)系數(shù)即在標(biāo)準(zhǔn)曲線上顯示出來。

2　結(jié)　　果

2.1孕酮檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線通過上述步驟，計(jì)算機(jī)已繪制出“孕酮測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線”，見圖1。從圖中的回歸方程式可以看出，r2=1，說明趨勢(shì)線可靠，可作為標(biāo)準(zhǔn)曲線用于其他未知濃度的測(cè)定。

圖1　　孕酮檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2待測(cè)血清的濃度檢測(cè)在D4單元格輸入通過回歸方程式所得的函數(shù)“=-16.0*ln(C4) + 191.3”，選中D4單元格在D列向下拖動(dòng)，擴(kuò)展序列。在A列和C列分別鍵入待測(cè)血清的序列號(hào)和RLU值，即可得到待測(cè)血清的濃度，再將D列設(shè)置成“數(shù)值”、小數(shù)點(diǎn)后保留一位，見圖2。

圖2　　待測(cè)血清濃度的計(jì)算

3　討　　論

血清孕酮在先兆流產(chǎn)的診斷、預(yù)后預(yù)測(cè)及治療效果評(píng)定中有著重要的地位，是臨床常用指標(biāo)[1-2]。妊娠早期血清孕酮主要來源于妊娠黃體的分泌，妊娠8～10 周后胎盤取代卵巢黃體成為血清孕酮的主要分泌來源，且各孕齡的孕酮水平基本保持平穩(wěn)[3-4]。一定水平的孕酮對(duì)妊娠的維持有重要作用，孕酮水平不足是導(dǎo)致先兆流產(chǎn)或難免流產(chǎn)的重要原因。因此，保證孕酮濃度測(cè)定的準(zhǔn)確性是非常重要的。

意大利LIAISON化學(xué)分析儀采用化學(xué)發(fā)光方法來測(cè)定孕酮，隨化學(xué)發(fā)光試劑開封后時(shí)間的延長(zhǎng)及環(huán)境變化等因素影響對(duì)測(cè)定的結(jié)果誤差較大。使用本文所述的方法，通過每批次定標(biāo)，計(jì)算對(duì)數(shù)回歸方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，避免了環(huán)境因素造成的儀器檢測(cè)過程中的誤差，與說明書要求的每盒試劑定標(biāo)一次相比，提高了孕酮檢測(cè)的準(zhǔn)確性，得到臨床科室的認(rèn)可。該方法簡(jiǎn)便、快速、可靠，值得在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。

[1]朱英哲，徐澤媚，楊曉葵.妊娠早期婦女血清性激素水平及與先兆流產(chǎn)的關(guān)系[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15(10)：1677-1679.

[2]Kirby JM，Cho KJ，Midia M.Image-guided Intervention in management of complications of portal hypertension：more than TIPS for success[J].Radiographics，2013，33(5)：1473-1496.

[3]楊亞濱，張艷梅，索磊.血清孕酮、HCG 聯(lián)合檢測(cè)在早期先兆流產(chǎn)中的臨床意義[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2013，21(1)：52，76.

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.061

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1673-4130(2016)16-2344-02

2016-03-18

2016-06-09)