周格琛，韋美德，賀望嬌，韋鴻健，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院/柳州市工人醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西柳州 545005)

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·經(jīng)驗(yàn)交流·

Sysmex XE-5000血液分析儀檢測(cè)血小板的應(yīng)用探討

周格琛，韋美德，賀望嬌，韋鴻健，梁委軍

(廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院/柳州市工人醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西柳州 545005)

目的探討Sysmex XE-5000全自動(dòng)血液分析儀(AHA)檢測(cè)血小板的準(zhǔn)確性以及假性異常的原因和糾正措施。方法用Sysmex XE-5000 AHA以常規(guī)方法(電阻抗法即PLT-1模式)對(duì)患者血小板進(jìn)行檢測(cè)，隨機(jī)選擇血小板直方圖及紅細(xì)胞(RBC)直方圖均正常的50例標(biāo)本作為試驗(yàn)組1，另外選擇血小板直方圖異?；?和)RBC直方圖異常的50例標(biāo)本作為試驗(yàn)組2，然后對(duì)試驗(yàn)組2的各標(biāo)本逐一在Sysmex XE-5000 AHA上以熒光染色激光散色法(光學(xué)法即PLT-O模式)檢測(cè)血小板作為試驗(yàn)組3，儀器檢測(cè)的3個(gè)組數(shù)據(jù)分別與手工法進(jìn)行比較。結(jié)果在試驗(yàn)組1中，儀器的檢測(cè)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而試驗(yàn)組2儀器的檢測(cè)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，試驗(yàn)組3儀器的檢測(cè)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論Sysmex XE-5000 AHA檢測(cè)血小板的結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，但需要熟練掌握其影響因素和儀器的性能及檢測(cè)原理，才能為臨床提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)報(bào)告。

血液分析儀；血小板計(jì)數(shù)；電阻抗法；光學(xué)法

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，各大中小型醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室血小板計(jì)數(shù)(PLT)大多使用血液分析儀自動(dòng)檢測(cè)，工作效率得以大幅度提高并減輕了勞動(dòng)強(qiáng)度，然而其影響因素不容忽視。本文探討了Sysmex XE-5000 AHA檢測(cè)血小板的準(zhǔn)確性以及假性異常的影響因素和糾正措施，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來源選擇2015年11月6日根據(jù)醫(yī)囑需做血細(xì)胞分析計(jì)數(shù)的住院患者296例，在凌晨6：00～7:00由病區(qū)護(hù)士抽取其靜脈血2 mL于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)真空抗凝管中，輕輕混勻，在室溫狀態(tài)下4 h內(nèi)完成所有檢測(cè)。

1.2儀器與試劑Sysmex XE-5000 AHA及其原裝進(jìn)口配套試劑；1%草酸銨血小板稀釋液(草酸銨1 g、EDTA-Na20.012 g、4%甲醛溶液0.1 mL，蒸餾水加至100 mL。配成后多次過濾，空白計(jì)數(shù)為“0”，4 ℃冰箱保存)。

1.3方法以Sysmex XE-5000 AHA對(duì)患者標(biāo)本進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)及五分類檢測(cè)。分析前，用Sysmex公司提供的原裝高、低2種e-CHECK質(zhì)控液做室內(nèi)質(zhì)控，確認(rèn)儀器和試劑處于正常狀態(tài)，嚴(yán)格按照儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)進(jìn)行常規(guī)標(biāo)本檢測(cè)。隨機(jī)選擇血小板直方圖及紅細(xì)胞(RBC)直方圖均正常的50例標(biāo)本作為試驗(yàn)組1，另外選擇血小板直方圖異常或(和)RBC直方圖異常的50例標(biāo)本作為試驗(yàn)組2，然后對(duì)試驗(yàn)組2的各標(biāo)本逐一在Sysmex XE-5000 AHA上應(yīng)用PLT-O模式檢測(cè)血小板作為試驗(yàn)組3。記錄3個(gè)試驗(yàn)組的血小板數(shù)值。同時(shí)讓兩名技術(shù)熟練的主管技師對(duì)以上2組標(biāo)本采用雙盲法進(jìn)行血小板手工計(jì)數(shù)：按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)，以微量吸管準(zhǔn)確吸取經(jīng)混勻的全血20 μL于0.38 mL草酸銨血小板稀釋液中，輕輕混勻，10 min后再次輕輕混勻混懸液，充入計(jì)數(shù)池，靜置15～20 min，在光學(xué)顯微鏡高倍鏡下精確計(jì)數(shù)中間大方格中5個(gè)中方格里的血小板，對(duì)于壓邊線的血小板，采取數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則，按公式(PLT/L=5個(gè)中方格里的PLT×5×10×20×106)計(jì)算出各標(biāo)本的血小板數(shù)，取兩名主管技師的均值作為血小板手工計(jì)值并與儀器的檢測(cè)結(jié)果作比較。

2　結(jié)　　果

各組測(cè)定的血小板結(jié)果見表1。在試驗(yàn)組1中，儀器的檢測(cè)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而試驗(yàn)組2儀器的檢測(cè)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，試驗(yàn)組3儀器的檢測(cè)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1　　3個(gè)試驗(yàn)組儀器測(cè)定的血小板數(shù)值與手工計(jì)數(shù)的比較

3　討　　論

Sysmex XE-5000 AHA有2種血小板檢測(cè)模式，即PLT-I和PLT-O。PLT-I模式的檢測(cè)原理是被稀釋的血細(xì)胞均勻混懸液在恒定負(fù)壓的作用下，以顆粒經(jīng)過RBC/PLT小孔時(shí)電阻抗脈沖信號(hào)的變化為基礎(chǔ)對(duì)血小板進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積測(cè)定，其缺點(diǎn)是不能完全排除體積和光學(xué)特征與血小板相似的非血小板顆粒干擾。試驗(yàn)組1證實(shí)在正常情況下其檢測(cè)結(jié)果是可靠的，然而試驗(yàn)組2提示其尚不能完全排除小RBC和(或)RBC碎片等的干擾，血液中RBC數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于血小板，即使有少部分RBC或RBC碎片被儀器誤計(jì)數(shù)入血小板范圍內(nèi)，也會(huì)給檢測(cè)結(jié)果造成較大的影響，導(dǎo)致PLT假性增多。從試驗(yàn)組3可以看出在血小板或(和)RBC直方圖異常的情況下，儀器通過PLT-O模式測(cè)定血小板的結(jié)果與手工計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，即在此模式下儀器的檢測(cè)結(jié)果依然是可靠的，這是由于PLT-O模式設(shè)置有專用的RET/PLT-O石英毛細(xì)管通道，并以Plymethine和Oxazine對(duì)血小板進(jìn)行核酸熒光染色，應(yīng)用半導(dǎo)體激光與流式細(xì)胞技術(shù)，對(duì)各血小板逐一從高低角度進(jìn)行二維激光掃描，即以低角度散射光(前向散射光)檢測(cè)顆粒的數(shù)量和體積，高角度散射光(側(cè)向散射光)的不同波長(zhǎng)熒光散射強(qiáng)度反映被檢顆粒的RNA信息，最后綜合分析來自各散射光的信息，排除非血小板顆粒的干擾，從而準(zhǔn)確檢測(cè)到血小板的數(shù)量及其各項(xiàng)參數(shù)[1]。因此建議發(fā)現(xiàn)血小板結(jié)果有異?；蚱渲狈綀D和(或)RBC直方圖異常時(shí)，用PLT-O模式復(fù)查，讓結(jié)果更加真實(shí)、可靠。

Sysmex XE-5000AHA以PLT-O模式檢測(cè)血小板的準(zhǔn)確性是相對(duì)的，在實(shí)際工作中，遇到首次PLT結(jié)果減低或者驟然下降的病例應(yīng)注意觀察標(biāo)本是否有凝塊，詢問臨床護(hù)士抽血是否有不順利，若回答是否定的，則需涂片染色鏡檢以排除血小板聚集或血小板衛(wèi)星現(xiàn)象，避免PLT假性減少而導(dǎo)致臨床誤診誤治[2]。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象是指血小板黏附并圍繞于中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞或淋巴細(xì)胞表面的現(xiàn)象。該現(xiàn)象偶爾見于EDTA抗凝血中，產(chǎn)生的原因可能是EDTA與免疫球蛋白相互作用并且非特異性地結(jié)合于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，這種血小板結(jié)合的自身抗體Fc端能夠與中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或單核細(xì)胞膜上的Fc受體相結(jié)合[3]。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象是全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)血小板假性減少的原因之一，而血小板大量聚集又是另外一個(gè)重要的影響因素，主要見于EDTA依賴性假性血小板減少(EDTA-PTCP)，文獻(xiàn)報(bào)道其發(fā)生率不到0.2‰，然而在住院患者中的發(fā)病率可高達(dá)0.8‰左右，平均為0.5‰[4]，EDTA-PTCP產(chǎn)生的原因可能與血小板表面存在的某些隱匿性抗原有關(guān)。EDTA是血常規(guī)最好的抗凝劑，但在特定環(huán)境下會(huì)導(dǎo)致血小板活化，使其形態(tài)由正常的圓盤形轉(zhuǎn)變?yōu)榍蛐?，從而改變了血小板膜表面上的某些隱匿性抗原的結(jié)構(gòu)，與存在于血漿中的自身抗體相結(jié)合，激活花生四烯酸(AA)、磷脂酶C(PLC)、磷脂酶A2(PLA2)、5-羥色胺(5-HT)和二磷酸腺苷(ADP)等活性物質(zhì)，進(jìn)而活化血小板纖維蛋白受體(FIB-R)，促進(jìn)血小板與纖維蛋白原相互聚集成團(tuán)而無法隨鞘液逐一通過RET/PLT-O石英毛細(xì)管通道，導(dǎo)致儀器檢測(cè)結(jié)果遠(yuǎn)低于實(shí)際數(shù)值[5]。對(duì)于血小板衛(wèi)星現(xiàn)象或EDTA-PTCP的標(biāo)本該如何處理有待進(jìn)一步探討。有文獻(xiàn)報(bào)道，在EDTA抗凝血中加入一定量的氟化鈉或者丁胺卡那霉素1 h內(nèi)可有效抑制血小板的聚集或解離已聚集的血小板,1 h后其解離效果較差[6]。筆者認(rèn)為也可以采集末梢血以草酸銨法手工計(jì)數(shù)血小板或嘗試改用枸櫞酸鹽抗凝血上機(jī)檢測(cè)，目的在于為臨床檢驗(yàn)工作者遇到EDTA-PTCP時(shí)提供方便、有效的解決方案。

全自動(dòng)血液分析儀的應(yīng)用給繁重的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作帶來了巨大的便利，但在儀器使用前應(yīng)對(duì)其進(jìn)行校準(zhǔn)和性能驗(yàn)證，工作人員經(jīng)培訓(xùn)后考試合格方能上崗，在日常工作中嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作，定期對(duì)設(shè)備進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，熟練掌握血液學(xué)檢驗(yàn)的相關(guān)理論知識(shí)，了解儀器的性能和檢測(cè)原理并制訂出行之有效的復(fù)檢規(guī)則，才能為臨床提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)報(bào)告。

[1]李勇，慕悅意，夏永輝，等．SysmexXE-5000血液分析儀對(duì)血液疾病血小板檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值[J]．中國(guó)血液流變學(xué)雜志，2011，21(2)：329-332,369．

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.058

B

1673-4130(2016)16-2340-02

2016-03-28

2016-05-28)