秦雪君，安敏芝，李揚(yáng)宇，毛起官，林青福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州　350009

Beckman Coulter Access DXI800與Cobas e411兩種化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)血清總β-HCG結(jié)果的比對(duì)分析

秦雪君，安敏芝，李揚(yáng)宇，毛起官，林青
福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建福州350009

目的 通過(guò)比較同一實(shí)驗(yàn)室2臺(tái)不同化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)系統(tǒng)（貝克曼DXI800直接化學(xué)發(fā)光、Cobas e411電化學(xué)發(fā)光）測(cè)定血清總β-HCG的結(jié)果，探討2種方法檢測(cè)β-HCG的是否具有可比性，為不同儀器測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)提供依據(jù)。方法Beckman Coulter Access DXI800使用美國(guó)伯樂(lè)公司提供的質(zhì)控品Biorad低值、中值，Cobas e411采用羅氏原裝質(zhì)控品低值、中值分別對(duì)兩臺(tái)儀器進(jìn)行日常室內(nèi)質(zhì)控，保證結(jié)果均在控。在此基礎(chǔ)上，選取不同濃度常規(guī)血清標(biāo)本40份先在Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，再用Cobas e411電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。選擇貝克曼DXI800化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)作為參考儀器進(jìn)行數(shù)據(jù)比對(duì)。所有檢測(cè)結(jié)果均在2 h內(nèi)完成。結(jié)果2種檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)不同濃度的質(zhì)控品檢測(cè)總β-HCG的結(jié)果日間CV及總CV均小于15%的日間CV允許范圍。40個(gè)不同濃度的β-HCG在兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)上的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)的結(jié)果P值為0.563＞0.05，結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析顯示相關(guān)系數(shù)r2為0.9936＞0.95，符合美國(guó)臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)EP9-A2文件的要求，滿足實(shí)驗(yàn)要求。結(jié)論 通過(guò)比對(duì)實(shí)驗(yàn)，可以看出兩種檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)總β-HCG檢測(cè)結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性和一致性，避免了結(jié)果差異給臨床診斷帶來(lái)的困擾，可以同時(shí)發(fā)布檢測(cè)結(jié)果。

化學(xué)發(fā)光；β-HCG；比對(duì)分析

［Abstract］Objective To Compare two different chemiluminescene assays（Beckman Coulter Access DXI800 and Cobas e411）for the detection of human serum total β-chorionic gonadotropin（β-HCG）and discuss they are comparable between the two different ECL assays,in order to provide evidence for mutual accredit between different assay systems.Methods Biorad low and median value QC were used for Beckman Coulter Access DXI800 and Roche original low and median value QC were used for Cobas e411 daily,guaranteed all the results were in control.On this basis,40 different serum sampleswere compared of β-HCG by Beckman Coulter Access DXI800（candidate method）and Cobas e411（reference method）,all data were tested in 2 hours.Results The different QC daily CV and total CV for β-HCG tested by two analyzers were less than 15%of the day CV allows the scope of.Data of 40 different concentrations of β-HCG in two test systems were paired by t test,showed no significant difference（P=0.563＞0.05）.Correlation analysis showed the coefficient r2was 0.9936＞0.975, in line with the requirements of the EP9-A2 file of the American clinical chemistry laboratory standardization committee, which met the requirements of the experiment.Conclusion As results,two kinds of detection system for β-HCG test results had good accuracy and correlation,avoided the trouble of clinical diagnosis caused by the differences as two results were acceptable.

［Key Words］Chemiluminescene；Human Serum Total β-Chorionic gonadotropin；Comparison

人體絨毛膜促性腺激素 （HCG）是一種糖蛋白激素，一旦妊娠即可從血循環(huán)中檢測(cè)出。HCG測(cè)定在臨床中主要用于正常妊娠、異位妊娠、先兆流產(chǎn)、葡萄胎及絨毛膜癌的監(jiān)測(cè)、治療及預(yù)后隨訪［1］。HCG在血液中有多種存在形式，除包括一分子α-亞基和一分子β-亞基的完整HCG分子外，還有其他幾種不同形式的HCG分子，如糖基化HCG分子、缺刻HCG分子、β-亞基C末端肽缺失HCG分子、游離β-亞單位、游離α-亞單位等［2］。目前已知的HCG分子上有16個(gè)抗原決定簇了，其中5個(gè)在α-亞基上，7個(gè)在β-亞基上，4個(gè)抗原決定簇是結(jié)合依賴性的，另外還有4個(gè)抗原決定簇只有在游離β-亞基上才能檢出［3］。針對(duì)HCG分子的檢測(cè)，不同實(shí)驗(yàn)室有不同的檢測(cè)系統(tǒng)，有針對(duì)血清中所有的HCG分子，或只是檢測(cè)全HCG分子，或針對(duì)游離的β-亞基。目前，發(fā)展較快，應(yīng)用較廣的檢測(cè)方法是針對(duì)總β-亞基（β-HCG）的化學(xué)發(fā)光法［4］。由于其方法穩(wěn)定，快速，準(zhǔn)確而受到各大醫(yī)院的歡迎。筆者所在醫(yī)院目前有2套不同化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng) （Beckman Coulter Access DXI800直接化學(xué)發(fā)光、Cobas e411電化學(xué)發(fā)光）測(cè)定血清總β-HCG。兩套系統(tǒng)均為磁性技術(shù)，但前者為直接化學(xué)發(fā)光，后者為電化學(xué)發(fā)光。為了保證兩臺(tái)儀器對(duì)血清總β-HCG檢測(cè)結(jié)果的一致性，作者對(duì)2臺(tái)儀器的血清總β-HCG檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比對(duì)實(shí)驗(yàn)分析，以確保同一實(shí)驗(yàn)室兩套檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果的可靠性，避免結(jié)果差異給臨床診斷帶來(lái)的困擾。

1　資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)收集該院40例患者的新鮮血清標(biāo)本，年齡（25～80歲），無(wú)溶血，黃疸，按照項(xiàng)目檢測(cè)要求保存。其血清β-HCG濃度盡可能均勻分布在檢測(cè)范圍內(nèi)（0～1 000 U/L）。其中有17%的標(biāo)本血清β-HCG濃度超過(guò)試劑盒的檢測(cè)范圍。

1.2儀器與試劑

一臺(tái)Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)儀（購(gòu)于2010年）用于免疫常規(guī)項(xiàng)目檢驗(yàn)，一臺(tái)Cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)儀（購(gòu)于2012年）用于急診檢驗(yàn)。2臺(tái)儀器檢測(cè)試劑均為廠家提供的配套試劑，校準(zhǔn)品。

1.3方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)原理以Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光測(cè)定為參比方法 （X），Cobas e411電化學(xué)發(fā)光測(cè)定為待評(píng)方法 （Y），儀器檢測(cè)原理均為雙抗體夾心法。Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光測(cè)定以兔抗βHCG-堿性磷酸酶結(jié)合物和包被著山羊抗小鼠IgG-小鼠單克隆抗βHCG復(fù)合物的順磁性微粒及血清HCG形成夾心復(fù)合物，借磁場(chǎng)結(jié)合，通過(guò)化學(xué)發(fā)光底物L(fēng)umin-Phos 530發(fā)光檢測(cè)。Cobas e411以生物素化的抗HCG、釕標(biāo)記的抗HCG與血清HCG形成夾心復(fù)合物，借生物素與鏈霉素親和素包被的微粒子結(jié)合，通過(guò)電極加壓后發(fā)光。

1.3.2實(shí)驗(yàn)標(biāo)本測(cè)定實(shí)驗(yàn)前按儀器說(shuō)明書對(duì)儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)和保養(yǎng)、校準(zhǔn)和質(zhì)控，然后測(cè)定標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)期間每天的低、中質(zhì)控值在控才能進(jìn)行樣本測(cè)定，每天隨機(jī)收集2～10份新鮮血清，2 h內(nèi)在2臺(tái)儀器上完成檢測(cè)。

1.3.3數(shù)據(jù)離群值篩查按照EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群值篩查，通過(guò)測(cè)定方法間測(cè)定值間的均值，均值間的差值，超過(guò)均值的4倍為離群值，若離群值＞1應(yīng)調(diào)查標(biāo)本。

1.3.4兩臺(tái)儀器相關(guān)性分析按照EP9-A2文件進(jìn)行可信度判斷，根據(jù)比對(duì)數(shù)據(jù)得出回歸方程及相關(guān)系數(shù)r2，并用相關(guān)系數(shù)r2做粗略判斷，若r2≥0.95則認(rèn)為X取值范圍合適，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠，兩檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果間具有良好相關(guān)性。

1.3.5兩種系統(tǒng)給定濃度水平檢測(cè)結(jié)果偏倚評(píng)估根據(jù)臨床要求，將給定的3個(gè)預(yù)定水平濃度Xc低值（5 IU/L）、中值（500 IU/L）、高值（1000 IU/L）代入回歸方程，計(jì)算待評(píng)方法（Y）與參比方法（X）之間的系統(tǒng)誤差（SE）和相對(duì)偏倚（SE%）。SE=lYc-Xcl，SE%=（SE/Xc）×100%。本文設(shè)定的β-HCG TEa為20%，以SE＜1/2 TEa為臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，則認(rèn)為兩種系統(tǒng)間的檢測(cè)結(jié)果具有可比性。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行秩和檢驗(yàn)及相關(guān)性分析。

2　結(jié)果

2.1精密度比較

表1　兩臺(tái)儀器測(cè)定總β-HCG的精密度比較（IU/L）

2.2方法間離群值檢測(cè)

2種檢測(cè)系統(tǒng)的數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)分析，無(wú)離群值。

2.3比對(duì)實(shí)驗(yàn)

2臺(tái)儀器分別檢測(cè)40份血清樣本總β-HCG檢測(cè)結(jié)果呈非正態(tài)分布，對(duì)此進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，結(jié)果顯示P值為0.563（＞0.05），兩臺(tái)儀器的結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4相關(guān)性分析

2種檢測(cè)系統(tǒng)的相關(guān)分析見(jiàn)圖1，相關(guān)系數(shù)r2= 0.9936＞0.95，截距a=0.799，斜率b=0.909，回歸方程y= 0.909x+0.799。說(shuō)明回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠，可以用此評(píng)估兩種檢測(cè)系統(tǒng)間的系統(tǒng)偏倚。

圖1　兩臺(tái)儀器測(cè)定結(jié)果均值散點(diǎn)圖

2.5結(jié)果偏倚評(píng)估

總β-HCG在Cobas e411檢測(cè)系統(tǒng)上的3個(gè)濃度水平以Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光測(cè)定為參比方法的SE和SE%，均＜1/2 TEa。見(jiàn)表2。

表2　兩種檢測(cè)系統(tǒng)的偏倚評(píng)估

3　討論

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的互認(rèn)是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要，而報(bào)告互認(rèn)的基礎(chǔ)則是同一檢測(cè)項(xiàng)目在不同檢測(cè)系統(tǒng)得出的結(jié)果是否具有可比性。近年來(lái)，隨著自動(dòng)化儀器的大量使用，同一實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常有2套不同的檢測(cè)系統(tǒng)。該院擁有Beckman Coulter Access DXI800與Cobas e411 2種化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)系統(tǒng)，2套檢測(cè)系統(tǒng)由于反應(yīng)體系不同，反應(yīng)池差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此如何減少誤差，保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，實(shí)現(xiàn)結(jié)果之間的可比性，是檢驗(yàn)工作的重點(diǎn)。比對(duì)實(shí)驗(yàn)是實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確度溯源和檢驗(yàn)結(jié)果可比性的重要途徑［5-6］。為了使各檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果達(dá)到一致，需要進(jìn)行系統(tǒng)間結(jié)果的比對(duì)及偏倚評(píng)估，不同檢測(cè)系統(tǒng)間的比對(duì)結(jié)果超過(guò)預(yù)期偏倚時(shí)，分析原因后進(jìn)行校正，確保檢測(cè)結(jié)果一致，檢驗(yàn)報(bào)告正確發(fā)出，便于臨床結(jié)果解釋。

血清β-HCG在臨床應(yīng)用廣泛，對(duì)于先兆流產(chǎn)，輸卵管妊娠及妊娠滋養(yǎng)層疾病有重要意義。為保證我科兩套檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，此次實(shí)驗(yàn)對(duì)血清β-HCG這一檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行了比對(duì)實(shí)驗(yàn)。該研究參考了美國(guó)CLSI EP9-A2文件［7］，使用病人樣本進(jìn)行方法比對(duì)，這樣可以減少基質(zhì)效應(yīng)。由于室間質(zhì)評(píng)、室內(nèi)質(zhì)控品的制備與血清樣本制備過(guò)程不同，參與室間質(zhì)評(píng)、室內(nèi)質(zhì)控品的樣本進(jìn)行質(zhì)量控制時(shí)，無(wú)法評(píng)估患者分析前的各步驟，即標(biāo)本采集、傳遞及處理等對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響［8］。因此使用臨床新鮮血清比對(duì)能更加準(zhǔn)確反映測(cè)定結(jié)果偏倚的真實(shí)情況。

該院Beckman Coulter Access DXI800化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)系統(tǒng)參加了2015年衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心全國(guó)腫瘤標(biāo)志物室間質(zhì)評(píng)，成績(jī)優(yōu)秀，結(jié)果可靠，故以該系統(tǒng)為參考系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)室對(duì)標(biāo)本的檢測(cè)，通常每份樣本只做一次檢驗(yàn)就發(fā)出報(bào)告，這要求檢測(cè)系統(tǒng)檢出的結(jié)果必須有良好的重現(xiàn)性。精密度是檢測(cè)重現(xiàn)性的指標(biāo),因此，對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行精密度驗(yàn)證是必需的，最基本的要求［9-10］。該實(shí)驗(yàn)室2臺(tái)儀器低值、高值2個(gè)批號(hào)的質(zhì)控物測(cè)定β-HCG結(jié)果日間及總CV均＜15%，表明兩套檢測(cè)系統(tǒng)的精密度較好，檢測(cè)結(jié)果可靠。本次比對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明：2臺(tái)儀器的檢測(cè)對(duì)β-HCG的測(cè)量結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相關(guān)性良好。該文參照澳大利亞室間質(zhì)評(píng)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［5］的允許總誤差（TEa）：hCG≤20 mU/mL,允許總誤差為±4 mU/mL；hCG＞20 mU/mL,允許總誤差為20%設(shè)置了SE%＜1/2 TEa為可接受標(biāo)準(zhǔn)。在評(píng)價(jià)低、中、高濃度水平的β-HCG的預(yù)期偏差均在可接受范圍內(nèi)，待評(píng)方法的偏倚是可接受的。但是在β-HCG高于試劑盒的直接檢測(cè)上限1 000 IU/L，兩套系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)較大偏差。在該研究的40組比對(duì)數(shù)據(jù)中有6組比對(duì)數(shù)據(jù)值＞1 000 IU/L，偏差從5.88%～23.6%不等，其中有3組比對(duì)數(shù)據(jù)出現(xiàn)較大偏差（＞10%），分別為15.58% （DXI：49 874 IU/L，E411：42 102 IU/L），19.9%（DXI：5 688 IU/L，E411：4 552 IU/L），23.6%（DXI：10 428 IU/L，E411：7 966 IU/L）。分析其原因，可能由于2套系統(tǒng)在檢測(cè)大于1 000 IU/L的β-HCG時(shí)都采用稀釋模式，檢測(cè)系統(tǒng)存在不同程度的差異，另外由于儀器部件損耗造成的儀器狀態(tài)問(wèn)題，反應(yīng)系統(tǒng)的差異也會(huì)給檢測(cè)帶來(lái)誤差，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差。這可能是由于兩套系統(tǒng)在檢測(cè)大于1 000 IU/L的β-HCG時(shí)超出試劑盒上限范圍，都采用稀釋模式，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差。以上研究表明2種檢測(cè)系統(tǒng)的系統(tǒng)偏差在可接受范圍內(nèi)，與參比系統(tǒng)具有可比性，可以同時(shí)發(fā)布檢測(cè)結(jié)果，避免了結(jié)果差異給臨床診斷帶來(lái)的困擾。

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The Comparative Analysis for the Detection of Human Serum Total βchorionic Gonadotropin between Beckman Coulter Access DXI800 and Cobas e411

QIN Xue-jun，AN Min-zhi，LI Yang-yu，MAO Qi-guan，LIN Qing
Department of Clinical Laboratory,FuJian University of Traditional Chinese Medicine Laboratory,Fuzhou,Fujian Province, 350009 China

R446.6

A

1674-0742（2016）08（b）－0033-04

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.23.033

秦雪君（1984.1-），女，湖南永州人，碩士，檢驗(yàn)技師，研究方向：臨床生化。

林青（1969.4-），女，福建南平人，主任技師，研究方向：臨床生化，E-mail：371038389@qq.com。

2016-05-16）