趙云波,呂紅梅

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 普外三科，黑龍江 佳木斯154002;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院)

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結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-1在胃腺癌中的表達(dá)及意義

趙云波1,呂紅梅2*

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 普外三科，黑龍江 佳木斯154002;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院)

在世界范圍內(nèi)，胃癌是第四大最常見(jiàn)的癌癥，也是癌癥死亡的第二大原因，近年來(lái)我國(guó)胃癌發(fā)病率逐年增加[1，2]。結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-1(CCAT-1)是一個(gè)擁有2628核苷酸分子的長(zhǎng)鏈非編碼RNA，新近發(fā)現(xiàn)CCAT-1在胃癌組織、癌旁組織中高度表達(dá)[3]。目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有關(guān)于正常胃組織、胃癌組織、癌旁組織、幽門螺桿菌陰性和陽(yáng)性及腫瘤分期患者中CCAT-1表達(dá)方面的研究，并且本研究排除新輔助化療的病人，以消除化療對(duì)CCAT-1表達(dá)的潛在影響。

1　資料與方法

1.1一般資料

35例胃腺癌標(biāo)本(均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)并進(jìn)行回顧，以確定腫瘤分期)取自2013年1月-2014年12月接受手術(shù)切除的病人，其中男26例，女9例，年齡24-89歲(平均56.1±8.5歲)，取胃腺癌病人的腫瘤組織和癌旁組織，T2期11例，T3期18例，T4期6例；30例正常胃組織(正常對(duì)照組)取自同期患上消化道穿孔行胃大部切除術(shù)的病人，其中男11例，女19例，年齡18-39歲(平均24.4±7.2歲)，幽門螺旋桿菌感染陽(yáng)性12例，陰性18例。

1.2方法

標(biāo)本取材后，先置于液氮中冷凍1h,快速取出后置于-80 ℃冰箱中保存待測(cè).實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒(南京生興生物技術(shù)有限公司),單鏈cDNA合成試劑盒(上海碩盟生物科技有限公司)，RNA提取(TRIzol,GibcoBRL)DNA純化試劑盒(北京博大生物科技有限公司),實(shí)時(shí)定量PCR儀(Rocher)。引物由美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司合成，產(chǎn)物長(zhǎng)度為176bp。GAPDH作為對(duì)照基因。

CCAT-1：5′-TCACTGACAACATCGACTTTGAAG-3′,3′-GGAGAAAACGCTTAGCCATACAG-5′。用TRIzol提取組織總RNA[4]。總RNA提取之后,測(cè)得各管內(nèi)所提總RNA的濃度和純度[5]。各管均取2μg總RNA,逆轉(zhuǎn)錄總反應(yīng)體系25μl,用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶42 ℃逆轉(zhuǎn)錄1h,合成cDNA。PCR反應(yīng)用美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司QRT-PCR熱循環(huán)儀進(jìn)行。QRT-PCR程序運(yùn)行40個(gè)循環(huán)，之后在95℃ 10min的初始孵育。每個(gè)循環(huán)包括95℃×15s。和60℃×1min。結(jié)果進(jìn)行了分析CCAT-1的相對(duì)量(RQ)的表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SSPS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,組間統(tǒng)計(jì)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及單因素方差分析進(jìn)行比較。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1CCAT-1mRNA在胃腺癌組織、癌旁組織和正常胃組織中的表達(dá)

胃腺癌組織、癌旁組織中CCAT-1mRNA水平顯著高于正常胃組織,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)表1)；30例正常胃組織中幽門螺桿菌陰性和陽(yáng)性患者中CCAT-1mRNA表達(dá)無(wú)顯著差異，見(jiàn)圖1；在35例胃腺癌病人的CCAT-1mRNA表達(dá)與TNM分期沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖2。

表1　CCAT-1mRNA在胃腺癌、癌旁組織和正常胃組織中的表達(dá)水平

圖1　胃組織中CCAT-1 mRNA的水平與Hp感染的關(guān)系

圖2　胃癌組織中CCAT-1 mRNA的水平與分期的關(guān)系

3　討論

胃癌預(yù)后同早期診斷、早期治療、腫瘤分期密切相關(guān)，但是在我國(guó)，超過(guò)80%的患者在診斷時(shí)已是中晚期胃癌，病人預(yù)后差[6,7]。故生存率的提高取決于密切監(jiān)測(cè)患癌高風(fēng)險(xiǎn)人群和新治療策略的應(yīng)用。近年來(lái)，全基因組和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的證據(jù)表明，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNAs)屬于基因組中非編碼部分，其非編碼部分在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到關(guān)鍵作用[8]。lncRNAs在各種癌癥中過(guò)度表達(dá)，能夠起到基因樣的作用的lncRNAs是結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄-1(CCAT-1)[9]。崔戈發(fā)現(xiàn)CCAT-1在結(jié)腸癌顯著過(guò)度表達(dá)。最近的一項(xiàng)研究顯示，在胃癌組織中，發(fā)現(xiàn)在CCAT-1的啟動(dòng)子區(qū)域c-MYC直接結(jié)合E-box元素，并且當(dāng)CCAT-1異位表達(dá)時(shí)，能增加啟動(dòng)子活性和CCAT-1的表達(dá)[11]。此外，c-MYC是一種重要的原癌基因,它具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤血管生成的作用[12],可降低基因組穩(wěn)定性,并且與細(xì)胞分化、凋亡及周期調(diào)控密切相關(guān),CCAT-1可能為c-MYC誘導(dǎo)核抗原,是Myc的靶基因,異常表達(dá)能促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移[13]。

本研究結(jié)果表明，胃癌組織中CCAT-1的表達(dá)水平大約是健康胃組織中的12倍(RQ=21.91±5.31和1.58±0.48,P<0.001)，胃癌組織中CCAT-1的表達(dá)水平與癌旁組織比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(21.91±5.31、18.22±1.50， P=0.243)。雖然幽門螺桿菌感染的存在被認(rèn)為是一個(gè)胃癌發(fā)生、發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素[14]，但本研究顯示，正常胃組織中幽門螺桿菌陰性和陽(yáng)性患者中CCAT-1mRNA表達(dá)無(wú)顯著差異(RQ= 2.22±0.27與1.92±0.47，P=0.061)。因在我們的研究中沒(méi)有進(jìn)行癌前病變及早期胃癌組織中CCAT-1表達(dá)水平的測(cè)定，病人均為中晚期胃癌，故導(dǎo)致本研究結(jié)果胃癌病人的CCAT-1mRNA表達(dá)與TNM分期沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(T4-RQ=23.42±2.07，T3-RQ=22.57±3.46，T2-RQ=22.15±2.59，P>0.05)。

我們相信，CCAT-1具有成為一種胃癌生物標(biāo)志物的潛力，對(duì)提高胃癌的早期診斷和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以及靶向分子治療有重要作用，但需要大規(guī)模的研究胃癌的各個(gè)階段CCAT-1的表達(dá)水平，并研究CCAT-1參與胃癌癌變的確切分子機(jī)制。

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