王曉峰，王　偉*，張　艷，牛志多，劉　新，苗　強，劉　聰，袁　琳，孔晨飛

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 口腔科,吉林 長春130033；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院科學(xué)研究中心；3.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院)

?

紫景天總黃酮的分離制備及鑒定研究

王曉峰1，王偉1*，張艷1，牛志多3，劉新1，苗強1，劉聰1，袁琳1，孔晨飛2*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 口腔科,吉林 長春130033；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院科學(xué)研究中心；3.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院)

牙周炎是口腔科常見病多發(fā)病，是導(dǎo)致牙齒喪失的主要原因之一。目前主要治療方法是以局部治療為主，藥物治療主要是牙周袋用藥。目前牙周袋用藥基本是抗生素制劑，易產(chǎn)生耐藥性及菌叢失調(diào)等副作用[1]。

紫景天為景天科多年生草本植物，在東北地區(qū)的長白山具有廣泛分布。其主要化學(xué)成分為多種黃酮類化合物和活性多糖等。全草入藥，具有收斂止血、清熱解毒及調(diào)節(jié)免疫功能等功效。此外，紫景天還能減輕或消除再生障礙性貧血引起的蛋白質(zhì)代謝障礙、消腫生肌、抗炎鎮(zhèn)痛及促進潰瘍愈合[2-4]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)其鮮汁制成的制劑對口腔黏膜病有治療作用。因此我們采用現(xiàn)代的方法，榨取紫景天新鮮莖葉的汁液，然后進行有效成分的提取和分離，為紫景天的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1　材料和方法

1.1材料與試劑紫景天全草，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室提供。韓國英麟高效液相色譜系統(tǒng)：SP930D色譜泵、UV730D紫外檢測器，7725i手動進樣器，色譜3000工作站。槲皮素對照品、山柰素對照品，購于中國藥品生物制品檢定所。其他試劑均為色譜純或分析純。

1.2總黃酮的提取

1.2.1紫景天鮮莖葉搗碎軋炸取汁，取軋炸汁用石油醚脫脂后，用正丁醇一倍以上，提取2次以上，合并正丁醇液，回收正丁醇濃縮蒸干、干燥。

1.2.2紫景天干燥藥材，加水煎煮，煎煮液用石油醚脫脂后，用正丁醇一倍以上，提取2次以上，合并正丁醇液，回收正丁醇濃縮蒸干、干燥。

1.2.3紫景天干燥藥材，用乙醇(60%-80%)一倍以上，回流提取2次以上，乙醇液回收乙醇濃縮至無醇味，水液用石油醚脫脂后，用正丁醇一倍以上，提取2次以上，合并正丁醇液，回收正丁醇濃縮蒸干、干燥后得總黃酮。

1.3總黃酮提取物中槲皮素和山柰素的測定

采用高效液相色譜法，具體實驗步驟如下：

槲皮素對照品溶液：精密稱取槲皮素對照品4.84 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濃度為0.484 mg/ml。作為槲皮素對照品母液。

山柰素對照品溶液：精密稱取山柰素對照品8.22 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濃度為0.822 mg/ml。作為山柰素對照品母液。

混合對照品溶液：精密量取槲皮素對照品母液0.2 ml、山柰素對照品母液0.15 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為槲皮素、山柰素混合對照品溶液。濃度：槲皮素為9.68 μg/ml、山柰素為12.33 μg/ml。

供試品溶液的制備：取樣品0.1 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，加入甲醇90 ml，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，離心，精密量取離心液10 ml，精密加入鹽酸5 ml，置90℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取上述樣品1.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，進樣測定。

標準曲線的制備：精密吸取槲皮素、山柰素混合對照品溶液2、4、8、12、16 μl，分別注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標，以對照品進樣量為橫坐標，繪制標準曲線。

2　結(jié)果

2.1參考藥典方法，采用高效液相色譜法，供試品中的槲皮素、山柰素能夠得到很好的分離，標準曲線結(jié)果見圖1。

2.2樣品測定結(jié)果見表1。

表1　樣品含量測定結(jié)果

結(jié)果：槲皮素和山柰素的總量超過了50%。

圖1　槲皮素、山柰素標準曲線

2.3本品不同時間的累積釋放率見表2和釋放曲線圖(圖2)。釋放速率經(jīng)擬合，符合一級動力學(xué)方程。

圖2　藥物釋放曲線

時間累積釋放度11.1433.575.5486.0229.59b2.1899m1.081941524公式y(tǒng)=b*m^x

3　討論

在牙周炎的治療中，主要為控制或消除炎癥并促進組織再生。針對牙周炎病變過程中牙周組織的破壞和牙槽骨的吸收，阻斷炎癥因子的作用，研究開發(fā)高效低毒的牙周炎治療藥物為臨床治療牙周炎所亟需。

在最近的報道中，祖國醫(yī)學(xué)在牙周炎防治中的作用倍受廣大研究人員重視，中醫(yī)藥的發(fā)掘利用取得了長足進步。一些中草藥的提取物或單體被證實具有抗炎和直接或間接的抑制破骨細胞分化和功能的作用[5]。中藥具有毒副作用少、價格便宜、標本兼治的優(yōu)勢，廣受關(guān)注。但中藥有效成分的作用機理往往不夠明晰，不能得到國際上的普遍認可，從而限制了其在臨床上的應(yīng)用。

在我們的研究工作中，采用長白山野生藥材紫景天作為原料，對其進行了有效成分的提取、分離及鑒定研究，將為中藥提取物在牙周炎臨床治療上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

[1]Cuesta AI,Jewtuchowicz VM,Brusca MI,et al.Antibiotic susceptibility of Staphylococcus aureus isolates in oral mucosa and pockets of patients with gingivitis-periodontitis[J].Acta Odontol Latinoam，2011，24:35.

[2]Lin YC,Luo HY,Jin QX.Study on effect of total flavanones of Sedum sarmentosum on apoptosis of hepatic stellate cells and its mechanism[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2015， 40:3273.

[3]Lee SL,Chin TY,Lai CL,et al.Sedum mexicanum Britt.Induces Apoptosis of Primary Rat Activated Hepatic Stellate Cells[J].Evid Based Complement Alternat Med,2015:194373.

[4]Zhong D,Zhong Z,Wu L,et al.Thermal Characteristics of Hyperaccumulator and Fate of Heavy Metals during Thermal Treatment of Sedum plumbizincicola[J].Int J Phytoremediation,2015,17:766.

[5]Huang BP,Lin CH,Chen YC,et al.Anti-inflammatory effects of Perilla frutescens leaf extract on lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7 cells[J].Mol Med Rep,2014,10:1077.

吉林省科技廳白求恩基金專項(20160101080JC);吉林省直衛(wèi)生專項項目(CZZR2014010)

1007-4287(2016)08-1274-02

2016-02-16)