張維建 方瑤 蔣飛照

RBM3在胃癌組織和轉移淋巴結中的表達及其臨床意義

張維建 方瑤 蔣飛照

目的 探討RNA結合基序蛋白3（RBM3）在胃癌組織和轉移淋巴結中的表達及其臨床意義。方法 免疫組織化學法測定80例胃癌組織和癌旁正常組織及清掃淋巴結中RBM3表達量并予以比較。結果 RBM3在胃癌和正常胃黏膜中的陽性表達率分別為82.5%（66/80）和36.3%（29/80），兩者差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。陽性淋巴結RBM3的表達率為78.4%（58/74），和胃癌組織的表達率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。胃癌RBM3的表達與胃癌腫瘤浸潤深度和腫瘤分化程度有關（P＜0.05），陽性淋巴結中RBM3的表達和原發(fā)腫瘤的分化程度有關（P＜0.05）。結論 RBM3在胃癌組織和陽性淋巴結中高表達，與腫瘤細胞分化程度和（或）腫瘤浸潤深度有關，可以作為胃癌惡性度和預后的判定指標。

胃癌 RBM3 淋巴結轉移 臨床病理 預后

惡性腫瘤的無限制增殖導致細胞能量代謝異常和腫瘤微環(huán)境缺氧［1，2］，從而誘導腫瘤細胞某些基因和蛋白表達異常。本研究通過免疫組織化學方法檢測原發(fā)胃癌組織和轉移淋巴結中RNA結合基序蛋白3 （RNA-binding motif protein 3，RBM3）的表達情況，探討是否有表達異常及其與臨床病理的關系。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集本院2014年6月至12月行胃癌根治手術并病理證實的80例胃癌患者的臨床病理資料。其中男52例，女28例；年齡37～85歲，平均年齡（62.5±24.6）歲。所有患者術前均未接受放療或化療等抗腫瘤治療。

1.2 實驗試劑和方法 RBM3兔抗人多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，SP試劑盒和即用型二氨基聯(lián)胺（DAB）顯色液購自北京中杉制品有限公司。胃癌組織和癌旁3cm正常組織及清掃的淋巴結各1份新鮮獲取后甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4μm厚度切片。采用免疫組織化學SP試劑盒檢測，嚴格按照試劑盒說明進行。簡要步驟為常規(guī)脫蠟，枸櫞酸鹽緩沖液高壓修復，H2O2封閉，山羊血清室溫封閉，加入稀釋1：100的HIF-1α抗體或RBM3抗體孵育，磷酸鹽緩沖液洗滌，加酶標抗鼠/兔聚合物孵育，DAB染色，蘇木精復染，常規(guī)脫水透明和封片，顯微鏡觀察和攝照。

1.3 結果判定 RBM3主要表達于細胞核中，有棕褐色顆粒染色為陽性，表達強度按陽性細胞所占百分比進行判斷，取其平均值，分為4級：陽性細胞＜1%，為1分，1%～25%為2分，26%～75%為3分，≥75% 為4分。將1～2分記為陰性，3～4分記為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSSl3.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 原發(fā)胃癌和癌旁組織及轉移淋巴結中RBM3的表達 RBM3在胃癌和正常胃黏膜中的陽性表達率分別為82.5%（66/80）和36.3%（29/80），兩者差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。80例獲取淋巴結標本中，74例有淋巴結轉移，陽性淋巴結RBM3的陽性表達率為78.4%（58/74），和胃癌組織的表達率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。74例陽性淋巴結RBM3的表達相對原發(fā)腫瘤有所下調(diào)，但組間差異亦無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。典型病例胃癌陽性染色圖見圖1，淋巴結陽性染色圖見圖2。

圖1 胃癌陽性染色圖

圖2 淋巴結陽性染色

2.2 胃癌組織和轉移淋巴結RBM3的表達與臨床病理的關系 胃癌RBM3的表達與胃癌腫瘤浸潤深度和腫瘤分化程度有關（P＜0.05），與患者的性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移和有無脈管癌栓無關（P＞0.05）。陽性淋巴結轉移中RBM3的表達和原發(fā)腫瘤的分化程度有關（P＜0.05），與其他臨床病理指標沒有相關性。見表1。

表1 胃癌組織和轉移淋巴結RBM3的表達與腫瘤臨床病理的關系

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)RBM3參與基因的穩(wěn)定性和表達調(diào)節(jié)，促進腫瘤調(diào)節(jié)蛋白的表達，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展［3，4］。RBM3在多種惡性腫瘤中表達上調(diào)，并且與腫瘤病理和預后有相關性［5，6］。在腫瘤發(fā)展過程中，RBM3的表達與細胞增殖程度呈正相關，隨著腫瘤增值活躍表達量顯著增加，在靜止或終末分化腫瘤細胞中低表達。Liv Jonsson等［7］研究發(fā)現(xiàn)伴有胃黏膜小腸化生的胃癌中RBM3的表達明顯高于無上皮化生的胃癌，同時發(fā)現(xiàn)RBM3的過表達和Ki-67表達有關，而Ki-67是細胞增殖標志物，因此說明RBM3參與胃上皮細胞增值，可能和胃癌腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展有關。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌腫瘤組織相對正常組織RBM3的陽性表達率明顯升高，且高中分化胃癌的RBM3表達與低或未分化的腫瘤的表達差異明顯，說明RBM3參與胃癌腫瘤細胞的增值和發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)在直腸癌、前列腺癌和乳腺癌等惡性腫瘤中，低RBM3表達量意味著腫瘤惡性程度高，預后差［5，6］。本研究結果發(fā)現(xiàn)RBM3的表達與腫瘤浸潤深度和腫瘤分化程度有關，而后兩者是衡量腫瘤惡性程度的指標，因此RBM3也是胃癌惡性程度的參考因素之一。同時低RBM3表達的胃癌，腫瘤浸潤深度增加，腫瘤分化程度偏低，臨床病理分期相對較晚，與國內(nèi)外研究［7］結果相同，因此測定胃癌組織中RBM3表達量可以作為預后的判斷因素之一，同時RBM3低表達是胃癌預后差的獨立危險因數(shù)［8］。但本研究暫無法統(tǒng)計術后生存率，有待于進一步論證。

有報道［9］前列腺癌轉移灶的RBM3表達相對原發(fā)灶明顯下調(diào)，但本研究中，74例轉移淋巴結中，有58例RBM3表達陽性，陽性率為78.4%，和原發(fā)胃癌的陽性率相近，同時轉移淋巴結的RBM3表達量有所下調(diào)，但兩組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本組患者均未出現(xiàn)除淋巴結轉移外的其他轉移病灶，因此不能評估肝臟或腹腔轉移腫瘤的RBM3表達情況。陽性淋巴結RBM3表達和腫瘤細胞分化程度有關，與腫瘤浸潤深度、腫瘤大小、有無淋巴結轉移和脈管癌栓無關，和原發(fā)腫瘤RBM3表達的相關因素有所不同，可能原因在于腫瘤浸潤深度是淋巴結轉移的相關因素，具體原因有待進一步驗證。

總之，RBM3作為細胞增殖和惡性腫瘤相關的分子，在胃癌和轉移淋巴結中表達增加，與腫瘤分化程度和（或）腫瘤浸潤深度有關，其低表達意味著腫瘤的預后較差，因此可以作為腫瘤惡性程度和預后的指標之一。

1 Hanahan D，Weinberg RA.Ha11marks of cancer：the next generation. Ce11，2011，144（5）：646～674.

2 Suther1and RM.Tumorhypoxia and gene expression-imp1ications for ma1ignant progression and therapy.Acta Onco1，1998，37（6）：567～574.

3 Pi1otte J， Dupont-Versteegden EE， Vanderk1ish PW. Widespread regu1ation of miRNA biogenesis at the Dicer step by the co1d-inducib1e RNA-binding protein，RBM3.PLoS One，2011，6（12）：e28446.

4 Sureban SM，Rama1ingam S，Natarajan G，et a1.Trans1ation regu1atory factor RBM3 is a proto-oncogene that prevents mitotic catastrophe. Oncogene， 2008，27（33）：4544～4556.

5 Hje1m B，Brennan DJ，Zendehrokh N，et a1.High nuc1ear RBM3 expression is associated with an improved prognosis in co1orecta1 cancer. Proteomics C1in App1，2011，5（11～12）：624～635.

6 Grupp K，Wi1king J，Prien K，et a1.High RNA-binding motif protein 3 expression is an independent prognostic marker in operated prostate cancer and tight1y 1inked to ERG activation and PTEN de1etions.Eur J Cancer，2014，50（4）：852～861.

7 Liv Jonsson，Char1otta Hedner，A1exander Gaber，et a1.High expression of RNA-binding motif protein 3 in esophagea1 and gastric adenocarcinoma corre1ates with intestina1 metap1asia-associated tumors and independent1y predicts a reduced risk of recurrence and death. Biomark Ress，2014，21（1）：1～11.

8 劉磊，潘志堅，韓亮.RNA結合基序蛋白3在胃癌組織的表達及臨床意義.中華實驗外科雜志，2015，32（6）：1410～1412.

9 Jonsson L，Gaber A，U1mert D，et a1.High RBM3 expression in prostate cancer independent1y predicts a reduced risk of biochemica1 recurrence and disease progression.Diagn Patho1，2011，6（1）：50～57.

Objective To explore the expressions of RNA-binding motif protein 3（RBM3）in gastric carcinoma and their clinical signifi cances. Method The expression of RBM3 were detected by immunohistochemical staining in 80 patients with gastric carcinoma. Results The positive expression rate of RBM3 in gastric carcinoma（82.5%）was signifi cantly higher than that in normal tissue（36.3%）. The positive expression rate of RBM3 in metastatic lymph node（78.4%）had no different with that in primary gastric carcinoma. The positive expression of RBM3 in gastric carcinoma was signifi cantly associated with the depth of invasion and tumor differentiation，The positive expression of RBM3 in metastatic lymph node was signifi cantly associated with tumor differentiation. Conclusion The expressions of RBM3 were higher in gastric carcinoma and metastatic lymph node than in normal tissue. They were correlated to tumor differentiation or tumor-infi ltrating，the detection of RBM3 can be used as biomarkers to predict tumor malignancy and prognosis of those patients.

Gastric carcinoma RNA-binding motif protein 3 Lymph node metastasis Clinicopathology Prognosis

浙江省溫州市科技計劃項目（Y20140369）

325000 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院