江曉紅 袁軍 付亞軍

Smad4在卵巢粘液腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

江曉紅 袁軍 付亞軍

目的 探討Smad4 在卵巢粘液腺癌組織中的表達(dá)及意義。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法，對(duì)20例卵巢原發(fā)交界性粘液性囊腺瘤、20例卵巢原發(fā)粘液腺癌和20例卵巢轉(zhuǎn)移性粘液腺癌組織進(jìn)行Smad 表達(dá)水平研究。結(jié)果 Smad4蛋白在原發(fā)腺癌及交界性粘液性囊腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)高于轉(zhuǎn)移性粘液腺癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；Smad4蛋白在原發(fā)腺癌及交界性粘液性囊腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)明顯差異。結(jié)論 Smad4作為一種新的檢測(cè)抗體，在鑒別卵巢原發(fā)性粘液腺癌和轉(zhuǎn)移性粘液腺癌中起了重要的作用。

卵巢腫瘤 粘液腺癌 原發(fā)性 轉(zhuǎn)移性

卵巢粘液腺癌是常見(jiàn)的卵巢上皮性腫瘤，早期診斷較困難，確診時(shí)多屬晚期，確診后生存率低，是預(yù)后最差的惡性腫瘤之一。卵巢發(fā)生的粘液腺癌中，有原發(fā)性的，也有部分是轉(zhuǎn)移性的（大多數(shù)是胃腸道轉(zhuǎn)移來(lái)源），這兩者的鑒別大多可以通過(guò)手術(shù)探查而證實(shí)，但對(duì)于隱匿的胃腸道腺癌轉(zhuǎn)移后的鑒別比較困難，本實(shí)驗(yàn)以常規(guī)甲醛固定，石蠟包埋的卵巢原發(fā)性粘液腺癌及轉(zhuǎn)移性粘液腺癌組織為材料，用SP免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Smad 4表達(dá)情況，從而為Smad4 蛋白對(duì)卵巢粘液腺癌鑒別是否原發(fā)提供強(qiáng)有力地證據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇本院2006年1月至2014年5月經(jīng)手術(shù)和病理學(xué)確診的卵巢粘液性腫瘤標(biāo)本60例。年齡36～71歲，平均53.3歲。其中原發(fā)性粘液腺癌20例（A組）、卵巢原發(fā)交界性粘液性囊腺瘤20例（B組）、轉(zhuǎn)移性粘液腺癌20例（C組）（胃腸道來(lái)源18例，胰腺來(lái)源2例）。所有病例經(jīng)資深病理學(xué)專家結(jié)合臨床資料確診。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 鼠抗人Smad4單克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司）、超敏免疫組織化學(xué)染色試劑盒和DAB染色劑（福州邁新生物技術(shù)有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均經(jīng)4 %甲醛溶液固定，取材，石蠟包埋，連續(xù)3～5 mm 切片。采用免疫組織化學(xué)SP 法檢測(cè)卵巢原發(fā)性粘液腺癌和轉(zhuǎn)移性粘液腺癌組織中Smad4的表達(dá)情況。步驟按說(shuō)明書操作。Smad4采用EDTA（pH 9.0）水煮高溫修復(fù)抗原DAB顯色，蘇木精對(duì)比染色。用已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替第一抗體作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定 Smad4主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，部分表達(dá)于細(xì)胞核。Smad4表達(dá)根據(jù)Pizer［1］的綜合判定標(biāo)準(zhǔn)：（1）陽(yáng)性細(xì)胞百分率即染色范圍：不顯色為0分。陽(yáng)性細(xì)胞＜10%為1分。11%～50%為2分。51%～80%為3分。＞80%為4分。（2）陽(yáng)性信號(hào)強(qiáng)度即染色強(qiáng)度：不染色為0分。淡黃色為1分。棕黃色為2分。棕褐色為3分。病理切片染色結(jié)果，均由＞2名高年資病理醫(yī)生共同完成。兩項(xiàng)指標(biāo)相加后綜合評(píng)分：陰性（＜4分）；陽(yáng)性（≥4分）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Smad4表達(dá)在卵巢交界性粘液性囊腺瘤、卵巢原發(fā)性粘液腺癌組織和轉(zhuǎn)移性粘液腺癌組中的比較差異有顯著性（χ2=51.450，P＜0.01）；Smad4在卵巢交界性粘液性囊腺瘤、卵巢原發(fā)性粘液腺癌細(xì)胞和（或）胞核中可見(jiàn)棕黃色顆粒，陽(yáng)性表達(dá)率分別為95%（19/20）、100.0%（20/20）（見(jiàn)圖1、2），在卵巢轉(zhuǎn)移性粘液腺癌細(xì)胞胞質(zhì)、胞核中呈陰性，陽(yáng)性表達(dá)率5.0%（1/20）（見(jiàn)圖3）。Smad 4在卵巢轉(zhuǎn)移性粘液腺癌組織中的表達(dá)低于在原發(fā)性粘液腺癌組織中的表達(dá)及卵巢交界性粘液性囊腺瘤組織中的表達(dá)，差異均有顯著性（P＜0.01）。Smad 4在卵巢原發(fā)粘液腺癌組織與原發(fā)性交界性粘液性囊腺瘤中表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

圖1 A組Smad4（SP×100）

圖2 B組Smad4（SP×100）

圖3 C組Smad4（SP×100）

表1 Smad4在卵巢粘液性腫瘤中的表達(dá)（n）

3 討論

Smad4又稱DPC4，最初作為抑癌基因從胰腺癌中篩選出來(lái)。Smad家族目前已確定有9名成員，根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能的不同，可將其分為受體激活型Smad、通用型Smad 和抑制型Smad。Smad4屬于通用型Smad。在Smad家族中，Smad4與腫瘤的關(guān)系尤為密切［2］。Smad4功能失活或表達(dá)低下可能影響TGF-β的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并參與腫瘤的形成［3］。

Smad4表達(dá)缺失或突變使細(xì)胞逃脫TGF-β的抑制作用，促進(jìn)了癌前病變的發(fā)生及其向癌的轉(zhuǎn)化，并影響了癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。Smad4作為腫瘤抑制基因，最初是在40% ～50% 的胰腺癌中發(fā)現(xiàn)有缺失和突變。近期的研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)胰腺癌存在Smad4基因的缺失或突變［4］，而Smad4的失活也可見(jiàn)于胃癌、結(jié)直腸癌等［5］，張朋彬等［6］研究發(fā)現(xiàn)Smad4蛋白在正常胃黏膜腺體主要表達(dá)于細(xì)胞漿中，以胃腺體的體部和底部最為明顯。在腸化胃黏膜及不典型增生組織，Smad4蛋白的表達(dá)主要位于細(xì)胞漿中，但在胞漿中分布不均勻，與正常胃黏膜相比，其表達(dá)未見(jiàn)明顯異常（P＞0.05）。

A Leng等［7］報(bào)道，胃癌組織Smad4蛋白的表達(dá)明顯低于癌旁組織，并且Smad4蛋白表達(dá)與胃癌組織分化程度有關(guān)，分化程度低的胃癌組織Smad4的表達(dá)明顯低于分化程度高的胃癌組織。

卵巢是轉(zhuǎn)移性腫瘤的肥沃土囊，不僅是因?yàn)槁殉簿哂胸S富的血管，同時(shí)也與卵巢的自身解剖結(jié)構(gòu)有著緊密的關(guān)系，腹腔內(nèi)臟的惡性腫瘤極易通過(guò)播散的方式從卵巢表面排卵的小裂口進(jìn)入卵巢實(shí)質(zhì)，因此卵巢是女性生殖系統(tǒng)中轉(zhuǎn)移性腫瘤最好發(fā)的部位。對(duì)于卵巢轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的來(lái)源，目前已經(jīng)達(dá)成共識(shí)，以胃腸道、乳腺及子宮最為多見(jiàn)，三者之和占卵巢轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的＞90%，其中又以胃癌轉(zhuǎn)移到卵巢（Krukenberg tumours）最為常見(jiàn)。對(duì)于卵巢原發(fā)性粘液腺癌與轉(zhuǎn)移性的腺癌，β-catenin、CA125、HAM56、MUC2、CEA、CK7、CK20等均考慮并加入到卵巢原發(fā)及轉(zhuǎn)移性腫瘤的鑒別診斷工作中，但是任何一個(gè)單一的指標(biāo)并不可靠，不宜單獨(dú)使用。從形態(tài)學(xué)角度鑒別兩者非常困難，但是現(xiàn)有的免疫組化指標(biāo)，無(wú)法滿足日常工作的需要，找到腫瘤的原發(fā)部位，對(duì)進(jìn)一步臨床治療具有重要的指導(dǎo)意義。為了解決這一工作難題，病理工作者們一直在積極的研究與探討，隨著Smad4這一新腫瘤抑制基因的發(fā)現(xiàn)，提供了新的研究思路。

本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)了20例卵巢原發(fā)性交界性粘液性囊腺瘤、20例卵巢原發(fā)性粘液腺癌組織和20例轉(zhuǎn)移性粘液腺癌組織中的Smad4。結(jié)果顯示Smad4在原發(fā)交界性粘液性囊腺瘤組織陽(yáng)性率為95%、原發(fā)性粘液腺癌組織陽(yáng)性率為100 %，在轉(zhuǎn)移性粘液腺癌中的陽(yáng)性率為5.0%，在轉(zhuǎn)移性粘液性腺癌組的陽(yáng)性率明顯低于原發(fā)性粘液腺癌組及原發(fā)性交界性粘液性囊腺瘤組，差異有顯著性（P＜0.01）。推測(cè)Smad4作為一種抑癌基因，其在卵巢原發(fā)性粘液性腫瘤中完全表達(dá)，因此其陰性表達(dá)有意義（可以排除卵巢原發(fā)的可能性），此應(yīng)用在卵巢原發(fā)性粘液腺癌與轉(zhuǎn)移性粘液腺癌的鑒別中可能起非常重要的作用并具有廣泛而深遠(yuǎn)的研究?jī)r(jià)值。對(duì)于大樣本研究及長(zhǎng)遠(yuǎn)的應(yīng)用價(jià)值，Smad4與腫瘤的分化、大小、浸潤(rùn)的程度以及預(yù)后等有無(wú)相關(guān)性，以及其在卵巢原發(fā)性粘液性腫瘤中的作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的臨床及實(shí)驗(yàn)研究。

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314051 浙江省嘉興市婦幼保健院