徐萍 周赤燕 鐘少平★

孕早期母胎界面血管新生在稽留流產(chǎn)患者發(fā)病中作用

徐萍 周赤燕 鐘少平★

目的 通過檢測微血管密度在正常早孕及稽留流產(chǎn)患者絨毛、蛻膜的表達(dá)情況及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在正常早孕及稽留流產(chǎn)患者體內(nèi)濃度，探討血管新生障礙在稽留流產(chǎn)發(fā)病中的可能機(jī)制。方法 在2014年4月至2015年4月期間采用免疫組織化學(xué)染色法檢測18例正常早期妊娠及21例稽留流產(chǎn)患者絨毛及蛻膜中微血管表達(dá)情況。同時(shí)利用ELISA方法檢測比較VEGF在兩組孕婦體內(nèi)的濃度水平。結(jié)果 高倍鏡視野下正常早孕絨毛、蛻膜微血管密度依次為（22.37±2.16）個(gè)/（×400）及（26.94±3.08）個(gè)/（×400），稽留流產(chǎn)患者絨毛、蛻膜微血管密度微血管密度（3.24±0.12）個(gè)/（×400）及（2.78±0.21）個(gè)/（×400），上述兩組孕婦中VEGF濃度依次為（100.75±9.13）pg/ml及（10.36±0.49）pg/ml。與正常早孕患者比較，稽留流產(chǎn)孕婦體內(nèi)VEGF下降明顯（P＜0.05），并且伴母胎界面血管新生程度降低明顯（P＜0.05）。結(jié)論 孕期血管新生參與了胎盤形成，并在孕早期稽留流產(chǎn)發(fā)病中起到重要作用。

血管新生 稽留流產(chǎn) 胎盤 滋養(yǎng)細(xì)胞

稽留流產(chǎn)也稱過期流產(chǎn)，為一種特殊類型的自然流產(chǎn)，是指胚胎或胎兒已死亡滯留宮腔內(nèi)未能及時(shí)自然排出［1］。妊娠后孕婦體內(nèi)孕酮在8～10周主要由卵巢的妊娠黃體分泌，隨著妊娠孕周增加，胎盤逐漸形成，孕10周后主要由胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞分泌，若兩者銜接不良，則容易導(dǎo)致孕酮水平相對低下，引發(fā)稽留流產(chǎn)的發(fā)生［2，3］。涉及胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞功能，尤其是母胎界面血管新生導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞功能異常，導(dǎo)致稽留流產(chǎn)的發(fā)生亦有報(bào)道［4］。CD34能對血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行特異性染色，從而進(jìn)行微血管數(shù)目的計(jì)數(shù)，常用于有關(guān)血管新生的研究。作者進(jìn)行了稽留流產(chǎn)患者母胎界面血管新生的改變情況研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 （1）絨毛、胎盤組織：絨毛組織的選擇經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)討論通過，并征得本人同意，隨機(jī)選擇2014年4月至2015年4月在本院婦科病房就診的正常早孕及稽留流產(chǎn)孕婦（5～10周），人流術(shù)后取得相應(yīng)蛻膜及絨毛組織28例。其中正常早孕組孕婦及稽留流產(chǎn)組患者各14例。正常早孕組平均年齡（25±7）歲，平均體重（52±6）kg，平均妊娠時(shí)間（56±6）d。稽留流產(chǎn)組平均年齡（24±8）歲，平均體重（53±6）kg，平均妊娠時(shí)間（58±5）d。兩組孕婦的年齡、體重、妊娠時(shí)間等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。均排除家族遺傳病史、既往高血壓、糖尿病等病史。同時(shí)采集對應(yīng)孕婦的空腹肘靜脈血5ml，并行1500r/min離心10min，取出上清液放置-80℃冰柜中備用。絨毛及蛻膜取出后立即取壞死組織較少的部位取材，大小約0.5cm×0.5cm×0.5cm，行PBS緩沖液反復(fù)沖洗后，常規(guī)石蠟包埋切片后供免疫組化測定。（2）主要試劑：人VEGF ELISA Kit及鼠抗人CD34單克隆抗體（武漢博士德公司），SABC免疫組化試劑盒（北京中山生物技術(shù)有限公司）。

1.2 方法 （1）ELISA檢測孕婦血清中VEGF的濃度水平：按照人VEGF ELISA 試劑盒的具體操作步驟檢測孕婦血中VEGF的濃度水平。VEGF檢測靈敏度：15pg/ml。（2）常規(guī)SABC法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色：細(xì)胞膜內(nèi)有棕黃色沉淀表明染色陽性，染色程度明顯高于背景。在高倍鏡（×400）下，每張切片隨機(jī)取4個(gè)視野，行微血管數(shù)分析。將CD34染色陽性并有管腔樣結(jié)構(gòu)，同時(shí)管腔內(nèi)血細(xì)胞＜8個(gè)計(jì)入微血管范圍的標(biāo)準(zhǔn)并計(jì)數(shù)，分別由4位熟悉統(tǒng)計(jì)規(guī)則的不同工作者在同一視野下計(jì)數(shù)血管密度，將取得的平均值作為該張切片最后血管密度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，各組之間差異采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常早孕及稽留流產(chǎn)母胎界面微血管表達(dá) 常規(guī)SABC法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并取正常早孕及稽留流產(chǎn)絨毛、蛻膜行HE染色對照。血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的棕色顆粒及管腔，可考慮為新生血管的形成。正常早孕絨毛、蛻膜微血管密度依次為（22.37±2.16）個(gè)/（×400）及（26.94±3.08）個(gè)/（×400），稽留流產(chǎn)患者絨毛、蛻膜微血管密度依次為（3.24±0.12）個(gè)/ （×400）及（2.78±0.21）個(gè)/（×400），行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)：稽留流產(chǎn)孕婦蛻膜、絨毛微血管密度較早孕蛻膜及絨毛每高倍鏡下微血管密度均下降明顯（P＜0.05）。見圖1～6。

圖1 正常早孕蛻膜HE染色（×100）

圖2 正常早孕絨毛HE染色（×100）

圖3 正常早孕蛻膜微血管計(jì)數(shù)（×400）

圖4 稽留流產(chǎn)早孕蛻膜微血管計(jì)數(shù)（×400）

圖5 正常早孕絨毛微血管計(jì)數(shù)（×400）

圖6 稽留流產(chǎn)絨毛微血管計(jì)數(shù)（×400）

2.2 孕婦血清中VEGF的濃度水平 行ELISA檢測分析表明，正常早孕及稽留流產(chǎn)兩組中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）濃度依次為（100.75±9.13）及（10.36±0.49）pg/ml。與正常早孕孕婦比較，稽留流產(chǎn)患者體內(nèi)VEGF濃度下降明顯（P＜0.05）。

3 討論

隨著孕周的增加，子宮動(dòng)脈的血流量持續(xù)增加，血流阻力下降；期間主要是妊娠期子宮動(dòng)脈血流阻力進(jìn)一步減少，良好子宮胎盤循環(huán)進(jìn)一步構(gòu)建所致，期間母體血管新生相關(guān)因子可能起到重要作用。VEGF是一種特異的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，其能增加血管通透性，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長及分化的能力。VEGF作為一種與血管新生密切相關(guān)的新生因子，被認(rèn)為是最強(qiáng)大的血管生成啟動(dòng)因子，但其濃度下降時(shí)，可導(dǎo)致血管新生程度嚴(yán)重下降，影響機(jī)體創(chuàng)傷愈合、腫瘤發(fā)生及器官形成。有研究發(fā)現(xiàn)早孕胎盤絨毛中VEGF在血管生成中起作用［5］及妊娠早期胎盤血管形成在VEGF的指導(dǎo)下進(jìn)行［6］，亦有研究表明稽留流產(chǎn)中VEGF表達(dá)下降明顯［7］。

本資料中，與正常早孕孕婦比較，稽留流產(chǎn)患者體內(nèi)VEGF濃度下降明顯，并且伴母胎界面血管新生程度降低明顯。妊娠早期的VEGF主要來源于血管內(nèi)皮細(xì)胞及滋養(yǎng)細(xì)胞，胎盤局部的VEGF對內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生作用，促進(jìn)其增殖、遷移并影響其內(nèi)分泌功能，同時(shí)亦影響滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)揮侵襲功能。有研究發(fā)現(xiàn)，VEGF水平在妊娠早期上升明顯，與妊娠時(shí)間基本呈正相關(guān)，一般在16周達(dá)到高峰，于妊娠晚期下降［7］。當(dāng)孕早期血管新生欠活躍，且孕婦體內(nèi)VEGF水平較低時(shí)，滋養(yǎng)細(xì)胞功能下降，導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞分泌功能下降。母體內(nèi)孕酮等激素水平受到滋養(yǎng)細(xì)胞功能影響較大，當(dāng)滋養(yǎng)細(xì)胞分泌功能下降到一定程度時(shí)，母體孕酮水平不能有效抑制母體對胚胎的免疫耐受作用，母體排斥反應(yīng)加強(qiáng)，導(dǎo)致流產(chǎn)，而在胚胎組織為排出之前，因?yàn)榍捌谂咛ノ词艿接行阁w血供而死亡，因此臨床上常表現(xiàn)為稽留流產(chǎn)。

1 謝幸，茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué).第八版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013.49.

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浙江省衛(wèi)生廳基金（2015KYB390）；浙江省嘉興市科技局基金（2012AY1073-1，2012AY1073-5）

314051 浙江省嘉興市婦幼保健醫(yī)院婦產(chǎn)科