周璇 寇沛

血清Chemerin及IL-22水平在狼瘡性腎炎中的表達及其與疾病活動性的相關(guān)性

周璇 寇沛

目的 探討狼瘡性腎炎（LN）患者血清Chemerin及IL-22水平的表達及與疾病活動的相關(guān)性。方法 采用ELISA方法檢測30例LN患者（活動期17例，靜止期13例）和15例正常人群血清Chemerin及IL-22含量，并分析與其他相關(guān)指標(biāo)間的相關(guān)性。結(jié)果 活動期LN患者Chemerin含量（139.55±21.36）μg/L、靜止期患者（132.03±20.14）μg/L均高于健康對照組（98.60±12.25）μg/L（P＜0.01）；但活動期LN患者和靜止期患者血清Chemerin含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。活動期LN患者血清IL-22含量［（328.37±15.86）pg/ml］顯著高于靜止期患者（239.18±16.75）pg/ml（P＜0.05）；且LN患者血清IL-22含量均顯著高于正常對照組（P＜0.01）?；顒悠谘錍hemerin與ESR和疾病活動指數(shù)（SLEDAI）評分呈正相關(guān)（r=0.431，r=0.557，P＜0.05）；與補體C3呈負(fù)相關(guān)（r=-0.473，P＜0.05）；IL-22水平與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)（r=0.381，P＜0.05；r=0.658，P＜0.01）。結(jié)論 狼瘡性腎炎患者血清Chemerin及IL-22水平增高，且與疾病的活動度有關(guān)，并可作為監(jiān)測疾病嚴(yán)重程度和藥物療效的生物指標(biāo)。

Chemerin IL-22 狼瘡性腎炎

狼瘡性腎炎（LN）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）累及腎臟所引起的一種免疫復(fù)合物性腎炎。Chemerin是一種脂肪細胞因子，通過與受體ChemR23結(jié)合對樹突細胞和巨噬細胞發(fā)揮免疫趨化作用［1］。其與炎癥標(biāo)記物如超敏C反應(yīng)蛋白、IL-6及TNF-α等密切相關(guān)［2，3］。在多種自身免疫炎癥性疾病存在Chemerin的異常表達［4，5］。IL-22是IL-10細胞因子家族成員之一，其異常表達可見于多種疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。研究發(fā)現(xiàn)，IL-22基因拷貝數(shù)突變是SLE發(fā)病的危險因子［6］。作者通過檢測LN患者與正常人群外周血中Chemerin和IL-22水平，分析兩者與LN臨床及血清學(xué)指標(biāo)以及疾病活動指數(shù)的相關(guān)性，探討兩者在LN發(fā)病中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2013年6月至2015年5月武漢市第一醫(yī)院及武漢總醫(yī)院住院及門診LN患者30例，均符合1982年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ARA）修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，均持續(xù)性蛋白尿＞0.5g/24h，鏡下血尿、管型尿和（或）腎功能衰竭。所有患者在B超引導(dǎo)下行經(jīng)皮腎穿刺活檢。其中男10例，女20例，平均年齡28.9歲。所有LN患者按Bombardier等SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI），分為活動期17例、靜止期13例。所有患者近＜4周未服用糖皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑和血管擴張劑類藥物，無感染表現(xiàn)。同期健康體檢者15例為對照組，其中男6例，女9例；平均年齡27.8歲。

1.2 方法 （1）標(biāo)本采集：收集LN患者24h尿液，記錄其體積并留取10ml，同時空腹采集靜脈血5ml，2500r/min，離心5min，留取尿液上清液和分離血清，置-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。?）血清Chemerin檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清Chemerin。人Chemerin試劑盒購自美國RayBiotech公司，操作嚴(yán)格按照說明書進行。分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測樣品孔。加樣，將待測樣品各100μl依次加入96孔板中，用封板膜封板后置37℃溫育2.5h。每孔加滿洗滌液洗滌，靜置30s后棄去，每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。用封板膜封板后置37℃溫育1h。再次洗滌，然后每孔加入顯色劑A100μl，室溫下反應(yīng)45min后再加入顯色劑B100μl，室溫下反應(yīng)30min。每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀（450nm）測量各孔的吸光度（OD值）。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品濃度。（3）IL-22水平檢測：采用ELISA檢測血清IL-22。IL-22試劑盒由北京易科攀博公司提供，操作步驟嚴(yán)格按說明書進行。顯色后即刻用酶標(biāo)儀450nm波長檢測OD值。（4）臨床相關(guān)指標(biāo)檢測： 采用全自動生化分析儀檢測24h尿蛋白、血清肌酐（Cr），血清補體C3采用單向免疫擴散法，ESR采用魏氏法測定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用方差分析，相關(guān)分析采用spearman檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LN患者活動期和靜止期血清Chemerin和IL-22水平 活動期LN患者Chemerin含量（139.55±21.36）μg/L、靜止期患者（132.03±20.14）μg/L均高于健康對照組（98.60±12.25）μg/L（P＜0.05）；但活動期LN患者和靜止期患者血清Chemerin含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）?；顒悠贚N患者血清IL-22含量（328.37±15.86）pg/ml顯著高于靜止期患者（239.18±16.75）pg/ml（P＜0.05）；且LN患者血清IL-22含量均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。見表1。

表1 LN患者及正常對照組血清Chemerin和IL-22水平比較（±s）

表1 LN患者及正常對照組血清Chemerin和IL-22水平比較（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.01；與靜止期比較，#P＜0.05

組別nChemerin（μg/L）IL-22（pg/ml）LN組活動期17139.55±21.36*328.37±15.86*# LN組靜止期13132.03±20.14*239.18±16.75*正常對照組1598.60±12.25156.29±11.28

2.2 LN各期患者實驗室指標(biāo)的比較 LN活動期患者ESR和補體C3、SLEDAI評分與靜止期比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），血Cr、24h尿蛋白比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 LN患者各組臨床與實驗室指標(biāo)的比較（±s）

表2 LN患者各組臨床與實驗室指標(biāo)的比較（±s）

參數(shù)LN活動期組LN靜止期組P值年齡（歲）29.3±3.728.1±2.90.175 ESR（mm/h）69.45±27.3235.24±16.610.001補體C3（g/L）62.12±51.24119.42±47.530.001 Cr（μmol/L）202.13±67.38186.36±53.220.236 24h尿蛋白（g/24h）2.126±0.5572.045±0.8120.103 SLEDAI評分11.8±2.91.9±1.370.001

2.3 血清Chemerin和IL-22水平與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性 活動期血清Chemerin與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)（r=0.431，r=0.557，P＜0.05）；與補體C3呈負(fù)相關(guān)（r=-0.473，P＜0.05）；與血Cr、24h尿蛋白無相關(guān)性；活動期IL-22水平與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)（r=0.381，P＜0.05；r=0.658，P＜0.01）；與Cr、24h尿蛋白、補體C3均無相關(guān)。見表2。

表3 活動期LN患者血清Chemerin和IL-22水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

Chemerin是新發(fā)現(xiàn)的脂肪細胞因子。2003年Wittamer等［7］從卵巢癌患者的腹腔積液中純化出來，并被證明是G蛋白耦聯(lián)受體ChemR23的天然配體。研究證實Chemerin通過其受體ChemR23發(fā)揮對專職抗原提呈細胞（樹突狀細胞和巨噬細胞）的募集和遷移作用，參與組織免疫和炎癥應(yīng)答。當(dāng)機體受到損傷、炎癥侵襲時，多種蛋白酶可使前體Chemerin活化，與ChemR23特異性結(jié)合，促使巨噬細胞和未成熟的樹突狀細胞到達炎癥部位［1］。Berg等［2］研究發(fā)現(xiàn)，Chemerin受刺激后可進一步擴增炎癥信號，導(dǎo)致炎癥因子和基質(zhì)金屬蛋白酶的釋放。Chemerin可能在天然免疫與獲得免疫的聯(lián)系中起到橋梁作用。

近年來對Chemerin的研究多集中于糖尿病、代謝綜合征、動脈粥樣硬化等疾病，而在一些自身免疫性疾病則研究較少。研究發(fā)現(xiàn)在銀屑病及系統(tǒng)性紅斑狼瘡皮膚受累患者皮損處的真皮層可見Chemerin的高表達［8，9］，在狼瘡腎炎患者的腎組織管狀上皮細胞及淋巴管內(nèi)皮細胞周圍Chemerin表達增高［10］。作者通過酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測Chemerin在LN患者及正常人外周血中的表達情況，結(jié)果顯示LN患者外周血中Chemerin的濃度顯著高于正常對照組，提示Chemerin參與LN發(fā)病。LN活動期外周血Chemerin水平高于靜止期，提示外周血Chemerin表達水平與病情活動相關(guān)。ESR是臨床最常用的評價病情活動的炎癥指標(biāo)。SLEDAI評分是評估SLE病情活動和嚴(yán)重性的國際通用標(biāo)準(zhǔn)之一。其能較好的反映SLE疾病的病情程度。補體C3在SLE疾病中降低，與SLE病情活動存在相關(guān)性，可作為監(jiān)測疾病活動的參考指標(biāo)。本資料顯示，LN患者外周血中Chemerin水平與ESR、SLEDAI評分呈正相關(guān)，與補體C3呈負(fù)相關(guān)。故LN患者外周血中Chemerin表達水平與炎癥指標(biāo)及LN病情活動程度密切相關(guān)，可作為評價LN病情活動的一個指標(biāo)。

IL-22是T細胞自分泌和旁分泌的細胞因子，參與多種自身免疫性疾病，和腫瘤的免疫耐受有關(guān)，如銀屑病，炎癥性腸病等［11］。IL-22分泌過多，可以使B細胞自發(fā)性過度興奮，從而直接導(dǎo)致由漿細胞產(chǎn)生的自身抗體增多，循環(huán)免疫復(fù)合物堆積，引起組織和器官損傷，這在SLE發(fā)病機制中可能起重要作用。

研究報道，在SLE患者血清中IL-22的水平顯著低于正常人［12］，Cheng等［13］認(rèn)為IL-22水平與SLEDAI評分呈正相關(guān)。Qin等［14］研究發(fā)現(xiàn)分泌IL-22的CD4+T細胞的數(shù)量與SLE患者SLEDAI評分呈顯著正相關(guān)。而Pan等［15］認(rèn)為活動期SLE患者與非活動期SLE患者間IL-22水平無差異，IL-22水平與SLEDAI評分無相關(guān)性。目前研究認(rèn)為SLE患者外周血IL-22水平下降，但IL-22與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的活動性關(guān)聯(lián)仍存在爭議。因此IL-22是否參與SLE發(fā)病，其在SLE受損組織中局部表達如何，目前并不清楚。本資料顯示，活動期LN患者血清IL-22含量顯著高于靜止期患者，且LN患者血清IL-22含量均顯著高于正常對照組。活動期IL-22水平與ESR和SLEDAI評分呈正相關(guān)，與Cr、24h尿蛋白、補體C3均無相關(guān)。趙令等［16］研究認(rèn)為，與健康對照組比較，SLE患者血漿中IL-17和IL-22的表達水平明顯升高（P＜0.05）；SLE患者IL-22+CD4+T和IL-22-Th17細胞的比例隨SLEDAI的升高而升高。這些研究結(jié)果提示細胞因子IL-22可能在SLE的發(fā)病中起致病性作用，并可作為監(jiān)測疾病嚴(yán)重程度的生物指標(biāo)。

總之，LN患者外周血Chemerin和IL-22水平較正常對照人群明顯增高，且與炎癥指標(biāo)和疾病活動度明顯相關(guān)，提示Chemerin和IL-22在LN發(fā)病中起重要的作用。

1 敖雪，蘇雨江.Chemerind的研究進展.海南醫(yī)學(xué)，2014，25（2）：221～224.

2 Berg V， Sveinbj?rnsson B， Bendiksen S， et al. Human articular chondrocytes express ChemR23 and chemerin，ChemR23 promotes inflammatory signalling upon binding the ligand chemerin （21-157）. Arthritis Res Ther，2010，12（6）：R228.

3 Chu SH， Lee MK， Ahn KY，et al.Chemerin and adiponectin contribute reciprocally to metabolic syndrome. PLoS One，2012，7（4）：e34710.

4 Akamata K， Asano Y， Taniguchi T， et al. Increased expression of chemerin in endothelial cells due to Fli1 deficiency may contribute to the development of digital ulcers in systemic sclerosis. Rheumatology （Oxford），2015，54（7）：1308～1316.

5 Mariani F， Roncucci L. Chemerin/chemR23 axis in inflammation onset and resolution. Inflamm Res，2015，64（2）：85～95.

6 Yu B， Guan M， Peng Y，et al.Copy number variations of interleukin-17F， interleukin-21， and interleukin-22 are associated with systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum，2011，63（11）： 3487～3492.

7 Wittamer V，F(xiàn)ranssen JD，Vulcano M，et al.Specific recruitment of antigen-presenting cells by chemerin，a novel processed ligand from human inflammary fluids.J Exp Med，2003，198（7）：977～ 985.

8 Albanesi C， Scarponi C， Pallotta S， et al.Chemerin expression marks early psoriatic skin lesions and correlates with plasmacytoid dendritic cell recruitment. J Exp Med. 2009，206（1）：249～258.

9 Vermi W， Lonardi S， Morassi M， et al. Cutaneous distribution of plasmacytoid dendritic cells in lupus erythematosus. Selective tropism at the site of epithelial apoptotic damage. Immunobiology， 2009，214（9-10）：877～886.

10 De Palma GI， Castellano G， Del Prete A，et al. The possible role of ChemR23/Chemerin axis in the recruitment of dendritic cells in lupus nephritis. Kidney Int，2011，79（11）：1228～1235.

11 竇長信，沈霞，張勇.IL-22在自身免疫病中作用的研究進展.國際免疫學(xué)雜志，2013，36（4）： 256～258.

12 Lin J， Yue LH， Chen WQ.Decreased plasma IL-22 levels and correlations with IL-22- producing T helper cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus. Scand J Immunol，2014，79（2）：131～136.

13 Cheng F， Guo Z， Xu H， et al.Decreased plasma IL22 levels， but not increased IL17 and IL23 levels， correlate with disease activity in patients with systemic lupus erythematosus. Ann Rheum Dis， 2009，68（4）：604～606.

14 Qin WZ， Chen LL， Pan HF， et al.Expressions of IL-22 in circulating CD4+/CD8+T cells and their correlation with disease activity in SLE patients. Clin Exp Med，2011，11（4）：245～250.

15 Pan HF， Zhao XF， Yuan H， et al. Decreased serum IL-22 levels in patients with systemic lupus erythematosus. Clin Chim Acta， 2009，401（1-2）：179～180.

16 趙令，馬寧，劉濤，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血輔助性T細胞亞型和細胞因子的檢測及其臨床意義.吉林大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2014，40（2）：399～403.

Objective To investigate the relationship between level of serum Chemerin and IL-22 and disease activity in lupus nephritis patients. Methods 30 patients with lupus nephritis were enrolled in the study（active stage 17 cases，resting stage 13 cases），and 15 healthy individuals as a normal control. Chemerin and IL-22 levels in serum were examined with enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. And their relations to other related indicators at different stages were studied. Results Serum Chemerin level in active patients with LN（139.55±21.36）μg/L and resting patients（132.03±20.14）μg/Lwere signifi cantly higher than that of healthy controls（98.60±12.25）μg/L（P＜0.05），but there was no difference in active stage and resting stage（P＞0.05）. serum IL-22 level in active patients with LN（328.37±15.86）pg/mL was signifi cantly higher than that of resting patients（239.18±16.75）pg/mL（P＜0.05），and serum IL-22 level in patients with LN was signifi cantly higher than that of healthy controls（P＜0.01）；The level of serum Chemerin in active patients with LN was positively correlated with ESR and SLEDA score（r=0.431，r=0.557，P＜0.05），and were negatively correlated with C3 levels（r=-0.473，P＜0.05）.The level of serum IL-22 in active patients with LN were positively correlated with ESR and SLEDA score（r=0.381，P＜0.05；r=0.658，P＜0.01）.Conclusion The levels of serum Chemerin and IL-22 expression in patients with LN are high，and positively correlated with disease activity，and can be used as a monitoring disease severity and effi cacy of biological indicators.

Chemerin IL-22 lupus nephritis

·診治分析·

430070 廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院（周璇）

430033 湖北省武漢市第一醫(yī)院（寇沛）