劉潤強,王清峻,曹前輝

(1.河南科技學院 資源與環(huán)境學院, 河南新鄉(xiāng)　453003；2.河南淇林園林科技有限公司,鄭州　450045；3.河南省輝縣農(nóng)業(yè)局， 河南輝縣　453600)

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胺苯吡菌酮和葉菌唑混配對5種花卉病菌的聯(lián)合毒力研究

劉潤強1,王清峻2,曹前輝3

(1.河南科技學院 資源與環(huán)境學院, 河南新鄉(xiāng)453003；2.河南淇林園林科技有限公司,鄭州450045；3.河南省輝縣農(nóng)業(yè)局， 河南輝縣453600)

為尋求防治花卉病害的高效、低毒殺菌劑，采用室內(nèi)毒力測定方法，以玫瑰銹病菌、文竹葉斑病菌、郁金香灰霉病菌、菊花褐斑病菌和茶花炭疽病菌為測試菌株，研究胺苯吡菌酮和葉菌唑混配對5種花卉病害的聯(lián)合毒力作用。結(jié)果顯示：當葉菌唑和胺苯吡菌酮的混配比例為5∶1時，對玫瑰銹病菌的共毒系數(shù)為188.16；混配比例為10∶1時，對文竹葉斑病菌的共毒系數(shù)為198.07；混配比例為1∶1時，對郁金香灰霉病菌的共毒系數(shù)為190.29,對菊花褐斑病菌的共毒系數(shù)為192.55；混配比例為3∶1時，對茶花炭疽病菌的共毒系數(shù)為200.04。表明胺苯吡菌酮和葉菌唑按適當比例混配對此5種花卉病原菌菌絲和孢子具有明顯抑制作用。

胺苯吡菌酮；葉菌唑；玫瑰銹病菌；文竹葉斑病菌；郁金香灰霉病菌；菊花褐斑病菌；茶花炭疽病菌；聯(lián)合毒力

隨著經(jīng)濟的發(fā)展，環(huán)境綠化、美化的進程加快，對以觀賞為目的的花卉需求量日益增大，花卉生產(chǎn)已經(jīng)形成產(chǎn)業(yè)，遍布大江南北。然而花卉作為一種觀賞產(chǎn)品，一旦感染病害，嚴重影響花卉的產(chǎn)量和商品價值，易造成較大的經(jīng)濟損失。目前，對于花卉病害的防治主要采取“預防為主、防治為輔”，而防治時大多以化學藥劑為主[1-2]。而今國內(nèi)用于防治花卉病害的化學藥劑較少，絕大多數(shù)為單劑，且很大部分效果并不理想，有部分藥劑已經(jīng)產(chǎn)生了很強的抗藥性[3]。選擇高效低毒廣譜的殺菌劑已成花卉種植的當務之急。

胺苯吡菌酮(Fenpyrazamine，CAS號473798-59-3)是日本住友化學株式會社研發(fā)的吡啶雜環(huán)類新型殺菌劑，具有新穎化學結(jié)構(gòu)，能迅速滲入作物體內(nèi)，對感染的真菌能快速發(fā)揮藥效，試驗表明胺苯吡菌酮對核盤菌、鏈核盤菌和假尾孢菌等均表現(xiàn)高活性[4]。主要用于防治保護地作物的灰霉病[5]。其作用機制是抑制真菌麥角甾醇生物合成，可抑制菌絲生長、孢子萌發(fā)和花粉管生長。另外，胺苯吡菌酮對哺乳類動物安全，在環(huán)境中能迅速降解，可在多種作物采收前應用[6]。葉菌唑(Metconazole，CAS號125116-23-6)是20世紀90年代開發(fā)的一種三唑類殺菌劑，作用機制是抑制麥角甾醇生物合成中C-14脫甲基化酶細胞色素P45014DM，導致麥角甾醇明顯減少并引起24-亞甲基二羥基羊毛甾醇的積累，使菌體細胞膜功能受到破壞而發(fā)揮作用，具有保護、治療和鏟除作用[7-8]。雖然作用機制與其他三唑類殺菌劑一樣，但活性譜差別較大，被廣泛用于由子囊菌、擔子菌、半知菌等真菌引起的多種真菌病害的防治，且活性極佳，田間施用對谷類作物殼針孢、鐮孢霉和柄銹菌植病有卓越效果，同傳統(tǒng)殺菌劑相比，劑量極低但防治植物病害范圍卻很廣[9-10]。

實踐證明，化學農(nóng)藥單劑的長期使用極易出現(xiàn)抗性問題，導致用量不斷加大，抗藥性風險增加，不利于環(huán)境生態(tài)安全。尋求科學、合理的農(nóng)藥復配，是解決這一問題較好的辦法。將胺苯吡菌酮和葉菌唑進行復配，達到協(xié)同增效的作用，提高胺苯吡菌酮和葉菌唑的應用范圍和對不同病原菌的防治效力。本試驗測定這2種藥劑混配對玫瑰銹病菌等5種花卉病菌的聯(lián)合毒力，旨在明確兩者不同比例混配對5種常見花卉病原菌的增效作用，篩選出最佳配比，為2種藥劑在花卉上的實際混配應用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1供試藥劑

胺苯吡菌酮(Fenpyrazamine，標準品)，由成都思天德生物科技有限公司提供； 95% 葉菌唑原藥(Metconazole，技術(shù)級原藥)，由遼寧春華藥業(yè)科技股份有限公司提供。

1.2供試菌株

玫瑰銹病菌[Phragmidiummucronatum(Pers.) Schl.]、文竹葉斑菌(RamulariaasparagiZ.Y. Zhang et W.Q. Chen)、郁金香灰霉病菌(BotrytistulipaeLind)、菊花褐斑病菌(Septoriachrysan-themiindiciBubak et Kabat)和茶花炭疽病菌(Camelliajapoica)均由河南科技學院植物病理實驗室采集、分離、鑒定并提供。

1.3試驗方法

1.3.1單劑抑制作用測定文竹葉斑病菌、郁金香灰霉病菌、菊花褐斑病菌和茶花炭疽病菌參照《農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準則 NY/T 1156.2-2006》[11]，采用含藥培養(yǎng)基生長速率法進行測定。試驗前，菌株在PDA平板培養(yǎng)基中，置于20～25 ℃條件下培養(yǎng)24 h活化，然后轉(zhuǎn)移菌種于斜面培養(yǎng)基上，4 ℃保存?zhèn)溆谩４_定胺苯吡菌酮和葉菌唑原藥藥劑的最低抑制質(zhì)量濃度(Minimal Inhibitory Concentration, MIC)。以MIC為依據(jù)將胺苯吡菌酮和葉菌唑原藥的乙醇水溶液(體積比為3∶7)配置的母液用無菌水分別配成0.10、0.20、0.40、0.80、1.60、3.20、6.40、12.80 mg/L系列質(zhì)量濃度梯度，向直徑為90 mm滅菌后的培養(yǎng)皿內(nèi)注入1 mL上述不同質(zhì)量濃度梯度的待測藥液，倒入融化好的(55～65 ℃)PDA 培養(yǎng)基5 mL，混勻，制成含藥平板培養(yǎng)基，對照只加等量的無菌水。每個處理重復3次。待平培養(yǎng)基冷凝后于培養(yǎng)基平面接種直徑為5 mm 的菌絲餅，置于25 ℃條件下恒溫培養(yǎng)6～10 d，用十字交叉法測量菌落直徑，計算殺菌劑對病菌菌絲生長的抑制率[12]。抑制率公式為：抑制率=[(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/對照菌落直徑]×100%。由處理質(zhì)量濃度的對數(shù)值和相應的抑制幾率值求出毒力回歸方程，并求出抑制中質(zhì)量濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)(r)，以上計算是用SAS 6.12統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析完成。

玫瑰銹病菌采用孢子萌發(fā)法[13]：以胺苯吡菌酮和葉菌唑原藥藥劑的MIC為參考，分別配置成0.10 mg/L至12.80 mg/L的8個系列濃度梯度，將藥劑按質(zhì)量濃度溶解在PDA培養(yǎng)基中，在載玻片上制成厚度約3 mm的薄片，選取玫瑰銹病發(fā)病葉片上24 h內(nèi)產(chǎn)生的銹菌新鮮夏孢子抖落在載玻片上，然后放入鋪有3層濕吸水紙的直徑90 mm的培養(yǎng)皿中，蓋上皿蓋，于20 ℃溫箱中培養(yǎng)。每處理重復3次，以無菌水為對照。48 h顯微鏡下調(diào)查孢子萌發(fā)情況，每個處理調(diào)查3個視野，記錄孢子萌發(fā)數(shù)和孢子總數(shù)，每重復調(diào)查孢子數(shù)不少于300個，計算抑制孢子率。[抑制孢子率=(夏孢子萌發(fā)數(shù)/調(diào)查孢子總數(shù))×100%]、校正抑制率，由處理質(zhì)量濃度的對數(shù)值和相應的抑制幾率值求出毒力回歸方程，抑制中質(zhì)量濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)(r)。

1.3.2混劑聯(lián)合毒力測定根據(jù)單劑毒力測定結(jié)果，以單劑胺苯吡菌酮和葉菌唑的有效中濃度EC50為基礎(chǔ)，按質(zhì)量配比進行藥劑配制：對玫瑰銹病的配比為1∶15、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1、15∶1；對文竹葉斑病菌的配比為1∶20、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1、20∶1；對蘋果腐爛病菌的配比為1∶10、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1、10∶1；對郁金香灰霉病的配比為1∶18、1∶12、1∶6、1∶1、6∶1、12∶1、18∶1；對菊花褐斑病的配比為1∶10、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1、10∶1?；旌纤巹┑馁|(zhì)量濃度梯度設(shè)定為0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mg/L。按單劑室內(nèi)毒力測定方法進行測定并求出毒力回歸曲線、EC50值及相關(guān)系數(shù)(r)。根據(jù)單劑和混劑的EC50值和Sun等[14]的共毒系數(shù)法(co-toxicity coefficient，CTC)評價藥劑混用的增效作用和最佳配比，即CTC≤80為拮抗作用，80

2　結(jié)果與分析

2.1胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復配對玫瑰銹病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對玫瑰銹病菌的毒力測定結(jié)果見表1。由表1可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對玫瑰銹病菌的EC50分別為0.14 mg/L和0.662 mg/L。當以1∶15、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1、和15∶1比例進行混配，其對玫瑰銹病菌均表現(xiàn)增效作用，其中當葉菌唑∶胺苯吡菌酮=5∶1時，共毒系數(shù)最大為188.16，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以5∶1 的比例混合使用時對玫瑰銹病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對玫瑰銹病的防治以1∶15～5∶1復配較好。

表1　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復配對玫瑰銹病菌的毒力

2.2胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復配對文竹葉斑病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對文竹葉斑病菌的毒力測定結(jié)果見表2。由表2可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對文竹葉斑病菌的EC50分別為0.67 mg/L和3.36 mg/L。當以1∶20、1∶10、1∶5、1∶1、5∶1、10∶1和20∶1 的比例進行混配，其對文竹葉斑病菌均表現(xiàn)增效作用，其中當葉菌唑∶胺苯吡菌酮=10∶1時，共毒系數(shù)最大為198.07，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以10∶1的比例混合使用時對文竹葉斑病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對文竹葉斑病的防治以1∶10～10∶1復配較好。

2.3胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復配對郁金香灰霉病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對郁金香灰霉病菌的毒力測定結(jié)果見表3。由表3可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對郁金香灰霉病菌的EC50分別為0.47 mg/L和0.19 mg/L。當以1∶18、1∶12、1∶6、1∶1、6∶1、12∶1和18∶1的比例進行混配，其中當葉菌唑∶胺苯吡菌酮=1∶6時，共毒系數(shù)最大為190.29。表明，葉菌唑∶胺苯吡菌酮以1∶6的比例混合使用時對郁金香灰霉病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對郁金香灰霉病的防治以1∶12～6∶1復配較好。

2.4胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復配對菊花褐斑病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對菊花褐斑病菌的毒力測定結(jié)果見表4。由表4可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對菊花褐斑病菌的EC50分別為0.23 mg/L和0.75 mg/L。當以1∶9、1∶3、1∶3、1∶1、3∶1、6∶1和9∶1的比例進行混配，其對菊花褐斑病菌表現(xiàn)增效作用，其中當葉菌唑∶胺苯吡菌酮=1∶1時，共毒系數(shù)最大為192.55，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以1∶1的比例混合使用時對菊花褐斑病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對菊花褐斑病的防治以1∶3～6∶1復配較好。

表2　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復配對文竹葉斑病菌的毒力

表3　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復配對郁金香灰霉病菌的毒力

2.5胺苯吡菌酮和葉菌唑單劑及復配對茶花炭疽病菌的毒力

葉菌唑、胺苯吡菌酮及其二者不同比例的混配組合對茶花炭疽病菌的毒力測定結(jié)果見表5。由表5可知，葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑對茶花炭疽病菌的EC50分別為0.55 mg/L和1.71 mg/L。當以10∶1、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1和10∶1比例進行混配，其對茶花炭疽病菌表現(xiàn)增效作用，其中當葉菌唑∶胺苯唑菌酮=3∶1時，共毒系數(shù)最大為200.04，表明葉菌唑∶胺苯吡菌酮以3∶1的比例混合使用時對茶花炭疽病菌的增效作用最明顯。綜合考慮，葉菌唑與胺苯吡菌酮對茶花炭疽病的防治以1∶5～10∶1復配較好。

3　小結(jié)與討論

栽培花卉由于人工栽培環(huán)境條件與其自然生長環(huán)境有區(qū)別，使得其在生理上和外部形態(tài)上會發(fā)生一定的變化，極易感染許多病害。其中絕大部分病害是由真菌引起的，約占花卉病害種類的70%～80%[15]。簡單地采取單一的藥劑防治方法難以取得滿意的效果。因此，花卉的病害防治必須堅持“防重于治”的方針，發(fā)揮綜合防治效能，將病害控制在花卉觀賞價值允許的水平以內(nèi)。目前，花卉生產(chǎn)上防治其病害的藥劑以甲基硫菌靈、百菌清、代森錳鋅等為主，長年的使用已經(jīng)出現(xiàn)了抗藥性[16]。胺苯吡菌酮和葉菌唑為新型廣譜型藥劑，都能以葉面噴灑方式施藥，且在環(huán)境中能迅速降解，土壤滲瀝性均較小，對哺乳動物毒性小等特點，特別適合在室內(nèi)溫室花卉的種植中使用[17]。雖然二者作用機制相似，但是并不完全相同，葉菌唑施用后內(nèi)吸輸導性不強，其除導致麥角甾醇明顯減少并使菌體細胞膜功能受到破壞外，還能抑制或干擾菌體附著胞及吸器的發(fā)育、菌絲和孢子的形成，還可致使膜滲漏加劇，從而降低病原菌致病力[18]。而胺苯吡菌酮具有良好的內(nèi)吸傳導性，不僅能降低病害的發(fā)病嚴重度，同時還能降低病菌毒素污染，促進植物轉(zhuǎn)青及增產(chǎn)增收的功效。本研究表明胺苯吡菌酮和葉菌唑按適當比例混配對5種不同花卉病原菌都具有明顯的協(xié)同增效作用，可以達到降低農(nóng)藥用量、擴大殺菌譜、提高防治效果和治理抗藥性的目標，有進一步在花卉上使用研究和推廣的價值。但其藥劑組合協(xié)同增效作用的機制和田間實際防治效果，還有待進一步深入研究。

表4　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復配對菊花褐斑病菌的毒力

表5　葉菌唑與胺苯吡菌酮單劑及復配對茶花炭疽病菌的毒力

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(責任編輯：潘學燕Responsible editor:PAN Xueyan)

Studies on Co-toxicity of Fenpyrazamine/Metconazole Complex against Five Species Diseases in Flower

LIU Runqiang1, WANG Qingjun2and CAO Qianhui3

(1.College of Resources and Environment, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang Henan 453003, China;2.Henan Qilin Garden Technology Co. Ltd., Zhengzhou450045, China; 3.Huixian Agricultural Bureau of Henan Province,Huixian Henan 453600,China)

In order to seek high efficiency and low toxicity fungicide for preventing and controlling the diseases in flowers.The co-toxicity of fenpyrazamine,metconazole and its mixture against rust germs rose,the plaque bacteria Zhuyeshan, tulip gray country bacteria,daisy-chained speckle disease and daisy-chained speckle disease were studied. The co-toxicity of fenpyrazamine/metconazole complex against five species diseases in flowers was studied based on combination toxicity. Bioassay results showed that the co-toxicity cofficient (CTC) against mycelial growth of rust germs rose were 188.16 when ratio of the mixture of fenpyrazamine and metconazole was 5∶1；the CTC against mycelial growth of plaque bacteria Zhuyeshan was 198.07 when the ratio of the mixture was 10∶1; the CTC against mycelial growth of tulip gray country bacteria and daisy-chained speckle disease were 190.29 and 192.55 respectively when the ratio of the mixture was 1∶1 ; CTC against mycelial growth of daisy-chained speckle disease was 200.04 when the ratio of the mixture was 3∶1.The results suggested that fenpyrazamine and metconazole had significant inhibited activity against hyphae and spores of 5 species diseases in flower when mixtures of appropriate ratio were used.

Fenpyrazamine; Metconazole; Rust germs rose;Plaque bacteria Zhuyeshan;Tulip gray country bacteria;Daisy-chained speckle disease;Daisy-chained speckle disease; Co-toxicity

2016-02-24Returned2016-04-20

Project for Introducing Talents of Henan Institute of Science and Technology(No. 103010615001); Postdoctoral Fund Project of Henan Province(No.159831).

LIU Runqiang,male,lecturer,Ph.D,master supervisor.Research area:pesticide compound and pesticide residue analysis and testing research.E-mail:liurunqiang1983@126.com

2016-02-24

2016-04-20

河南科技學院高層次人才引進啟動項目(103010615001)；河南省博士后基金(159831)。

劉潤強，男，講師，博士，碩士生導師，主要從事農(nóng)藥復配及農(nóng)藥殘留分析檢測研究。E-mail：liurunqiang1983@126.com

S436.67

A

1004-1389(2016)08-1237-07

網(wǎng)絡出版日期：2016-07-14

網(wǎng)絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20160714.1105.036.html