熊學(xué)華，鄧健平，呂明學(xué)，曾春，唐爽，蔣永明

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CHOP在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和意義

熊學(xué)華1，鄧健平2，呂明學(xué)1，曾春1，唐爽1，蔣永明1

目的：檢測(cè)CHOP在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，探討其臨床價(jià)值及意義。方法：選取手術(shù)切除的人腦膠質(zhì)瘤病理標(biāo)本85例為膠質(zhì)瘤組，Ⅰ級(jí)18例，Ⅱ級(jí)25例，Ⅲ級(jí)22例，Ⅳ級(jí)20例，低分級(jí)膠質(zhì)瘤（Ⅰ級(jí)+Ⅱ級(jí)）43例，高分級(jí)膠質(zhì)瘤（Ⅲ級(jí)+Ⅳ級(jí)）42例。另選擇顱腦外傷后行顱內(nèi)減壓患者的手術(shù)切除正常腦組織80例為對(duì)照組，按照免疫組化S-P法，檢測(cè)CHOP在正常腦組織以及不同級(jí)別人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)情況。結(jié)果：CHOP在對(duì)照組正常腦組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為8.75%（7/80），在膠質(zhì)瘤組中的陽(yáng)性表達(dá)率為64.71%（55/85），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CHOP在低分級(jí)膠質(zhì)瘤陽(yáng)性表達(dá)51.16%（22/43），明顯低于高分級(jí)膠質(zhì)瘤陽(yáng)性表達(dá)76.19%（32/42）（P＜0.05）。結(jié)論：CHOP在正常腦組織中低表達(dá)，在腦膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，在高分級(jí)腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)較低分級(jí)中的表達(dá)明顯增強(qiáng)。

CHOP；腦膠質(zhì)瘤；表達(dá)

腦膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)外胚層腫瘤，在顱腦腫瘤中發(fā)病率最高，約占全部腦腫瘤的40%～50%，且有逐年增多的趨勢(shì)[1]。因其生長(zhǎng)迅速，且易侵襲轉(zhuǎn)移，給治療帶來(lái)很大的困難。外科切除仍是臨床治療腦膠質(zhì)瘤的最主要手段，放療、化療及生物治療的綜合運(yùn)用，對(duì)腦膠質(zhì)瘤的治療在一定程度上有所改善，但總體預(yù)后仍然較差。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞中重要的細(xì)胞器之一，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)生理功能在氧化應(yīng)激、缺血損傷、內(nèi)環(huán)境紊亂等情況下發(fā)生功能紊亂的一種病理狀態(tài)，是機(jī)體自我防御的一種機(jī)制。研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過(guò)度應(yīng)激將導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，ERS是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)胞凋亡途徑。ERS的發(fā)現(xiàn)為控制腦膠質(zhì)瘤的增殖找到了一種新的途徑，為治療腦膠質(zhì)瘤帶來(lái)了曙光。本文通過(guò)研究ERS下C/EBP同源蛋白（C/EBP-homologous protein，CHOP）在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，為臨床治療腦膠質(zhì)瘤提供理論依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2010年2月至2014年1月我科手術(shù)切除的人腦膠質(zhì)瘤病理石蠟標(biāo)本85例為膠質(zhì)瘤組，男44例，女41例；年齡12～74歲，平均46.56歲。所有石蠟標(biāo)本重新切片，HE染色后由經(jīng)驗(yàn)豐富的兩位病理科醫(yī)生行雙盲鏡檢讀片，按WHO制定的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)（2000版），對(duì)標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)及病理學(xué)分級(jí)，其中Ⅰ級(jí)18例，Ⅱ級(jí)25例，Ⅲ級(jí)22例，Ⅳ級(jí)20例，低分級(jí)膠質(zhì)瘤（Ⅰ級(jí)+Ⅱ級(jí)）43例，高分級(jí)膠質(zhì)瘤（Ⅲ級(jí)+Ⅳ級(jí)）41例。另選擇顱腦外傷后行顱內(nèi)減壓患者的手術(shù)切除腦組織80例為對(duì)照組，男48例，女32例；年齡17～65歲，平均41.25歲；選擇無(wú)膠質(zhì)細(xì)胞增生、無(wú)細(xì)胞壞死及水腫的組織進(jìn)行切片。2組年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0. 05）。

1.2方法

1.2.1免疫組化 將2組石蠟切片標(biāo)本，采用免疫組化SP法，切片常規(guī)脫蠟脫水，微波進(jìn)行抗原修復(fù)，過(guò)氧化物酶室溫作用封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴加血清封閉，滴加適當(dāng)稀釋的兔抗人一抗（CHOP，工作濃度1∶100），濕盒孵育，4℃過(guò)夜，滴加HRP標(biāo)記山羊抗兔二抗，37℃恒溫箱孵育30 min，蒸餾水洗滌后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水、透明、中性樹(shù)脂封片，顯微鏡觀察。

1.2.2結(jié)果判別CHOP陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞或細(xì)胞核呈棕黃色或棕褐色。采用半定量記數(shù)方法計(jì)算結(jié)果。觀察組織切片免疫組化結(jié)果，根據(jù)其染色細(xì)胞的著色強(qiáng)度及密度進(jìn)行綜合評(píng)分。著色強(qiáng)度：未見(jiàn)細(xì)胞著色計(jì)0分，細(xì)胞著色為淡黃色計(jì)1分，細(xì)胞著色為棕黃色計(jì)2分，細(xì)胞著色為棕褐色計(jì)3分。著色密度（高倍鏡下隨機(jī)5個(gè)視野）：細(xì)胞未見(jiàn)著色為0分，平均細(xì)胞著色<25%計(jì)1分，細(xì)胞著色在25%～50%計(jì)2分，細(xì)胞著色>50%計(jì)3分，上述兩種評(píng)分結(jié)果相加，即為結(jié)果。陰性：評(píng)分＜2分，陽(yáng)性：3～6分。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量結(jié)果以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（）表示，組間統(tǒng)計(jì)采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.12組CHOP表達(dá)比較

對(duì)照組中CHOP陽(yáng)性表達(dá)7例（8.75%，圖1A），膠質(zhì)瘤組中陽(yáng)性表達(dá)55例（64.71%，圖1B），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.29，P＜0.05），表明CHOP在正常腦組織中的表達(dá)較少，在腦膠質(zhì)瘤中高表達(dá)。

2.2CHOP在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)

CHOP在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)腦膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率 分 別 為 44.44%（8/10）、48.00%（14/25）、77.27% （17/22）、80.00%（16/20）；與CHOP在Ⅰ級(jí)腦膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率比較，Ⅲ、Ⅳ級(jí)中CHOP陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.03，P=0.02）。CHOP在低分級(jí)膠質(zhì)瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為51.16%（22/43），在高分級(jí)膠質(zhì)瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為76.19%（32/42）；前者低于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.74，P=0.02）。

圖1　CHOP在對(duì)照組（A）和膠質(zhì)瘤組（B）中的表達(dá)（SP染色，× 400）

3　討論

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，是蛋白質(zhì)翻譯合成以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子儲(chǔ)存的重要場(chǎng)所。在細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境變化時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可出現(xiàn)功能紊亂，從而使蛋白質(zhì)翻譯合成出現(xiàn)錯(cuò)誤以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子失衡，即ERS，從而引起機(jī)體平衡功能紊亂。

CHOP，也即GADD153（Growth arrest and DNA damagein-ducible gene 153）[3]，最先發(fā)現(xiàn)于DNA損傷反應(yīng)中。CHOP在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中廣泛表達(dá)，是ERS的特異性轉(zhuǎn)錄因子，屬于C/EBP轉(zhuǎn)錄因子家族[4]。在正常生理?xiàng)l件下，CHOP少量表達(dá)于真核細(xì)胞的細(xì)胞漿中，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞鈣失衡等時(shí)，CHOP大量聚集并表達(dá)于真核細(xì)胞細(xì)胞核中[5,6]，激活細(xì)胞凋亡傳導(dǎo)途徑，通過(guò)影響B(tài)cl-2抗凋亡蛋白表達(dá)[7]、干擾細(xì)胞氧化反應(yīng)或影響Caspase-12的活性等促使細(xì)胞發(fā)生凋亡。大量研究表明，以CHOP作為靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)新型的抗腫瘤藥物具有一定的可行性，通過(guò)激活CHOP啟動(dòng)子中的AP1及AARE1區(qū)域?qū)HOP激活，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而引起其下游信號(hào)蛋白Bcl2的表達(dá)下降，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡，達(dá)到有效抗腫瘤的目的。

本研究通過(guò)免疫組化反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)CHOP在人腦膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，在正常腦組織中表達(dá)較低，表明在膠質(zhì)瘤中，細(xì)胞的增殖紊亂，打破了細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境，從而激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系統(tǒng)，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生應(yīng)激，促使異常增殖細(xì)胞發(fā)生凋亡[8]。在對(duì)不同分級(jí)膠質(zhì)瘤的研究中，發(fā)現(xiàn)CHOP在低分級(jí)膠質(zhì)瘤的表達(dá)，明顯低于在高分級(jí)膠質(zhì)瘤的陽(yáng)性表達(dá)（P＜0.05）。提示在高分級(jí)膠質(zhì)瘤中，ERS更強(qiáng)烈，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡更顯著。不同級(jí)別間對(duì)比，發(fā)現(xiàn)CHOP在Ⅰ級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)與Ⅲ、Ⅳ級(jí)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余組間對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示相鄰兩膠質(zhì)瘤級(jí)別間其表達(dá)相差不大，可能與人為的計(jì)分或CHOP在相近級(jí)別膠質(zhì)瘤間的惡性程度區(qū)分不大相關(guān)。

ERS與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及凋亡對(duì)腫瘤的增殖具有重要意義。ERS的發(fā)現(xiàn)，為腦膠質(zhì)瘤的治療開(kāi)辟了新的研究道路，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境失衡時(shí)，使ERS過(guò)表達(dá)，并抑制細(xì)胞增殖，使腫瘤細(xì)胞凋亡明顯強(qiáng)于細(xì)胞增殖，從而使腫瘤細(xì)胞死亡，達(dá)到治療膠質(zhì)瘤的目的，值得深入研究。

[1]宋姍姍,馬驪.腦腫瘤干細(xì)胞與膠質(zhì)瘤生物治療研究進(jìn)展 [J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2011,10:960-963.

[2]Wang G,Yang ZQ,Zhang K.Endoplasmic reticulum stress response in cancer:molecular mechanism and therapeutic potential[J].Am J Transl Res, 2010,2:65-74.

[3]Moriya S,Miyazawa K,Kawaguchi T,et al.Involvement of endoplasmic reticulum stress-mediated CHOP(GADD153)induction in the cytotoxicity of 2-aminophenoxazine-3-one in cancer cells[J].Int J Oncol,2011,39: 981-988.

[4]Oyadomari S,Mori M.Roles of CHOP/GADD153 in endoplasmic reticulum stress[J].Cell Death Differ,2004,11:381-389.

[5]Tang JR,Nakamura M,Okura T,et al.Mechanism of oxidative stress-induced GADD153 gene expression in vascular smooth muscle cells [J].Biochem Biophys Res Commun,2002,290:1255-1259.

[6]Ubeda M,Habener JF.CHOP gene expression in response to endoplasmic-reticular stress requires NFY interaction with different domains of a conserved DNA-binding element[J].Nucleic Acids Res,2000,28: 4987-4997.

[7]Chiribau CB,Gaccioli F,Huang CC,et al.Molecular symbiosis of CHOP and C/EBP beta isoform LIP contributes to endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis[J].Mol Cell Biol,2010,30:3722-3731.

[8]霍軍麗,甄海寧,劉衛(wèi)平,等.藏紅花素誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡的研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,11:4212-4214.

（本文編輯：王晶）

Expression of CHOP in Different Grade Gliomas

XIONG Xue-hua1,DENG Jian-ping1,LV Ming-xue1,ZENG Chun1,TANG Shuang2,JIANG Yong-ming1.1.Department of Neurosurgery,Suining Center Hospital, Sichuan 629000,China;2.Department of Neurosurgery,The Fourth Renmin Hospital of Chongqing City, Chongqing,400014,China

AbstractObjective:To detect the expression of CHOP in different grade gliomas,and to explore its clinical significance.Methods:Eighty-five cases with glioma were enrolled for glioma group.Based on surgical resection specimens,43 cases were with low-grade gliomas(gradeⅠ+gradeⅡ),and 42 cases with high grade gliomas (gradeⅢ+gradeⅣ).The tissue from craniocerebral trauma surgical removal of the normal brain were selected for control group.The expression of CHOP in all the participents were detected by immunohistochemical method. Results:The expression rate of CHOP in the control group was 8.75%(7/80),significantly lower than that in in the glioma groups(64.71%,55/85)(P<0.05).The expression of CHOP was detected in the 22 cases with low-grade glioma group,significantly lower than that in the 32 cases with high-grade gliomas(P<0.05).Conclusion:The expression of CHOP is low in normal brain tissue.However,the expression is significantly increased in gliomas, The degree of gliomas determine the expression.

CHOP;glioma;expression

·綜述·

R741;R730.264

A

10.16780/j.cnki.sjssgncj.2016.01.013

1.遂寧市中心醫(yī)院神經(jīng)外科

四川629000

2.重慶市第四人民醫(yī)院神經(jīng)外科

重慶400014

四川省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研課題（No.150245）

2015-04-21

鄧健平

231883670@qq. com