馬　寅，張　偉，張國(guó)麗，張銳武，楊兆祥*

（1.大理大學(xué)，云南大理　671000；2.昆藥集團(tuán)股份有限公司，昆明　650106）

蒿甲醚結(jié)腸定位微丸的制備及體外釋放度評(píng)價(jià)

馬寅1，張偉2，張國(guó)麗2，張銳武2，楊兆祥2*

（1.大理大學(xué)，云南大理671000；2.昆藥集團(tuán)股份有限公司，昆明650106）

目的：擬制備蒿甲醚pH依賴型結(jié)腸定位微丸，并對(duì)其體外釋放度進(jìn)行考察。方法：采用擠出滾圓法制備丸芯，采用Eudragit S100作為包衣材料，檸檬酸三乙酯作為增塑劑，使用流化床包衣設(shè)備進(jìn)行包衣。結(jié)果：在pH 1.2溶液2 h中未檢測(cè)到蒿甲醚；在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中4 h累積釋放度均小于5%；而在pH 7.6磷酸鹽緩沖液中，3 h累積釋放度均達(dá)90%以上。結(jié)論：本方法制備的蒿甲醚結(jié)腸定位微丸能達(dá)到結(jié)腸定位釋藥的目的。

蒿甲醚；pH依賴型；結(jié)腸定位；體外釋放度

［DOI］10.3969/j.issn.2096-2266.2016.08.003

蒿甲醚是青蒿素的脂溶性衍生物，它有抗瘧疾、抗血吸蟲(chóng)、抗弓形蟲(chóng)、抗心律失常和腫瘤細(xì)胞毒性等作用〔1〕。除此之外，蒿甲醚還具有抗腫瘤血管生成的作用〔2〕。蒿甲醚可以通過(guò)影響細(xì)胞周期來(lái)抑制人慢性髓性白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞的增殖〔3〕。牛紅妹等〔4〕研究發(fā)現(xiàn)，青蒿釀液在體外對(duì)人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞、LOVO細(xì)胞、胃癌AGS細(xì)胞以及肝癌Hep-2細(xì)胞均有明顯的作用。因此將蒿甲醚制成結(jié)腸定位微丸，不僅可以提高其靶向性，還可以提高其生物利用度，是一種性價(jià)比很高的抗癌藥物。

口服結(jié)腸定位給藥系統(tǒng)（OCDDS）是一種新型的給藥系統(tǒng)，它是指采用一種適當(dāng)?shù)姆椒?，避免藥物在胃、十二指腸、空腸及回腸釋放，運(yùn)送至結(jié)腸部位才可釋放而發(fā)揮局部或全身治療作用的一種釋藥系統(tǒng)〔5〕。該給藥系統(tǒng)，可以將治療藥物直接運(yùn)送至結(jié)腸，既能降低毒副作用，又能將藥物靶向輸送至病灶處。同時(shí)這種給藥方式可以避免藥物被胃腸道酶所降解，有助于提高疫苗、蛋白、多肽類藥物口服給藥的生物利用度〔6〕。本實(shí)驗(yàn)制備了蒿甲醚結(jié)腸定位微丸，并對(duì)其體外釋放度進(jìn)行考察。

1　儀器與試藥

1.1儀器擠出滾圓機(jī)（重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司；多功能流化床（重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司）；智能溶出儀（德國(guó)PHARMATEST公司）；高效液相色譜儀1260（美國(guó)Agilent公司）；電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；pH酸度計(jì)（姆特勒-托利多公司）。

1.2試藥蒿甲醚（昆藥集團(tuán)股份有限公司）；微晶纖維素（FMC BioPolymer美國(guó)）；乳糖（DFE Pharma荷蘭）；羧甲基淀粉鈉（安徽山河藥用輔料股份有限公司）；聚乙烯吡咯烷酮（安徽山河藥用輔料股份有限公司）；Eudragit S100（尤特奇S100德國(guó)羅姆公司）；檸檬酸三乙酯（蚌埠豐原醫(yī)藥科技公司）；滑石粉（德國(guó)羅姆公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1蒿甲醚載藥微丸的制備采用擠出滾圓的方法制備載藥微丸，操作如下：稱取處方量的蒿甲醚、微晶纖維素、乳糖、羧甲基淀粉鈉，混合均勻，加一定量的聚維酮水溶液制軟材，然后將制好的軟材放進(jìn)擠出機(jī)進(jìn)行擠出，將得到的長(zhǎng)條物放進(jìn)滾圓機(jī)內(nèi)進(jìn)行滾圓。取出，采用多功能流化床進(jìn)行40.0℃流化烘干，取20～40目微丸作為載藥微丸進(jìn)行包衣。按照上述處方和工藝，制備3批載藥微丸，考察3批載藥微丸的外觀、崩解特性和制劑工藝的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，所制3批載藥微丸，圓整度好，表面光潔，崩解時(shí)間、堆密度、硬度、脆碎度均符合要求，由此可證明該載藥微丸的處方和工藝穩(wěn)定性都良好。

2.2結(jié)腸定位微丸的制備

2.2.1包衣工藝及條件將制備好的載藥微丸80g加到WBF-2G型流化床中，底噴法，噴嘴直徑0.2mm，進(jìn)風(fēng)溫度45℃，物料溫度37～40℃，流化壓力30kPa，噴霧壓力120 kPa，噴液速率0.2 g/min。包衣結(jié)束后，微丸在流化床內(nèi)繼續(xù)流化干燥3 h，以使包衣膜融合完整〔7〕。

2.2.2包衣液的配制按包衣處方稱取Eudragit S100，滑石粉，增塑劑。A相：先量取一定量的95%乙醇溶劑，將稱取的Eudragit S100慢慢加入溶劑中，并使其分散溶解成均勻透明膠體溶液；B相：將滑石粉，增塑劑慢慢加入到剩余95%乙醇溶劑中，持續(xù)攪拌15 min，使混合均勻；然后將B相緩慢倒入A相中，并繼續(xù)攪拌30 min，過(guò)100目篩，即得。

2.3蒿甲醚含量測(cè)定

2.3.1色譜條件Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流動(dòng)相乙腈-水（62：38），流速1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)216 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 μL。

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取蒿甲醚對(duì)照品適量，置量瓶中，選用pH 6.8磷酸鹽緩沖液，pH 7.6磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)。兩種介質(zhì)中蒿甲醚的質(zhì)量濃度為50～120 μg/mL，在216 nm處測(cè)定峰面積，并對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸。在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，線性方程為Y=589 432.1X+0.780 41，r= 0.999 9；在pH 7.6磷酸鹽緩沖液中，線性方程為Y= 57 642.3X+0.648 50，r=0.999 9，由此可知，蒿甲醚在兩種介質(zhì)中線性良好。

2.3.3體外釋放度的測(cè)定體外釋放度測(cè)定方法：①載藥微丸溶出度測(cè)定：按照《中國(guó)藥典》2010年版第二部附錄溶出度測(cè)定法第二法，取適量（相當(dāng)于含主藥100 mg）載藥微丸，以1 000 mL pH 6.8磷酸鹽緩沖液（人工小腸液），pH 7.6磷酸鹽緩沖液（人工結(jié)腸液）的溶液為溶出介質(zhì)，在37.5℃，75 r/min條件下，分別在5、10、20、30、45、60 min取樣5 mL，過(guò)0.45 μm微濾膜，同時(shí)補(bǔ)液5 mL。在Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），乙腈-水（62：38），1 mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)216 nm條件下，進(jìn)樣測(cè)定溶出液中蒿甲醚含量，計(jì)算累積釋放度。②包衣微丸釋放度測(cè)定：取包衣微丸適量（相當(dāng)于主藥100 mg），放入900 mL pH 1.2鹽酸溶液（人工胃液）中2 h，再將微丸放入1 000 mL pH 6.8磷酸鹽緩沖液（人工小腸液），4 h后，再放入1 000 mL pH 7.6磷酸鹽緩沖液（人工結(jié)腸液）3 h。每次變換溶出介質(zhì)需在5 min內(nèi)完成，測(cè)定方法同載藥微丸的測(cè)定方法。

2.4包衣處方的篩選

2.4.1包衣材料的選擇pH依賴型的結(jié)腸包衣材料主要為丙烯酸樹(shù)脂類，目前多采用Eudragit這類包衣材料。其中Eudragit S100和Eudragit L100常被作為結(jié)腸定位包衣材料的首選。但是由于Eudragit L100包衣材料本身的化學(xué)性質(zhì)，其在pH＞5.5的溶出介質(zhì)中，就會(huì)溶解，因此藥物釋放大多發(fā)生在小腸中遠(yuǎn)段。Eudragit S100包衣材料只在pH＞7.0的溶出介質(zhì)中時(shí)開(kāi)始溶解并釋放藥物，其釋藥部位在結(jié)腸。因此本實(shí)驗(yàn)選擇Eudragit S100作為包衣材料。

2.4.2增塑劑用量的篩選現(xiàn)對(duì)檸檬酸三乙酯用量進(jìn)行考察。將Eudragit S100用量固定為6.35%，滑石粉的用量固定為1.31%，變化檸檬酸三乙酯的用量。變化的量分別為0.34%，0.63%，1.42%。按照上述的變化數(shù)據(jù)分別配制包衣液進(jìn)行包衣，使丸芯都增重28%后，測(cè)定不同包衣微丸的體外釋放度，檸檬酸三乙酯的用量對(duì)該制劑的體外釋放影響較大。當(dāng)檸檬酸三乙酯用量為0.34%時(shí)，藥物在pH 6.8的溶出介質(zhì)中釋放較多，達(dá)到32.3%，不符合結(jié)腸定位釋放的要求。而檸檬酸三乙酯用量為0.63%時(shí)，藥物在pH 6.8的溶出介質(zhì)中釋放的量較少，且在pH 7.6的溶出介質(zhì)中3 h后，蒿甲醚累積釋放度達(dá)到98.47%，結(jié)腸定位效果較好，所以選擇檸檬酸三乙酯用量為0.63%。見(jiàn)表1。

表1　不同檸檬酸三乙酯用量對(duì)釋放度的影響

2.4.3包衣厚度的篩選包衣增重的厚度直接影響到該制劑的體外釋放度，因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)包衣厚度進(jìn)行了篩選。按上述包衣液配比，分別考察Eudragit S100增重為18%、28%、40%微丸的釋放情況。結(jié)果表明，當(dāng)包衣增重達(dá)到18%時(shí)，該制劑在pH 6.8的溶出介質(zhì)中釋放達(dá)到26.5%。不符合結(jié)腸定位釋放的要求。當(dāng)包衣增重達(dá)到40%時(shí)，pH 6.8的溶出介質(zhì)中釋放較少，但是在pH 7.8的溶出介質(zhì)中未能達(dá)到要求。只有包衣增重在28%時(shí)，才符合結(jié)腸定位釋放的要求。見(jiàn)表2。因此，確定包衣增重為28%。其累計(jì)溶出度曲線如下圖1所示。

表2　不同包衣增重對(duì)釋放度的影響

圖1　不同包衣增重比例的蒿甲醚結(jié)腸定位微丸的累計(jì)釋放度曲線

3　結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該劑型在pH 1.2的溶出介質(zhì)中未檢測(cè)到蒿甲醚，在pH 6.8的溶出介質(zhì)中釋放度小于10%，在pH 7.6的溶出介質(zhì)中釋放度達(dá)到90%，說(shuō)明該劑型的處方及工藝是穩(wěn)定可行的。但是由于此研究的劑型為新劑型，新工藝，并且現(xiàn)在蒿甲醚結(jié)腸定位緩放微丸還處于實(shí)驗(yàn)室研究階段，因此，該劑型還需要進(jìn)行進(jìn)一步的完善和提高，同時(shí)其體內(nèi)研究和臨床研究還需要進(jìn)一步考察。

〔1〕譚濤，秦宗會(huì)，譚蓉.青蒿素類藥物的藥理作用研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)藥業(yè)，2009，18（3）：63-64.

〔2〕陳歡歡，周慧君.青蒿琥酯的抗血管生成作用〔J〕.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39（1）：29-33.

〔3〕左曙光，劉淳，劉馨，等.蒿甲醚對(duì)K562細(xì)胞作用的體外實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（20）：3680-3682.

〔4〕牛紅妹，龐來(lái)祥，郭振軍.青蒿釀液體外抗腫瘤活性研究〔J〕.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2013，27（5）：33-35.

〔5〕崔福德.藥劑學(xué)〔M〕.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011.

〔6〕任國(guó)蓮，張淑秋.口服結(jié)腸定位給藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)藥物與臨床，2006，6（1）：8-10.

〔7〕CHEN T，CHEN Q H.Aqueous ethylcellubose coating technologyⅡ：influence of curing process on film properties〔J〕. Chin J Pharm，2000，31（7）：298-301.

〔Abstract〕Objective:To prepare Artemether colon-specific pellets controlled by pH and study the release in vitro.Methods:The cores of pellets were made by extrusion-spheronization.Pellets were prepared using a fluid bed coater，with Eudragit S100 as the out layer，triethyl citrate added to the dispersion as the plasticizer.Results:Artemether was not detected in solution of pH 1.2 for 2 h.The accumulative release in pH 6.8 phosphate buffer for 4 h was smaller than 5%.While the accumulative release in the pH 7.6 phosphate buffer for 3 h was more than 90%.Conclusion:Colon-specificpellets prepared in this way can well perform colon-specific delivery.

〔Key words〕Artemether；pH controlled；colon-specific；release in vitro

（責(zé)任編輯李楊）

Study on the Preparation of Artemether Colon-specific Pellets and the Release in Vitro

Ma Yin1，Zhang Wei2，Zhang Guoli2，Zhang Ruiwu2，Yang Zhaoxiang2*
（1.Dali University，Dali，Yunnan 671000，China；2.KPC Pharmaceutical Inc.，Kunming 650106，China）

R944

A

2096-2266（2016）08-0008-03

2016-03-08

2016-03-28

馬寅，碩士研究生，主要從事藥物制劑研究.

楊兆祥，高級(jí)工程師.