曾佩瑜　高明　黃玉梅　吳志堅(jiān)　麥敏芯　蔣麗蕓　馬恩耀　朱啟亮

摘要：目的規(guī)范并優(yōu)化醋馬錢子的炮制工藝，獲得最佳工藝。方法指標(biāo)的評(píng)價(jià)以士的寧和馬錢子堿兩種生物堿的含量作為標(biāo)準(zhǔn)，通過對(duì)醋馬錢子炮制工藝中的重點(diǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行考察，優(yōu)選關(guān)鍵因素進(jìn)行正交試驗(yàn)并結(jié)合單因素優(yōu)化試驗(yàn)，解決步驟的簡化和有效生物堿盡量保留、毒性生物堿盡量降低的問題，得出最佳炮制工藝。結(jié)果通過對(duì)醋馬錢子炮制工藝中重點(diǎn)環(huán)節(jié)的考察，優(yōu)選出浸泡時(shí)間、醋液濃度和醋煮時(shí)間三個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。結(jié)果顯示，A3B2C1為醋馬錢子最佳炮制工藝，即浸泡天數(shù)5d，白醋濃度2.5%，醋煮時(shí)間1h。其中，影響醋馬錢子炮制工藝中因素的主次順序?yàn)椋捍字髸r(shí)間>水浸天數(shù)>醋液濃度。結(jié)論該方法為大規(guī)模生產(chǎn)提供了理論基礎(chǔ)和依據(jù)。

關(guān)鍵詞：醋馬錢子；炮制工藝；正交試驗(yàn)；單因素優(yōu)化試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：R283文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）10-0066-04

Study on Processing Technology of Vinegar-soaked Strychnos Nux Vomica

ZENG Pei-yu1， GAO Ming1， HUANG Yu-mei2， WU Zhi-jian2，

MAI Min-xin2 JIANG Li-yun1， MA En-yao1， ZHU Qi-Liang1

（1. Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou 510006， Guangdong；

2.Chinese Medicine Pieces Factory， Guangzhou Medicinal Material Corporation， Guangzhou 510360，Guangdong）

【Abstract】Objective： To standardize and optimize the processing technology of vinegar-soaked Strychnos Nux Vomica to obtain the best technology. Methods： Indicative evaluation was made by taking content of strychnine and brucine as a standard. Through the inspection of key links in vinegar-soaked Strychnos processing technology， key factors were preferably chosen to conduct an orthogonal experiment and a single factor optimization test to simplify its procedure， preserve its effective alkaloids and minimize its toxic alkaloids so as to obtain the best processing technology. Results： Through the study of vinegar-soaked Strychnos processing technology， best soaking time， concentration of vinegar and vinegar-cooking time were preferably used to conduct the orthogonal test. The results showed that A3B2C1 was the best processing technology for vinegar-soaked Strychnos， i.e. 5-day soaking， 2.5% of vinegar concentration， one-hour vinegar-cooking time. Among them， the factors influencing vinegar Strychnos processing were orderly as， vinegar-cooking time>soaking days>vinegar concentration. Conclusion： The method provides a theoretical basis and foundation for mass production.

【Key words】vinegar-soaking Strychnos， processing technology， orthogonal test， single factor experiment

馬錢子是馬錢科植物馬錢（Strychnosnux-vomica L.）的干燥成熟種子。主產(chǎn)于印度、緬甸、越南、斯里蘭卡等地。其性味苦，溫；有大毒，歸肝、脾經(jīng)。具止痛、通絡(luò)，消腫、散結(jié)之功；用于跌打、損傷，腫痛、骨折，頑痹、風(fēng)濕，麻木、癱瘓，瘡毒、癰疽，咽喉腫脹等癥。

從古至今，有許多類的馬錢子炮制方法[1]，其中，以砂炒、油炸法沿用最多[2]；并且有許多關(guān)于砂燙法的研究，而醋制法卻少有研究。中藥標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化始終在發(fā)展，但廣東地區(qū)傳統(tǒng)沿用的醋制法[3]其炮制工藝仍處于較為粗糙的狀態(tài)，浸泡、煮制、砂燙等方法細(xì)節(jié)不明確，缺乏規(guī)范性和生產(chǎn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，欠缺質(zhì)量穩(wěn)定性和可控性，不利于該炮制方法的推廣和大規(guī)模生產(chǎn)加工。

為適應(yīng)中藥現(xiàn)代化進(jìn)展，規(guī)范醋馬錢子的炮制工藝，本研究運(yùn)用HPLC化學(xué)成分檢測(cè)手段，在繼承的基礎(chǔ)上對(duì)醋馬錢子進(jìn)行炮制工藝的研究，使其更規(guī)范化、規(guī)?；同F(xiàn)代化。

1儀器與材料

儀器：千分之一天平（JA3003型，上海舜字恒平科學(xué)儀器有限公司），數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（BDMD-M-V-20型，天津泰斯特），電阻爐溫度控制器（KSW型，余姚金電儀表有限公司），SMART測(cè)溫槍（AR842A型，哈爾濱聯(lián)華自動(dòng)化儀表有限公司）。

原料及輔料：由廣州市藥材公司中藥飲片廠提供的馬錢子，經(jīng)高明副教授（廣州中醫(yī)藥大學(xué)）鑒定為馬錢科Loganiaceae植物馬錢Strychnosnux-vomica L.的干燥成熟種子；由廣州市藥材公司中藥飲片廠提供的白醋及河砂，白醋總酸含量≥3.50 g·100mL-1。

試藥：對(duì)照品均來源于中國藥品生物制品檢定研究院：馬錢子堿（批號(hào)：110706-200505，純度：95.9%），士的寧（批號(hào)：110705-201307，純度：97.1%）；乙腈為色譜純；三氯甲烷、甲醇為分析純；氫氧化鈉試液、無水硫酸鈉、庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)

2.1.1因素和水平的確定結(jié)合醋馬錢子在1984年版《廣東省中藥炮制規(guī)范》[4]中的工藝記載和廣州市藥材公司中藥飲片廠車間的實(shí)際生產(chǎn)，廣東當(dāng)?shù)貍鹘y(tǒng)的醋馬錢子炮制工藝均離不開水浸、醋煮及砂炒三個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

同時(shí)，由于在砂炒一環(huán)節(jié)中，砂炒時(shí)的溫度難以控制，只生硬地利用砂炒溫度、砂炒時(shí)間來作為該環(huán)節(jié)的衡量指標(biāo)并不盡合理；而以傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)判斷作為控制標(biāo)準(zhǔn)則更為科學(xué)。這是由于，砂炒時(shí)同時(shí)以體積膨脹（外形鼓起）、淺褐黃色變深褐黃色的顏色轉(zhuǎn)變、清脆的單聲爆裂聲、咖啡樣的香味等形、色、聲、味四方面來綜合判斷出鍋時(shí)間，變化明顯，完成時(shí)間把握準(zhǔn)確，炒制品質(zhì)不隨操作人員的改變而改變。由此，將水浸天數(shù)、醋液濃度、醋煮時(shí)間作為正交實(shí)驗(yàn)的三個(gè)因素，可較全面合理地研究醋馬錢子的炮制工藝。

在車間的實(shí)際生產(chǎn)工藝中，水浸天數(shù)的范圍在6～10天，故水浸時(shí)間（d）初步確定在7、8、9三個(gè)水平上。醋液濃度（%）是購進(jìn)白醋的原始濃度3.5%（即白醋總酸含量3.50 g·100mL-1），在節(jié)省原料及可行的考慮上確定醋液的濃度在1.5、2.5、3.5%三個(gè)水平上。醋煮時(shí)間車間的常用時(shí)長為3～6 h并為敞開式煮制，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，大燒杯中敞開式煮制1 h醋液已煮干；加蓋煮制3 h可余剛覆蓋過馬錢子表明的醋液量?；诨緱l件的限制，選擇1、2、3作為醋煮時(shí)間（h）的三個(gè)水平。

綜上，正交試驗(yàn)的因素和水平表如下表：

2.1.3樣品制備及方法取干凈透明的敞口玻璃瓶9個(gè)，分別編號(hào)①～⑨，每瓶加入已挑選的馬錢子各100 g，分別加入沒過馬錢子表面約3 cm高的自來水中，放于陰涼干燥處，每天換水一次，分別浸泡7，8，9 d，達(dá)到不同的水浸天數(shù)后，取出馬錢子，剝?nèi)テっ?，分別置1.5%、2.5%、3.5%不同濃度的6倍量醋中煮1，2，3 h，取出置50℃～60℃烘箱烘至八成干后，置鍋中砂炒，于200℃～210℃砂溫時(shí)投料，至體積膨脹，轉(zhuǎn)成棕褐色并伴有爆裂聲和香味時(shí)出鍋，攤涼即成。得樣品①～⑨號(hào)。

2.1.4結(jié)果與分析

2.1.4.1士的寧和馬錢子堿含量測(cè)定（照《中國藥典》2015年版第一部通則0512高效液相色譜法）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：乙腈-0.01 mol·L-1庚烷磺酸鈉與0.02 mol·L-1磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8）（21：79）；檢測(cè)波長：260 nm。按士的寧峰計(jì)算，其理論板數(shù)應(yīng)高于或等于5000。

2.1.4.2對(duì)照品溶液的制備取6 mg士的寧對(duì)照品及5 mg馬錢子堿對(duì)照品，精密稱定后分別放入10 mL的容量瓶里，加入適量的三氯甲烷令溶解且加至刻度，振搖均勻。從兩容量瓶中分別量取2 mL于同一10 mL的容量瓶里，加入甲醇至刻度，振搖均勻即得（每1 mL含士的寧0.12 mg，馬錢子堿0.1 mg）。

2.1.4.3供試品溶液的制備把本品粉碎至可通過三號(hào)篩，取0.6 g左右，精密稱重，放于帶塞子的錐形瓶內(nèi)，加入3 mL氫氧化鈉試液。混搖均勻，靜置30 min，精密加入20 mL的三氯甲烷，蓋緊塞子并稱重，于水浴鍋中回流提取2 h，放至室溫后稱重并用三氯甲烷補(bǔ)重，振搖均勻，用分液漏斗分取三氯甲烷層，過濾時(shí)經(jīng)過適量無水硫酸鈉，取3 mL續(xù)濾液至10 mL容量瓶中，最后以甲醇定容，振搖均勻即得。

2.1.4.3測(cè)定法對(duì)照品以及供試品溶液被分別精密吸取10 μL，于液相色譜儀中進(jìn)樣，測(cè)定后即成。

2.1.4.4方法學(xué)考察

2.1.4.4.1線性關(guān)系考察取6 mg士的寧對(duì)照品、5 mg馬錢子堿對(duì)照品，精密稱定，分別放入10 mL容量瓶中，加適量的三氯甲烷使溶解，并稀釋至刻度，振搖均勻。把二者并入同一50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，振搖均勻，即得每1 mL含士的寧0.12 mg，馬錢子堿0.1 mg的混合對(duì)照品。從混合對(duì)照品中分別取10、5、2、1、0.5 mL至10 mL容量瓶中用甲醇稀釋至刻度，配成5個(gè)士的寧濃度分別為0.120、0.060、0.024、0.012、0.006 mg·mL-1和馬錢子堿濃度分別為0.100、0.05、0.02、0.010、0.005 mg·mL-1的對(duì)照品溶液，再分別按照確定的色譜條件，分別以峰面積（Y）對(duì)相應(yīng)對(duì)照品的含量（X，μg）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為士的寧=34.876X-0.028，r=0.9999；馬錢子堿=26.997X-0.0022，r=0.9999。

2.1.4.4.2精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)取士的寧和馬錢子堿混合對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL?；旌蠈?duì)照品溶液中士的寧的平均峰面積為41.6142，RSD為0.22%；馬錢子堿的平均峰面積為26.7880，RSD為0.26%。表明：進(jìn)行含量測(cè)定的樣品溶液，有良好的進(jìn)樣精密度。稱取同一份供試品樣品5份，各約0.6 g，精密稱定，供試品溶液中士的寧的平均峰面積為47.5987，RSD為1.80%；馬錢子堿的平均峰面積為18.8755，RSD為2.01%。表明：有良好的重復(fù)性。取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12h測(cè)定，供試品溶液中士的寧平均峰面積為48.2981，RSD為0.21%；馬錢子堿的平均峰面積為21.6697，RSD為0.25%。表明：在12h內(nèi)，含量測(cè)定的樣品溶液有良好的穩(wěn)定性。

2.1.4.2正交試驗(yàn)結(jié)果根據(jù)上述考察與分析得出因素、水平和基本工藝流程，以水浸天數(shù)、醋液濃度和醋煮時(shí)間為考察因素，以士的寧和馬錢子堿的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)醋馬錢子的炮制工藝進(jìn)行正交試驗(yàn)。

從方差分析可知，影響醋馬錢子炮制工藝因素的主次順序?yàn)椋篊>A>B，即醋煮時(shí)間>水浸天數(shù)>醋液濃度。其中，C因素為顯著因素（P≤0.05），即醋煮時(shí)間對(duì)醋馬錢子生物堿含量的綜合評(píng)分指標(biāo)有顯著影響，而炮制過程中的醋液濃度對(duì)生物堿含量的綜合評(píng)分指標(biāo)無顯著影響。根據(jù)表3-2可知，各因素其不同水平的影響順序?yàn)椋篈3>A2>A1，B2>B1>B3，C1>C3>C2。綜合分析考慮，故確定醋馬錢子的較佳炮制工藝為：A3B2C1，即水浸天數(shù)9d，醋液濃度2.5%，醋煮時(shí)間1h。

由于清水浸泡9d周期太長，不符合實(shí)際大生產(chǎn)的效率要求且正交實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)水浸天數(shù)亦非顯著影響因素，故欲適當(dāng)縮短浸泡時(shí)間，在此正交較優(yōu)工藝上再作一單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。

2.2水浸時(shí)間的單因素優(yōu)化試驗(yàn)

2.2.1樣品制備方法原料、輔料、炮制工具及儀器同1。取干凈透明的敞口玻璃瓶3個(gè)，分別編號(hào)①～③，每瓶加入已挑選過的馬錢子100 g，再分別加入沒過馬錢子表面約3cm高的自來水，放于陰涼干燥處，每天換水一次，分別浸泡3，5，7d，達(dá)到不同的水浸天數(shù)后，取出馬錢子，剝?nèi)テっ?，分別置2.5%的6倍量醋中煮1h，取出置50℃～60℃烘箱烘至八成干后，置鍋中砂炒，于200℃～210℃砂溫時(shí)投料，至體積膨脹，轉(zhuǎn)成棕褐色并伴有爆裂聲和香味時(shí)出鍋，攤涼即成。得樣品①～③號(hào)。

2.2.2結(jié)果與分析供試品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣分析，每批樣品平行測(cè)定3次，記錄峰面積，計(jì)算3個(gè)樣品的含量，結(jié)果見表4和圖1含量變化情況。

從表4中可看出，水浸5 d的成品其馬錢子堿含量比3 d、7 d的低，而士的寧含量比3 d、7 d的高；再結(jié)合圖1可清晰地看出水浸5 d的成品較3 d和7 d的士的寧含量最高而馬錢子堿含量最低；另外，結(jié)合表2比較，發(fā)現(xiàn)水浸5 d的成品和水浸9 d的成品馬錢子堿含量十分接近，RSD為1.70%，士的寧的含量相差較大，推斷可能是砂炒溫度的影響。綜上，可考慮將水浸天數(shù)縮短為5 d。故最終確定醋馬錢子的較佳炮制工藝為：水浸天數(shù)5 d，醋液濃度2.5%，醋煮時(shí)間1 h。

2.3驗(yàn)證試驗(yàn)以上述優(yōu)化工藝進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表5。

3討論

馬錢子的加工炮制過程對(duì)其生物堿含量的影響比較大，且機(jī)理不明確，規(guī)律不明顯。因此進(jìn)行醋馬錢子炮制工藝考察時(shí)，首先結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，確定影響較大的3個(gè)因素不同水平，同時(shí)以控制醋馬錢子質(zhì)量的士的寧和馬錢子堿這兩種生物堿作為指標(biāo)因素，對(duì)醋馬錢子的炮制工序進(jìn)行正交試驗(yàn)。最后再在較優(yōu)的工藝上進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，使工藝條件更符合實(shí)際生產(chǎn)需要。結(jié)果顯示，醋馬錢子的較佳炮制工藝為水浸5d，2.5%的醋煮1 h，砂炒至符合要求。參考文獻(xiàn)：

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