黃曉映 曾耀明 余維微 鄭偉偉 何璠

·診治分析·

慢性胃炎脾胃濕熱證骨橋蛋白的表達及臨床意義

黃曉映 曾耀明 余維微 鄭偉偉 何璠

目的 探討骨橋蛋白（OPN）在慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中的表達。方法 經(jīng)內(nèi)鏡活檢獲取胃竇黏膜，采用免疫組化SABC法檢測比較慢性胃炎脾胃濕熱證、脾虛氣滯證患者胃竇黏膜組織和正常胃竇黏膜組織中OPN的表達情況。結(jié)果 OPN在脾胃濕熱組、脾虛氣滯組及正常胃竇黏膜組織中陽性表達率分別80.00% 、45.16%和 10.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；3組患者胃竇黏膜中均有OPN表達，脾胃濕熱證組高于脾虛氣滯組和正常對照組。結(jié)論 慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中OPN的表達高于脾虛氣滯證及正常對照組，提示OPN的測定可能對慢性胃炎證型的病情判斷有一定意義。

慢性胃炎 脾胃濕熱證 骨橋蛋白

慢性胃炎屬于臨床常見病﹑多發(fā)病，脾胃濕熱證是慢性胃炎的主要證型之一。有研究表明，慢性胃炎的證型與胃黏膜病理改變存在十分密切的關(guān)系［1］。骨橋蛋白（OPN）是一種有多功能的非膠原性骨基質(zhì)磷酸化糖蛋白，在炎癥和腫瘤的生理病理過程中起重要作用［2］。本文探討骨橋蛋白（OPN）在慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中的表達。

1　臨床資料

1.1一般資料 2014年1月至12月本院消化科門診就診的慢性淺表性胃炎患者61例，分為2組。脾胃濕熱證組30例，男18例，女12例；平均年齡（47.5±10.7）歲。平均病程（7.64±3.65）年。幽門螺桿菌（Hp）陰性11例，Hp陽性19例。脾虛氣滯證組31例，男17例，女14例；平均年齡（43.4±10.3）歲。平均病程（7.70±2.37）年。Hp陰性16例﹑Hp陽性15例，兩組在年齡﹑性別和Hp感染﹑病程等方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。另選擇10名健康體檢者為正常對照組，其中男5例，女5例，平均年齡（40.22±9.23）歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：慢性胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)按照《慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案（草案）》［3］及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）不符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)。（2）有明顯兼夾證或合并證候。（3）合并肝﹑腎﹑造血系統(tǒng)﹑內(nèi)分泌疾病等嚴(yán)重原發(fā)性疾病及精神病患者。（4）病情危重患者。（5）慢性萎縮性胃炎﹑消化性潰瘍或胃腸道腫瘤患者。

1.2方法 （1）步驟：常規(guī)胃鏡檢查時取胃竇黏膜2顆，石蠟標(biāo)本常規(guī)4μm連續(xù)切片，56℃烤箱中過夜，脫蠟至水后室溫下置于3%過氧化氫中5min，枸櫞酸工作液高壓鍋噴氣2min進行抗原修復(fù)，滴加一抗，4℃過夜，PBS清洗后滴加二抗反應(yīng)20 min，PBS清洗后DAB顯色。蘇木精復(fù)染，常規(guī)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察顯色結(jié)果。主要試劑：OPN兔抗人多克隆抗體（武漢博士德公司）；即用型SABC-POD（兔IgG）試劑盒（武漢博士德公司）。（2）判定標(biāo)準(zhǔn)：鏡下觀察胃黏膜上皮細(xì)胞，以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，高倍鏡下取4個不同視野，各計數(shù)100個細(xì)胞，無陽性細(xì)胞為（-），陽性細(xì)胞＜10%為（+），陽性細(xì)胞占10%～50%為陽性（++），陽性細(xì)胞＞50%為強陽性（+++）。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件。計量資料兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

3組免疫組化結(jié)果比較 見表1﹑圖1﹑2﹑3。

作者單位：325000 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬溫州中醫(yī)院消化科

圖1　脾胃濕熱組OPN 表達情況（×40倍）

圖2　脾虛氣滯組OPN 表達情況（×40倍）

圖3　正常組OPN 表達強度情況（×40倍）

表1　3組 OPN 表達強度比較（n）

3　討論

慢性胃炎是消化科門診最常見疾病，嚴(yán)重影響患者的工作與生活質(zhì)量，目前西醫(yī)治療易復(fù)發(fā)，而中醫(yī)藥對本病的治療積累了豐富的經(jīng)驗，因此積極開展中醫(yī)藥對本病的診斷與治療研究具有現(xiàn)實意義。祖國醫(yī)學(xué)無“慢性胃炎”病名，根據(jù)其癥狀相當(dāng)于“胃痞”﹑“胃痛”等范疇，中醫(yī)證型常見肝胃不和﹑肝胃郁熱﹑脾胃濕熱﹑脾虛氣滯﹑脾胃陰虛﹑胃絡(luò)瘀血等幾種。溫州地處浙南沿海，常年空氣濕度較大，當(dāng)?shù)鼐用裼惺群ｕr﹑啤酒飲食習(xí)慣。臨床所見慢性胃炎患者表現(xiàn)為脾胃濕熱證，脾主運化水液，濕邪困脾，導(dǎo)致脾胃氣機升降失常，納運失司，故臨床可見脘痞腹脹，食欲減退，濕邪蘊久化熱，則表現(xiàn)為口苦口臭，小便黃，大便溏等癥狀?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實，胃竇黏膜能較好的從微觀層面反映胃部病變，因此作者選擇脾胃濕熱證患者的胃黏膜組織免疫組化與證型進行同步觀察，從分子水平了解脾胃濕熱證的變化規(guī)律，提高對脾胃濕熱證本質(zhì)的認(rèn)識，充實四診客觀化研究和微觀辨證的成果，切實提高中醫(yī)證的微觀研究水平。骨橋蛋白是一種有多功能的非膠原性骨基質(zhì)磷酸化糖蛋白，在炎癥和腫瘤的生理病理過程中起重要作用［2］。故作者選擇骨橋蛋白作為觀察指標(biāo)。本資料顯示，正常對照組胃竇黏膜中OPN的表達極低，而慢性胃炎OPN的表達明顯升高，且脾胃濕熱組明顯高于脾虛氣滯組。慢性胃炎脾胃濕熱證組胃黏膜OPN表達顯著高于非脾胃濕熱組（P＜0.05），分析認(rèn)為由于在水液的代謝過程中，肺為水之上源，腎為水之下源，而脾居中焦，為水液升降輸布的樞紐，脾運化失職，氣機升降失常則產(chǎn)生濕邪內(nèi)阻，濕熱內(nèi)蘊等病機，有研究發(fā)現(xiàn)清熱利濕藥物能抑制小鼠腎組織OPN的表達［6］，因此推測OPN的高度表達可能是“脾胃濕熱證”的微觀辨證證據(jù)之一，清熱利濕治法能下調(diào)慢性胃炎胃竇黏膜OPN的表達。Junnila等［5］研究發(fā)現(xiàn)，OPN在胃癌組織中過表達，提示OPN在胃癌的發(fā)生﹑發(fā)展中具有重要作用。另有報道在正常黏膜﹑不典型增生胃黏膜﹑胃癌3種病變組織中，OPN陽性表達率隨病變程度加重呈逐漸上升趨勢［7］，故臨床應(yīng)重視對慢性胃炎脾胃濕熱證的及時治療與病情監(jiān)測。

綜上，作者認(rèn)為OPN的高度表達可能是“脾胃濕熱證”的微觀證據(jù)之一，但要明確 OPN 在慢性胃炎脾胃濕熱證發(fā)病機制﹑診斷和治療后的表達情況，仍需進一步深入研究。

1邢海倫，胡玲，羅琦，等.幽門螺桿菌相關(guān)胃病脾胃濕熱證患者熱休克蛋白70和白細(xì)胞介素-8的表達.廣東醫(yī)學(xué)，2015，26（1）：133～136.

2Park JW， Lee SH， Go du M，et al.Osteopontin depletion decreases inflammation and gastric epithelial proliferation during Helicobacter pylori infection in mice Lab Invest，2015，95（6）：660～671.

3中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會消化系統(tǒng)疾病專業(yè)委員會.慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診治方案（草案）.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005， 25（2）： 172～175.

4鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2002： 371.

5黃彥彬，張佩青，楊馨，等.腎衰瀉濁丸對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎組織核轉(zhuǎn)錄因子κB與肝細(xì)胞生長因子及骨橋蛋白mRNA表達的影響.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2011（4）：306～309.

6Junnila S， Kokkola A， Mizuguchi T，et al.Gene expression analysis identifies over-expression of CXCL1， SPARC， SPP1， and SULF1 in gastric cancer. Genes Chromosomes Cancer， 2010， 49：28～39.

7蘇薇， 吳會超， 楊瑩瑩，等. 胃泌素與骨橋蛋白在胃癌及癌前病變組織中表達的相關(guān)性. 世界華人消化雜志， 2014， 22（9）：1275～1279.

浙江省溫州市中醫(yī)藥科研課題（2014ZB008）