衛(wèi)玲　干麗敏　朱小軍　張慶明　楊榮（甘肅省腫瘤醫(yī)院婦瘤科　蘭州730050）

新輔助化療對(duì)宮頸鱗癌Bub1、p53的影響*

衛(wèi)玲干麗敏朱小軍張慶明楊榮
（甘肅省腫瘤醫(yī)院婦瘤科蘭州730050）

目的：探究新輔助化療對(duì)宮頸鱗癌中Bub1、p53的影響及其機(jī)理。方法：在我院接受治療的宮頸鱗癌患者40例均采用新輔助化療治療。根據(jù)組織攝取部位不同分為癌旁組和癌中組。觀察治療前后癌旁組和癌中組的Bub1、p53的含量。結(jié)果：癌中組的Bub1均增高，p53均降低，接近癌旁組。結(jié)論：新輔助化療治療宮頸鱗癌臨床療效顯著，其機(jī)理可能是通過(guò)升高Bub1、降低p53含量進(jìn)行調(diào)節(jié)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)起到了抑制的作用。

宮頸鱗癌；新輔助化療；Bub1；p53

宮頸癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在發(fā)展中國(guó)家的婦科發(fā)病率高居第一位，在女性惡性腫瘤中及與腫瘤相關(guān)的女性死亡因素中居第二位［1］，近年來(lái)的研究結(jié)果表明［2］，隨著宮頸癌普查技術(shù)的發(fā)展和普及，早期宮頸癌的發(fā)病率越來(lái)越高且趨向年輕化，約54%的患者年齡＜50歲［3］。目前治療宮頸癌的主要手段是放療、化療和手術(shù)治療。1983年Frie等首次報(bào)道宮頸鱗癌是對(duì)化療（TP方案）敏感的腫瘤，從此，化療就在宮頸癌綜合治療中發(fā)揮著不可替代的作用［4］，所以手術(shù)治療的同時(shí)，新輔助化療也成為當(dāng)前宮頸癌治療過(guò)程中的重要步驟。新輔助化療（NACT）是指在局部治療（手術(shù)或放療）之前給予的全身化療，也叫早期化療。本研究通過(guò)免疫組化法研究分析Bub1、p53的含量變化，進(jìn)而觀察新輔助化療在臨床上治療宮頸鱗癌的有效性，并探討其作用機(jī)理。現(xiàn)報(bào)告如下：

1　資料與方法

1.1一般資料在我院接受治療的宮頸鱗癌患者40例，年齡50～65歲，平均年齡57.3歲；病程0.4～0.6年，平均病程0.5年。所有患者均通過(guò)組織學(xué)方法進(jìn)行確診。

1.2試劑免疫組化試劑盒（Dako envision system labeled polymer，rHRP Anti-mouse and Anti-rabbit k1491），購(gòu)于美國(guó)Dako公司；p53一抗工作液，購(gòu)于上海基因有限公司；Bub1（Rabbit polyclonal to Bub1，aa1-312），購(gòu)于美國(guó)Abcam公司，試驗(yàn)稀釋度為1∶50。

1.3組織來(lái)源對(duì)患者化療前和化療后取病理組織，分為癌旁組織（癌旁組）和癌中組織（癌中組）。

1.4實(shí)驗(yàn)方法對(duì)患者進(jìn)行化療前取樣，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)學(xué)檢查，確定患者患有宮頸鱗癌，并測(cè)定Bub1、p53的含量，化療后對(duì)患者再次取樣，測(cè)定Bub1、p53的含量。其中免疫組織化學(xué)法按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，抗原修復(fù)采用水煮沸法，用小牛血清代替一抗作陰性對(duì)照，用已知宮頸鱗癌陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照。Bub1蛋白陽(yáng)性著色主要定位于細(xì)胞核漿；p53蛋白陽(yáng)性著色主要定位于細(xì)胞核。采用雙人雙盲法觀察結(jié)果，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1患者進(jìn)行新輔助化療前Bub1蛋白在宮頸癌中的表達(dá)Bub1蛋白陽(yáng)性著色主要定位于細(xì)胞核漿，呈黃色或棕黃色顆粒。癌旁組Bub1陽(yáng)性率為87.5%，癌中組Bub1陽(yáng)性率為57.5%。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。見(jiàn)表1、圖1。

表1　新輔助化療前宮頸鱗癌組織及正常宮頸黏膜中Bub1的表達(dá)

圖1　早癌Bub1（400倍）

2.2患者進(jìn)行新輔助化療后Bub1蛋白在宮頸癌中的表達(dá)癌旁組Bub1陽(yáng)性率為87.5%，癌中組Bub1陽(yáng)性率為82.5%。兩組比較無(wú)顯著性差異，P＞0.05。見(jiàn)表2。

表2　新輔助化療后宮頸鱗癌組織及正常宮頸黏膜中Bub1的表達(dá)

2.3患者進(jìn)行新輔助化療前p53蛋白在宮頸鱗癌中的表達(dá)p53蛋白陽(yáng)性著色主要定位于細(xì)胞核，呈黃色或棕黃色顆粒。癌旁組p53陽(yáng)性率為0.0%；癌中組p53陽(yáng)性率為52.5%。兩組比較有顯著性差異，P＜0.01。見(jiàn)表3、圖2。

表3　新輔助化療前宮頸鱗癌組織及正常宮頸黏膜中p53的表達(dá)

圖2　早癌p53（400倍）

2.4患者進(jìn)行新輔助化療后p53蛋白在宮頸鱗癌中的表達(dá)癌旁組p53陽(yáng)性率為0.0%；癌中組p53陽(yáng)性率為5.0%。兩組比較無(wú)顯著性差異，P＞0.05。見(jiàn)表4。

表4　新輔助化療后宮頸鱗癌組織及正常宮頸黏膜中p53的表達(dá)

3　討論

我們采用免疫組化來(lái)分析40例宮頸鱗癌（癌中組織）及40例正常宮頸黏膜（癌旁組織）中Bub1的表達(dá)情況，結(jié)果宮頸鱗癌組織中Bub1表達(dá)明顯低于正常黏膜，兩組之間存在明顯差異。經(jīng)過(guò)新輔助化療后，癌中組織的Bub1表達(dá)明顯增高，接近癌旁組織（P＞0.05）。雖然臨床病例有限，但為臨床治療癌癥提供了重要指導(dǎo)。研究結(jié)果顯示，在正常的宮頸黏膜組織中Bub1蛋白表達(dá)較高，這說(shuō)明一定量的Bub1蛋白可能是維持人類(lèi)正常細(xì)胞有絲分裂所必須的。40例宮頸鱗癌及40例正常宮頸黏膜中p53表達(dá)結(jié)果顯示：正常宮頸黏膜中未發(fā)現(xiàn)p53蛋白，而40例宮頸鱗癌組織中p53陽(yáng)性率為52.5%。經(jīng)過(guò)新輔助化療后，患者癌中組織中p53顯著降低，接近癌旁組織中p53的含量，證明手術(shù)前對(duì)患者進(jìn)行新輔助化療可以明顯改變p53的含量，有利于患者后期的恢復(fù)，提高患者的生存率。

在新輔助化療中，采用紫杉醇通過(guò)抑制微管解聚可阻滯細(xì)胞周期，進(jìn)而殺傷腫瘤。有研究顯示紫杉醇這種殺傷作用有賴(lài)于具有完整功能的紡錘體檢查點(diǎn)。紡錘體檢查點(diǎn)是細(xì)胞周期的最后關(guān)卡［5］。目前，臨床上對(duì)于紫杉醇的用量也不盡相同，有研究報(bào)道，175 mg/m2的紫杉醇對(duì)晚期初次化療的宮頸癌有效率為17%，而250 mg/m2紫杉醇有效率可達(dá)25%［6］，患者化療后的副作用較小，生存率較高，這提示在臨床治療宮頸鱗癌時(shí)，不能單純的應(yīng)用手術(shù)治療，應(yīng)該配合有效的化療，起到抑制腫瘤生長(zhǎng)因子的作用，為手術(shù)后的快速恢復(fù)提供一定的基礎(chǔ)，提高手術(shù)成功率，減輕患者的痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

［1］WHO.Comprehensive cervical cancer control:a guide to essential practice［M］.Switzerland:World Health Organization，2006.1

［2］王悅，魏利.宮頸癌手術(shù)治療進(jìn)展［J］.中華實(shí)用診斷與治療雜志，2012，26（12）:1147-1149

［3］Filippeschi M，Moncini I，Bianchi B，et al.What Kind of surgery for cervical carcinoma［J］？G Chir，2012，33（4）:139-146

［4］徐鳳梅，王敏.宮頸癌及癌前病變組織中COX-2mRNA的表達(dá)及臨床意義［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2009，47（17）:33-34

［5］傅云峰，謝幸，葉大風(fēng).腫瘤與紡錘體檢查點(diǎn)的研究現(xiàn)狀［J］.國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2005，32（1）:3-6

［6］Legge F，F(xiàn)uoco G，Lorusso D，et al.Pharmacotherapy of cervical cancer ［J］.Expert Opin Pharmacother，2010，11（12）:2059-2075

R737.33

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.06.015

甘肅省社會(huì)發(fā)展類(lèi)課題（編號(hào)：2015CGKJ63）

2016-04-03）