馬紀(jì)偉（南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 南陽(yáng) 473058）

高效液相色譜法測(cè)定柴黃口服液中黃芩苷的含量

馬紀(jì)偉
（南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河南 南陽(yáng) 473058）

目的 建立柴黃口服液中黃芩苷含量的測(cè)定方法。方法 選用ZORBAX SB-C18分析柱（5 μm，4.6 mm×150.0 mm），甲醇-0.2%磷酸水溶液（46∶54）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)276 nm，流速1.2 ml/min。結(jié)果 黃芩苷進(jìn)樣量為0.980～2.940 μg時(shí)與峰面積具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=3×106X+16 310，r=0.999 8，平均回收率為100.45%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.13%。結(jié)論高效液相色譜（HPLC）法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、分離效果好，可作為柴黃口服液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

柴黃口服液；黃芩苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

柴黃口服液是由柴胡、黃芩等配制而成的口服液，具有清熱解毒功效，適用上呼吸道感染、感冒發(fā)熱［1］。為了有效控制藥品質(zhì)量，確保制劑療效，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)［2，3］，以制劑中黃芩的有效成分黃芩苷為定量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定黃芩苷的含量，為建立完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1　儀器與試劑

儀器：LC—10ATvp型高效液相色譜儀（日本島津），SPD— 10Avp型紫外檢測(cè)器；N2000型色譜數(shù)據(jù)工作站；METTLER AE240電子天平。黃芩苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110715-201109）；柴黃口服液（山東福膠集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20100509，20100517，20100609）；超純水；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6 mm×150.0 mm），流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（46∶54）；流速：1.2 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2對(duì)照品溶液制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品（105℃下穩(wěn)重的）9.8 mg，置于100 ml容量瓶中，加入70%甲醇溶解并稀釋至刻度，制成1 ml含0.098 mg的溶液，即得。

2.3供試品溶液制備

精密量取柴黃口服液2 ml，置于100 ml容量瓶中，加入70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取濾液，作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液1 μl，5 μl，10 μl，15 μl，30 μl，以2.1的色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3× 106X+16 310，r=0.999 8。表明黃芩苷在0.980～2.940 μg之間線性良好。

2.5空白試驗(yàn)

按處方比例和制法，自制不含黃芩苷的樣品，并按供試品溶液的制法制成空白對(duì)照溶液。依法進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果空白對(duì)照溶液在黃芩苷保留時(shí)間處無(wú)色譜峰，表明在實(shí)驗(yàn)條件下，其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

A.黃芩苷對(duì)照品　B.柴黃口服液　C.缺黃芩苷的陰性樣品1.黃芩苷峰圖1HPLC色譜圖

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（20100509）的供試品溶液，按供試品溶液制備方法，依上述色譜條件，分別在0，2，4，6，8，10，12 h進(jìn)樣20 μl，積分值無(wú)明顯變化，平均峰面積為716 561，RSD=0.91%，表明黃芩苷含量在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7精密度試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液，每次20 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果平均峰面積為717 893，RSD=1.21%，表明儀器精密度良好。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20100509），精密量取6份，按上述色譜條件測(cè)定，平均含量為1.832 mg/ml，RSD=1.17%，表明該方法符合重復(fù)性要求。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取6份1 ml已知含量樣品（批號(hào)：20100509，測(cè)得黃芩苷含量為1.832 mg/ml），分別精密加入黃芩苷對(duì)照品適量，按照樣品含量測(cè)定方法測(cè)定黃芩苷含量。結(jié)果表明，本法準(zhǔn)確度較高（見(jiàn)表1）。

表1　黃芩苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.10樣品測(cè)定

取3批樣品，分別精密稱取，依法制成供試品溶液，均以20 μl進(jìn)樣，分別測(cè)定吸收峰面積，外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　柴黃口服液中黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果（mg/ml）

3　討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

取黃芩苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解后，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在276 nm和274 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收，由于在274 nm處呈現(xiàn)一個(gè)很小的未知溶劑峰，故選擇276 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2流動(dòng)相選擇

HPLC法測(cè)定黃芩苷含量多以甲醇-磷酸水溶液為流動(dòng)相。我們對(duì)HPLC分析時(shí)的流動(dòng)相系統(tǒng)組成和比例做了比較，對(duì)溶劑系統(tǒng)進(jìn)行選擇，結(jié)果顯示，在甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2%冰醋酸等流動(dòng)相中，甲醇-0.2%磷酸（46∶54）分離黃芩苷的效果最好，故選擇其為流動(dòng)相。

3.3黃芩苷含量指標(biāo)確定

黃芩為柴黃口服液的主藥，黃芩苷為黃芩的主要成分，故可以將黃芩苷作為本藥的質(zhì)量控制定量指標(biāo)。本文采用高效液相色譜法，建立了測(cè)定該口服液中黃芩苷的方法，具有簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于柴黃口服液的質(zhì)量控制。

［1］王筠默.中藥藥理學(xué)［M］.上海：科學(xué)技術(shù)出版社，1984.

［2］呂東，楊鳳梅.HPLC測(cè)定潤(rùn)肺止咳膠囊中黃芩苷含量［J］.中成藥，2003，25（7）：599-600.

［3］唐曉霞.銀黃膠囊中黃芩苷的含量測(cè)定［J］.中國(guó)藥師雜志，2005，8（11）：913-914.

R284.1

B

1671-1246（2016）15-0097-02