楊宏櫻

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·論著·

N-cadherin、E-cadherin及p63在宮頸癌中的表達(dá)及相關(guān)性

楊宏櫻

目的研究N-cadherin、E-cadherin以及p63在宮頸癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素之間的相關(guān)性。方法采用免疫組化檢測正常宮頸15例、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)30例、50例宮頸癌組織中的N-cadherin、E-cadherin及p63的表達(dá)。結(jié)果N-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達(dá)率逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而E-cadherin和p63在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達(dá)率則逐漸降低差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，N-cadherin的表達(dá)與腫瘤的分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論N-cadherin的高表達(dá)及E-cadherin、p63的低表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，對(duì)上述因子的調(diào)控有可能成為宮頸癌治療的新的靶點(diǎn)。

宮頸腫瘤；N-cadherin；E-cadherin；p63

宮頸癌是婦科臨床上的常見病，目前仍居女性惡性腫瘤中的第二位，是女性腫瘤防治的重點(diǎn)疾病之一。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程較為復(fù)雜，目前多數(shù)研究認(rèn)為其與機(jī)體內(nèi)基因及分子水平的變化有密切的關(guān)聯(lián)[1]。同時(shí)宮頸癌細(xì)胞對(duì)組織的侵襲以及轉(zhuǎn)移是目前導(dǎo)致宮頸癌患者病情惡化的主要原因之一[2]。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是指在一定的病理生理狀態(tài)下上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為間充質(zhì)細(xì)胞的一種現(xiàn)象。文獻(xiàn)報(bào)道上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與了上皮細(xì)胞起源惡性腫瘤的侵襲以及轉(zhuǎn)移等病理過程[3,4]。鈣黏蛋白(cadherin)轉(zhuǎn)換是目前發(fā)現(xiàn)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要機(jī)制之一，其表現(xiàn)為上皮型鈣黏蛋白(E-cadherin)向神經(jīng)型鈣黏蛋白(N-cadherin)進(jìn)行轉(zhuǎn)化[5,6]。而p63已被證實(shí)可在細(xì)胞分化的過程中通過Wnt信號(hào)通路對(duì)EMT過程發(fā)揮一定的調(diào)控作用[7-9]。筆者所見目前關(guān)于宮頸癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究不多，本研究通過研究N-cadherin、E-cadherin和p63在宮頸癌中的表達(dá)，進(jìn)一步探討上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料宮頸癌組：收集2009至2014年我院宮頸鱗狀細(xì)胞癌石蠟包埋標(biāo)本50例，患者年齡24～80歲，中位年齡54歲。術(shù)前均未經(jīng)放、化療或其他治療。按2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期33例，Ⅱ期17例；按有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例；按腫瘤細(xì)胞分化級(jí)別分為低分化、中分化、高分化，分別為21、19、10例。宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)石蠟包埋標(biāo)本30例，其中CINⅡ級(jí)和Ⅲ級(jí)各15例，患者年齡38～66歲，中位年齡48歲。另取同期在我院因子宮肌瘤切除子宮患者的正常宮頸標(biāo)本15例，患者年齡32～53歲，中位年齡為40歲。所有診斷均由兩位以上病理醫(yī)師確診。

1.2免疫組化采用Envision二步免疫組化染色法。N-cadherin、E-cadherin抗體購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，鼠抗人p63單克隆抗體購于Santa Cruz 公司。Envision二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6000)和DAB酶底物顯色試劑盒等相關(guān)試劑購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。按Envision二步法免疫組化檢測試劑盒(PV-6000)說明操作，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。已知的陽性對(duì)照片作陽性對(duì)照，PBS代替第一抗體作陰性對(duì)照。所有切片均采用同一批試劑完成。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)N-cadherin著色部位為細(xì)胞質(zhì)，E-cadherin為細(xì)胞膜，p63為細(xì)胞核，呈棕黃色或棕褐色。上述部位如有棕黃色顆粒即判定為陽性。在隨機(jī)雙盲的條件下，兩名高年資病理科醫(yī)師對(duì)切片觀察，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡(×400倍)，200個(gè)細(xì)胞/視野，共計(jì)1 000個(gè)細(xì)胞并取其平均數(shù)。根據(jù)目前應(yīng)用較為廣泛的免疫組化積分標(biāo)準(zhǔn)判斷[3]：(1)染色強(qiáng)度：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分，陽性細(xì)胞數(shù)：陰性0分，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%1分，11%～50%2分，51%～80%3分，>80%4分。(2)采用半定量積分對(duì)各組織行陽性/陰性劃分。半定量積分=染色強(qiáng)度評(píng)分×陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分。其中半定量積分0～2分定位陰性(-)，3～4分定位弱陽性(+)，4～6分定為中陽性(++)，>6分定為強(qiáng)陽性(+++)。+～+++均為陽性，++～+++為過表達(dá)，-～+為表達(dá)缺失或低表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料的兩兩比較采用χ2檢驗(yàn)，多組計(jì)數(shù)資料間的比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1N-cadherin、E-cadherin和p63在3組宮頸組織的表達(dá)情況

2.1.1N-cadherin在3組宮頸組織中的表達(dá)情況:在15例正常宮頸組織中N-cadherin的陽性表達(dá)率為6.67%，在30例CIN組織中的陽性表達(dá)率為33.33%，在50例宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為52.00%，三者呈逐漸遞增趨勢。正常宮頸組織組與CIN組的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.22，P<0.05)，宮頸癌組的陽性表達(dá)率與正常宮頸組織組及CIN組均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.06、4.95，P<0.05)。見表1,圖1～3。

2.1.2E-cadherin在3組宮頸組織中的表達(dá)情況:E-cadherin在正常宮頸組織及CIN中陽性率分別為73.3%、40.00%，而宮頸癌組織中E-cadherin的陽性率為8.0%，陽性表達(dá)率逐漸降低。宮頸癌與正常宮頸組織以及CIN陽性表達(dá)率間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.10、9.13，P<0.05)，正常宮頸組和CIN組織中N-cadherin的表達(dá)差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.06，P<0.05)。見表2,圖4～6。

表1　N-cadherin在3組宮頸組織中的表達(dá)情況　例

注：與正常宮頸比較，*P<0.05；與CIN比較，#P<0.05

圖1 正常宮頸組織N-cadherin表達(dá)陰性(免疫組化×100) 圖2 宮頸CINⅢ級(jí)N-cadherin少部分上皮細(xì)胞表達(dá)陽性(免疫組化×200)圖3 宮頸癌N-cadherin大部分癌細(xì)胞表達(dá)陽性(免疫組化×200)

表2　E-cadherin在3組宮頸組織中的表達(dá)情況　例

注：與正常宮頸比較，*P<0.05；與CIN比較，#P<0.05

圖4 正常宮頸組織E-cadherin大部分表達(dá)陽性(免疫組化×200)圖5 宮頸CINⅢ級(jí)E-cadherin少部分上皮細(xì)胞表達(dá)陽性(免疫組化×200)圖6 宮頸癌E-cadherin幾乎不表達(dá)(免疫組化×100)

2.1.3p63在3組宮頸組織中的表達(dá)情況：在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中，p63的陽性表達(dá)率分別為60.00%、43.33%、6.00%，呈逐漸降低趨勢。正常宮頸組與CIN組、宮頸癌組的陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.68、14.13，P<0.05)，而CIN組與宮頸癌組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.64，P>0.05)。見表3,圖7～9。

表3　p63在3組宮頸組織中的表達(dá)情況　例

注：與正常宮頸比較，*P<0.05

2.2N-cadherin、E-cadherin和p63表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌臨床病理特征的關(guān)系N-cadherin在宮頸癌組織中的表達(dá)與腫瘤的分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)，而E-cadherin和p63在宮頸癌組織中的表達(dá)與腫瘤的分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)(P>0.05)。見表4。

圖7 正常宮頸組織p63大部分表達(dá)陽性(免疫 組化×100)圖8 宮頸CINⅢ級(jí)p63少部分上皮細(xì)胞表達(dá)陽性(免疫組化×200)圖9 宮頸癌p63幾乎不表達(dá)(免疫組化×100)

表4　N-cadherin、E-cadherin和p63表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌臨床病理特征的關(guān)系　例

3　討論

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化確切的定義是在某些特定因素的作用下上皮細(xì)胞的極性、緊密連接等逐漸喪失而細(xì)胞骨架出現(xiàn)重構(gòu),從而使其變形、遷移以及運(yùn)動(dòng)等能力增強(qiáng),轉(zhuǎn)化成與間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)及特性相似的一類細(xì)胞、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化主要分為三種類型：(1) 胚胎發(fā)育過程中的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化；(2)炎癥、創(chuàng)傷、組織纖維化等因素作用下的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化；(3)上皮細(xì)胞起源腫瘤在侵襲以及轉(zhuǎn)移過程中的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的標(biāo)記物包括：(1)上皮細(xì)胞標(biāo)記蛋白如E-cadherin、β-catenin等；(2)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記蛋白如N-cadherin、Vimentin；(3)介導(dǎo)細(xì)胞骨架重構(gòu)的Rho小GTP酶以及轉(zhuǎn)錄因子如Snail、Twist和Slug等[10]。

宮頸癌的侵襲以及轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜、多步驟、多基因作用下的過程，包括癌細(xì)胞的失控性增殖，從其原發(fā)病灶的脫離,進(jìn)一步結(jié)合并溶解其細(xì)胞外的基質(zhì),最后經(jīng)細(xì)胞間的裂隙中擴(kuò)散,通過淋巴管、血管最終出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果表明E-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達(dá)卻逐漸降低，而N-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達(dá)逐漸升高，N-cadherin的表達(dá)與腫瘤的分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。E-cadherin是維持上皮細(xì)胞之間黏附功能的主要分子標(biāo)記物，其在正常生理活性下應(yīng)該是維持一種正常的表達(dá)水平。在上皮細(xì)胞間通過E-cadherin與β-catenin的相互結(jié)合形成分子復(fù)合體，能夠防止癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程中，E-cadherin分子低表達(dá)或者缺失不僅可使細(xì)胞間黏附能力下降，而且還能夠促進(jìn)β-catenin進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，進(jìn)一步激活與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，并最終提高癌細(xì)胞的侵襲以及遷移能力[11]。Li等[12]研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin的表達(dá)在CIN組織中較正常宮頸組織的表達(dá)明顯減少，而且隨著CIN級(jí)別的不斷增高其表達(dá)亦呈明顯降低趨勢。呂紅梅等[13]證實(shí)E-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的表達(dá)逐漸降低，與本研究結(jié)果一致。而在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程中N-cadherin起的作用卻與E-cadherin的作用相反，其可提高細(xì)胞的粘附力促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。N-cadherin是一類跨膜糖蛋白，其依賴鈣在細(xì)胞黏附中發(fā)揮作用，具有親同種抗原的特性。N-cadherin的作用之一是提高細(xì)胞的移動(dòng)能力，因此當(dāng)腫瘤細(xì)胞中的N-cadherin的表達(dá)升高，就意味著其獲得了更強(qiáng)的侵襲以及轉(zhuǎn)移能力。此外，N-cadherin的高表達(dá)還可促進(jìn)原癌基因c-erbB1蛋白產(chǎn)物-生長因子受體的表達(dá)。當(dāng)生長因子與其結(jié)合后促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化，從而促進(jìn)腫瘤的生長。這也可以解釋本研究中N-cadherin在宮頸癌組織的表達(dá)較CIN和正常宮頸組織中高，同時(shí)有轉(zhuǎn)移以及高分期的宮頸癌組織其N-cadherin較無轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織表達(dá)明顯升高。王國平等[14]研究發(fā)現(xiàn)在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的N-cadherin陽性表達(dá)率逐漸上升，且其表達(dá)與臨床分期以及組織學(xué)分級(jí)有關(guān)。張儒英等[15]報(bào)道E-cadherin在CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)減弱，而N-cadherin表達(dá)增強(qiáng)，E-cadherin與N-cadherin的表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)。上述研究與本研究結(jié)果相似，進(jìn)一步證實(shí)了本研究的可信度。

p63是P53家族的一個(gè)成員，其對(duì)上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的形成起著一定的調(diào)節(jié)作用，廣泛表達(dá)與人體各組織上皮中的基底層細(xì)胞內(nèi)，促進(jìn)間葉以及上皮組織的正常分化以及形態(tài)學(xué)的發(fā)生。本研究結(jié)果表明p63在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達(dá)率逐漸降低，提示p63對(duì)宮頸癌的分化以及增殖也起著一定的調(diào)節(jié)作用[16]。有文獻(xiàn)報(bào)道Snail以及Slug轉(zhuǎn)錄因子能夠通過下調(diào)p63基因的表達(dá)以到達(dá)促進(jìn)癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程[17]。江文靜等[18]聯(lián)合檢測N-cadherin、E-cadherin和p63在宮頸癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)正常宮頸組織不表達(dá)N-cadherin，而E-cadherin和p63反而呈強(qiáng)陽性表達(dá)，N-cadherin強(qiáng)陽性表達(dá)的宮頸癌患者其生存期較陰性者短，而E-cadherin和p63陰性表達(dá)的患者其生存期較強(qiáng)陽性者長。提示宮頸癌組織中N-cadherin的高表達(dá)以及E-cadherin、p63的低表達(dá)與其侵襲和轉(zhuǎn)移可能存在一定的關(guān)聯(lián)。嚴(yán)浩等[19]證實(shí)宮頸癌組織中N-cadherin、E-cadherin和p63表達(dá)兩兩具有相關(guān)性，且與宮頸癌的分化、臨床分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移以及預(yù)后等因素有一定相關(guān)性。但是上述研究僅檢測宮頸癌組織和正常宮頸組織，但是與其不同之處在于本研究中在正常宮頸組織、CIN、宮頸癌組織中均進(jìn)行了上述三個(gè)指標(biāo)的檢測，所得出的結(jié)果仍然與上述研究一致，具有更高的可信度。但是本研究有E-cadherin和p63在宮頸癌組織中檢測的表達(dá)過低，加之樣本量有限故而無法進(jìn)一步分析兩者與臨床病理因素之間的相關(guān)性。

綜上所述，N-cadherin在正常宮頸組織、CIN以及宮頸癌中的陽性表達(dá)率逐漸升高，而E-cadherin和p63則逐漸降低，N-cadherin的表達(dá)與腫瘤的分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。上述結(jié)果提示上皮間質(zhì)化在宮頸癌中的發(fā)生、發(fā)展、侵襲以及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用，因此上皮間質(zhì)化過程的調(diào)控有可能成為宮頸癌治療新的靶點(diǎn)，這需要后期更加深入的分子、基因水平的研究。

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Expressions of N-cadherin, E-cadherin and p63 in cervical squamous cell carcinoma and their correlation

YANGHongying.

CentralHospitalofDazhouCity,Sichuan,Dazhou635000,China

ObjectiveTo observe the expressions of N-cadherin, E-cadherin and p63 protein in cervical spuamous cell carcinoma, and to explore the correlation between their expressions and clinicopathological factors.MethodsThe expression levels of N-cadherin,E-cadherin and p63 were detected by immunohistochemisty in 15 normal cervical tissues, 30 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and 50 cases of cervical spuamous cell carcinoma.ResultsThe positive expression rates of N-cadherin in normal cervical tissues, CIN and cervical spuamous cell carcinoma were gradually increased in order, there were significant differences among them (P<0.05). However the positive expression rates of E-cadherin and p63 in normal cervical tissues, CIN and cervical spuamous cell carcinoma were gradually decreased in order, there were significant differences among them (P<0.05).The expression levels of N-cadherin were closely correlated to staging of tumor,pathological fractionation and lymph node metastasis.ConclusionThe high-expression of N-cadherinh and low-expression of E-cadherin, p63 may play an important role in the pathogenesis,development, invasion and metastasis of cervical cancer, thus, the regulation of these factors may become an new target for cervical cancer therapy.

cervix neoplasms; N-cadherin; E-cadherin; p63

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.17.001

635000四川省達(dá)州市中心醫(yī)院

R 711.74

A

1002-7386(2016)17-2565-04

2016-03-11)