常紅星，竇　霞

（1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院，甘肅　武威　733000；2.甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，甘肅　蘭州　730000）

甘肅紋黨參指紋圖譜研究*

常紅星1，竇霞2

（1.甘肅省武威市第二人民醫(yī)院，甘肅武威733000；2.甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，甘肅蘭州730000）

研究紋黨參的指紋圖譜。應用高效液相色譜法。通過指紋圖譜的分析研究，可以作為黨參質量控制的方法。

黨參；紋黨參；指紋圖譜

黨參為桔梗科植物Codonopsis pilosula（Franch）Nann.f。具有補中益氣，健脾益肺的功能，用于脾肺虛弱，氣短心悸，食少便溏，虛喘咳嗽，內熱消渴［1］。黨參的商品有西黨、東黨、潞黨、條黨及白條黨（紋黨）。

指紋圖譜技術自20世紀70年代出現(xiàn)發(fā)展至今，已經得到了突飛猛進的發(fā)展，目前由最初的研究階段進入到實際應用階段。并且，這項技術從總體上對中藥的質量控制起到了推動作用。中藥指紋圖譜由于其能夠從整體上來表征中藥的內在特征，目前被國際上公認為控制天然藥物質量的有效手段之一［2］，為真正實現(xiàn)中藥走向世界提供了極為有利的質量保證。

我們用高效液相色譜法對甘肅產紋黨參進行了指紋圖譜研究該研究結果對紋黨參道地性研究也具有重要意義。

1　儀器與試藥

1.1實驗儀器

LC-20AD高效液相色譜儀 （日本島津公司）：SPD-M20D二極管陣列檢測器；BP210S電子分析天平（Sarlorius公司）；SK7200H超聲波清洗器（上?？茖С晝x器有限公司）；IECMicromax離心機 （美國ThermoElectron公司）。

1.2實驗材料

黨參，產于甘肅渭源縣，由蘭州市冠蘭中藥飲片廠提供，經楊錫倉主任中藥師鑒定為來源于桔梗科的黨參；黨參炔苷對照品：（批號：110796-200514，購買自中國生物制品藥品檢定所）。乙腈（色譜純），水（超純水），其余試劑均為分析純。

2　色譜條件及檢測波長的選擇

2.1色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 （色譜柱：Thermo Hypersil Gold-C18：150×4.6mm，5μm）；流速為1mL？min-1；以乙腈為流動相A，水為流動相B，洗脫程序見表1：

表1　色譜條件

2.2檢測波長選擇

黨參中主要成分黨參炔苷最大吸收波長為268nm。［3］為全面反映樣品中的主要成分，經218 nm、230nm、245nm、275nm、300nm五個波長測定指紋圖譜的比較分析（如圖1～6所示），由于在268nm波長的指紋圖譜中，較好地體現(xiàn)各主要峰，且各峰分離度好，基線較平穩(wěn)，故確定268nm波長下為黨參指紋圖譜的檢測波長。

圖1　218nm波長所測指紋圖譜

圖2　230nm波長所測指紋圖譜

圖3　245nm波長所測指紋圖譜

圖4　268nm波長所測指紋圖譜

圖5　285nm波長所測指紋圖譜

圖6　300nm波長所測指紋圖譜

2.3指紋圖譜系統(tǒng)適應性及延長時間檢測，如圖7～10所示。

圖7　黨參炔苷參照物指紋圖譜

圖9　空白溶劑指紋圖譜

圖10　延長時間120分鐘指紋圖譜

2.3.1參照物溶液的制備

取黨參炔苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含50μg的對照品溶液，即得［4］。

2.3.2供試品溶液的制備

取紋黨參約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，超聲30min，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，即得。（因含量測定研究中考察過本品供試品制備方法，故本研究中不再重復。）

2.3.3精密度試驗

取紋黨參，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品，連續(xù)進樣6次測定。結果表明，各供試品溶液中共有峰的保留時間及各主要峰 （占總峰面積5%以上）的峰面積基本保持一致（RSD＜3%），以第1次進樣所得指紋圖譜做為對照圖譜計算相似度，結果相似度均不小于0.95，符合指紋圖譜的相關技術要求。表明該方法精密度良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗考察

取紋黨參，按正文中供試品溶液制備方法制備供試品溶液，每隔3h測定一次指紋圖譜，共測6次，以0h所得指紋圖譜為對照，計算相似度，各指紋圖譜相似度結果均不小于0.99，符合指紋圖譜相關技術要求（應不小于0.95）。表明供試品溶液15h內穩(wěn)定。

2.3.5重復性試驗

取紋黨參，按正文中供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，同法制備供試品溶液6份，依法測定，計算相似度，相似度結果均不小于0.99，符合指紋圖譜的技術要求（不小于0.95），說明本方法重復性良好。

2.3.610批紋黨參的測定及對照指紋圖譜的獲得

取10批紋黨參樣品，按正文中供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，依法測定，計算相似度，用相似度軟件以這10批樣品指紋圖譜為基礎獲得“共有模式”作為黨參對照指紋圖譜，如圖11～12所。

圖11　10批紋黨參指紋圖譜共有模式

圖12　10批紋黨參指紋圖譜共有模式

根據(jù)10批紋黨參指紋圖譜與對照指紋圖譜計算相似度，根據(jù)多批次數(shù)據(jù)積累，確定紋黨參指紋圖譜與對照指紋圖譜經相似度軟件計算，相似度應不低于0.80。

3　討論

本試驗過程中，為全面反映紋黨參的指紋特征，分別選用不同波長檢測樣品，經過在218nm、230 nm、245nm、275nm、300nm五個波長所測定指紋圖譜的比較，發(fā)現(xiàn)218nm及230nm基線較差，300nm波長下峰較少，而且峰面積非常小，245nm及275nm基線較平穩(wěn)，峰較多，但是相比較，268nm波長下的峰面積較大，能夠較好地體現(xiàn)樣品各主要峰，且各峰分離度好，基線較平穩(wěn)，故最終確定268nm波長為黨參指紋圖譜的檢測波長。

通過以上各項試驗，指紋圖譜的分析，作為紋黨參主要鑒別手段，可以為紋黨參質量控制提供依據(jù)［5］。

［1］ 封士蘭，胡芳弟，劉欣，等.HPLC研究甘肅產白條黨參指紋圖譜［J］.中成藥，2005（07）745-748.

［2］ 邵建強.中藥指紋圖譜的研究進展［J］.中草藥，2009（06）994-997.

［3］ 竇霞，甘肅黨參超微粉的制備及其質量標準研究［D］.南京：中醫(yī)藥大學，2014（學位論文）.

［4］ 孫永成，竇霞，尚強，等，桂枝茯苓膠囊（精制）多成分指紋圖譜的研究［J］.世界科學技術（中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2010，12 （2）：294-297.

［5］ 武果桃，賀東昌，張李俊，劉紅霞，任杰，孟冬霞.中藥黨參的HPLC指紋圖譜研究［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2009（05）54-56.

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2014年度甘肅中醫(yī)學院中青年科研基金（ZQ2014-31）。