林大鈞趙　凱

（1.廣東省湛江市公安局，廣東 湛江524022；2.廣東省公安廳刑事技術(shù)中心，廣東 廣州510050）

分段法在提取大體積接觸類(lèi)檢材中的應(yīng)用

林大鈞1趙凱2

（1.廣東省湛江市公安局，廣東 湛江524022；2.廣東省公安廳刑事技術(shù)中心，廣東 廣州510050）

在實(shí)際檢案中，實(shí)驗(yàn)室常會(huì)受理體積較大的接觸類(lèi)檢材，這類(lèi)檢材具有需要檢驗(yàn)面積大、犯罪嫌疑人接觸的位置無(wú)法準(zhǔn)確判斷、脫落細(xì)胞不易收集的特點(diǎn)。利用分段法提取，結(jié)合D盾超敏提取試劑盒提取DNA是檢驗(yàn)大體積接觸性檢材的有效方法。

分段法大體積接觸類(lèi)檢材DNA

接觸類(lèi)檢材即與人體接觸后有人體的生物樣本（脫落細(xì)胞）殘存的檢材。其特點(diǎn)是：載體大、易污染、易降解、DNA含量少，很難將載體上的DNA有效地進(jìn)行富集等。另外，接觸性檢材接觸細(xì)胞量的多少與接觸人皮膚的干濕程度、接觸的力度、時(shí)間等多種因素有關(guān)，不同類(lèi)型至同一類(lèi)型的接觸性檢材提取的DNA量差別也很懸殊［1］。

在實(shí)際檢案中，實(shí)驗(yàn)室常會(huì)受理木棍、鋤頭等體積較大的接觸類(lèi)檢材，這類(lèi)檢材具有需要檢驗(yàn)面積大、犯罪嫌疑人接觸的位置無(wú)法準(zhǔn)確判斷、脫落細(xì)胞不易收集，用常規(guī)方法檢出率低等特點(diǎn)。如果單憑經(jīng)驗(yàn)，在檢材上提取幾個(gè)點(diǎn)，通常很難檢出犯罪嫌疑人遺留的DNA。還需反復(fù)檢驗(yàn)，所耗時(shí)間較長(zhǎng)，不能及時(shí)為案件偵查提供線索。本文對(duì)案件檢驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)，使用分段法提取，即把檢材按10cm的長(zhǎng)度分成若干小段，用脫落細(xì)胞粘取器分別粘取，結(jié)合超敏DNA提取試劑盒（上?；菸纳锛夹g(shù)有限公司）檢驗(yàn)，效果良好，檢出率較高，破獲多起重大案件。

1　案例資料

案例1：2015年7月1日，在廉江雅塘鎮(zhèn)菠蘿村的路上發(fā)現(xiàn)一具未知名男尸，經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)勘查，受害人被傷害致死，在現(xiàn)場(chǎng)提取一段懷疑是作案工具的斷裂木棍（如圖1所示），全長(zhǎng)約為1m，直徑為8cm，斷裂的一端有可疑血跡。

圖1　現(xiàn)場(chǎng)提取的木棍

案例2：2015年5月4日，湛江市遂溪縣界炮鎮(zhèn)的獨(dú)居老人楊某群在自家舊屋被人殺死，經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)勘查判斷，案發(fā)時(shí)受害人與犯罪嫌疑人曾發(fā)生打斗，在現(xiàn)場(chǎng)提取一根長(zhǎng)約96cm的樹(shù)枝送檢。

2　DNA提取及檢驗(yàn)

2.1脫落細(xì)胞的采集

案例1中的木棍與案例2中的樹(shù)枝均無(wú)法準(zhǔn)確判斷犯罪嫌疑人的接觸部位，用分段法按每段10cm的長(zhǎng)度分為10段，使用脫落細(xì)胞粘取器（長(zhǎng)春博坤生物科技有限公司）進(jìn)行粘取，粘取后用鑷子將粘取器上的膠片放入離心套管中。

2.2DNA提取

將裂解液A、裂解液B和PK（10mg/ml）按比例5∶1∶0.5混勻，取160μl緩慢滴在檢材上，蓋上管蓋。56℃加熱20分鐘，再99℃10分鐘。10000rpm離心2分鐘，開(kāi)蓋加入吸附液200μl，10000rpm離心1分鐘棄除離心套管，加入吸附液950μl和混勻后的吸附珠16μl，室溫靜置15分鐘8000rpm離心1分鐘，充分去除上清液，加入-20℃漂洗液750μl，充分混勻。8000rpm離心1分鐘，充分去除上清液，開(kāi)蓋56℃烘干吸附珠1分鐘。加入15μl洗脫液，振蕩混勻，把液體用力甩到管底，56℃加熱15分鐘后備用。

2.3擴(kuò)增及檢測(cè)

使用Promega公司的PowerPlex18D復(fù)合擴(kuò)增試劑盒對(duì)提取后的DNA懸液進(jìn)行PCR擴(kuò)增（使用9700擴(kuò)增儀，擴(kuò)增體系為10μl，DNA模板量為6μl，循環(huán)數(shù)為29）。擴(kuò)增后使用AB-3100/3500基因分析儀對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，通過(guò)GeneMapper3.2分析軟件分析結(jié)果。

3　結(jié)果

案例1：在送檢的現(xiàn)場(chǎng)木棍b、c段成功檢出男性基因型（如圖2所示），平均峰高值在5000左右，成功比中村中可疑人員葉某，在DNA證據(jù)面前，葉某對(duì)其犯罪事實(shí)供認(rèn)不諱。

圖2　現(xiàn)場(chǎng)提取的木棍b段上提取的脫落細(xì)胞

案列2：在送檢的樹(shù)枝d段脫落細(xì)胞檢出犯罪嫌疑人楊某基因分型，在送檢現(xiàn)場(chǎng)提取的樹(shù)枝a段脫落細(xì)胞檢出死者楊某群的基因分型。犯罪嫌疑人楊某被抓獲后，供認(rèn)了其案發(fā)時(shí)曾拿樹(shù)枝與死者打斗，最后把受害人打死的的犯罪事實(shí)。

4　討論

在實(shí)際檢案工作中，作案工具等遺留有犯罪嫌疑人脫落細(xì)胞的接觸性檢材越來(lái)越受到重視，如何在作案工具上收集到足夠的細(xì)胞模板和使用合適的DNA檢驗(yàn)方法都非常重要。特別是檢驗(yàn)大體積的接觸類(lèi)檢材時(shí)，如何能夠做到不漏檢，粘取的脫落細(xì)胞足夠量，是成功檢驗(yàn)的關(guān)鍵。本文中的兩宗案例檢驗(yàn)的對(duì)象均為大體積的接觸類(lèi)檢材，無(wú)法準(zhǔn)確判斷犯罪嫌疑人接觸的位置，在這種情況下，利用分段法提取，能做到全面細(xì)致，保證收集到足夠的犯罪嫌疑人遺留的脫落細(xì)胞。另外，使用D盾超敏提取試劑盒提取DNA，能明顯提高現(xiàn)場(chǎng)接觸類(lèi)檢材的檢出率，D盾超敏提取試劑盒是現(xiàn)場(chǎng)微量檢材檢驗(yàn)的理想方法，其提取原理是改良傳統(tǒng)硅珠法，適用于各類(lèi)復(fù)雜條件的接觸類(lèi)檢材，甚至指紋等超微量檢材的DNA檢驗(yàn)。

綜上所述，利用分段法提取，結(jié)合D盾超敏提取試劑盒提取DNA是檢驗(yàn)大體積接觸性檢材的有效方法。

［1］楊電，劉超，徐曲毅，等.DNA IQ磁珠法結(jié)合Maxwell 16TM自動(dòng)儀提取接觸DNA［J］.刑事技術(shù)，2011（3）:4.