苗露楊海瀾韓方馬惠靜秦靜

OX40L和ICAM-1在子癇前期患者外周血中的表達(dá)水平及意義

苗露①楊海瀾②韓方②馬惠靜②秦靜②

目的：通過檢測(cè)子癇前期患者外周血中協(xié)同刺激分子（OX40L）和細(xì)胞間黏附分子（ICAM-1）的水平，探討OX40L和ICAM-1在子癇前期發(fā)生機(jī)制中的作用。方法：選擇本院2014年4月-2014年8月收治的40例重度子癇前期（重度子癇前期組）和35例正常孕婦（對(duì)照組）為研究對(duì)象，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定其血清中OX40L和ICAM-1的水平，比較兩組患者細(xì)胞因子水平。結(jié)果：重度子癇前期組OX40L、ICAM-1在外周血的表達(dá)與對(duì)照組比較均有所增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：重度子癇前期組OX40L、ICAM-1的表達(dá)增強(qiáng)可能與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

OX40L； CAM-1； 外周血； 重度子癇前期； 發(fā)病機(jī)制

The Expression Levels and Significances of OX40L and ICAM-1 in Peripheral Blood of Preeclampsia Patients

First-author's address：Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

子癇前期是妊娠期特有的高血壓疾病，是指妊娠20周后出現(xiàn)收縮壓≥140 mm Hg和/或舒張壓≥90 mm Hg伴蛋白尿≥0.3 g/24 h，或隨機(jī)尿蛋白（+）的癥狀。血壓和尿蛋白持續(xù)升高，發(fā)生母體臟器功能不全或胎兒并發(fā)癥時(shí)即發(fā)展成為重度子癇前期。重度子癇前期涉及孕婦的各個(gè)系統(tǒng)，是嚴(yán)重危害母嬰健康的妊娠期并發(fā)癥，其病因與發(fā)病機(jī)制尚未闡明。免疫學(xué)病因與發(fā)病機(jī)制是近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的重點(diǎn)［1］。近年來，有部分學(xué)者將免疫系統(tǒng)疾病的研究重點(diǎn)集中于協(xié)同刺激分子（OX40L）與細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）在免疫機(jī)制中的作用，研究發(fā)現(xiàn)OX40L在乳腺癌、原發(fā)性干燥綜合征、狼瘡、過敏性紫癜及Graves病等眾多免疫疾病中起重要作用［2-13］。ICAM-1是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中

重要分子，是免疫機(jī)制中不可或缺的角色［14］。免疫系統(tǒng)疾病患者體內(nèi)OX40L與ICAM-1的表達(dá)水平高于正常人，由此推測(cè)OX40L與ICAM-1可能參與了免疫系統(tǒng)疾病的發(fā)生與發(fā)展。由于眾多理論研究認(rèn)為重度子癇前期的發(fā)生與免疫因素有關(guān)，OX40L 與ICAM-1可能也參與了重度子癇前期的發(fā)生與發(fā)展。目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道OX40L與重度子癇前期的關(guān)系。本研究利用已建立的特異性檢測(cè)人OX40L 和ICAM-1的ELISA試劑盒檢測(cè)40例重度子癇前期患者和35例正常妊娠孕婦外周血中OX40L和ICAM-1的水平，探討OX40L和ICAM-1在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年4月-2014年8月山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院產(chǎn)科收治的重度子癇前期患者40例為重度子癇前期組，同期正常妊娠晚期孕婦35例為對(duì)照組。重度子癇前期組的納入標(biāo)準(zhǔn)為：?jiǎn)翁ト焉?，診斷為重度子癇前期，無妊娠合并癥，既往無高血壓史、腎病史與糖尿病史。重度子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》（第8版）［15］。對(duì)照組的納入標(biāo)準(zhǔn)為：?jiǎn)翁?、足月妊娠，無妊娠并發(fā)癥與合并癥，新生兒體重正常、無窒息。兩組孕婦的年齡、孕周比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法 所有研究對(duì)象均空腹取靜脈血3 mL，所得樣本以2000 r/min、15 min離心分離血清后將血清保存于-4 ℃冰箱待測(cè)。本試驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)法：用抗人sICAM-1單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板，加入適度稀釋的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品。其中的sICAM-1會(huì)與其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的sICAM-1抗體，抗人sICAM-1抗體與結(jié)合在單抗上的人sICAM-1結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離成分；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有sICAM-1，辣根過氧化物酶會(huì)使無色的顯示劑現(xiàn)藍(lán)色；加終止液變黃。在450 nm下檢測(cè)OD值，sICAM-1濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出標(biāo)本中sICAM-1濃度。同理測(cè)定血清中OX40L。試劑由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson積差相關(guān)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

在重度子癇前期組和對(duì)照組中均檢出了OX40L和ICAM-1，這兩個(gè)因子在兩組中均有表達(dá)。重度子癇前期組的OX40L和ICAM-1水平較對(duì)照組均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組OX40L、ICAM-1的比較（） ng/L

表1　兩組OX40L、ICAM-1的比較（） ng/L

組別　OX40L　ICAM-1對(duì)照組（n=35）　409.5±73.8　877.1±642.9重度子癇前期組（n=40）　673.7±193.2　1304.8±288.4 t值　14.6　40.7 P值?。?.05?。?.05

3　討論

OX40/OX40L是一對(duì)重要的協(xié)同刺激分子，在機(jī)體的免疫應(yīng)答和多種疾病中，其相互作用能促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的活化、增殖、遷移，延長(zhǎng)其壽命，并促進(jìn)生發(fā)中心的形成和DC的分化成熟［16］，OX40L協(xié)同刺激T細(xì)胞的活化，促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生高效價(jià)抗體和類別轉(zhuǎn)換，介導(dǎo)OX40+T細(xì)胞向炎性反應(yīng)部位浸潤(rùn)。OX40/OX40L在機(jī)體的免疫應(yīng)答和多種疾病中起重要作用，通過干預(yù)其相互作用所進(jìn)行的免疫治療已在許多動(dòng)物模型上取得非常好的療效。OX40屬于腫瘤壞死因子受體超家族，它的作用僅限于激活T細(xì)胞和它的表達(dá)方式。OX40對(duì)于T細(xì)胞與DC細(xì)胞間相互作用及T細(xì)胞與記憶性T細(xì)胞的增殖有至關(guān)重要的作用。OX40的配體（OX40L）的表達(dá)不僅在樹突狀細(xì)胞，而且在其他細(xì)胞，如B細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和肥大細(xì)胞。OX40L廣泛分布的病理生理意義需要進(jìn)一步研究，特別是血管內(nèi)皮上表達(dá)的OX40L可能在炎癥性血管炎及動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮作用。最近的研究及動(dòng)物模型表明OX40L可能參與了許多疾病的病理生理過程。封閉OX40/OX40L的相互作用已被證明可以預(yù)防、治愈或改善這些疾病。相反，激活OX40可能打破機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的耐受進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。許多研究表明OX40L在乳腺癌、原發(fā)性干燥綜合征、狼瘡、過敏性紫癜、支氣管哮喘、皮膚病及Graves病等眾多免疫疾病中都有升高趨勢(shì)。ICAM-1（intercellular cell adhesion molecule-1，即細(xì)胞間黏附分子-1），又叫做CD54，屬于黏附分子中免疫球蛋白超家族（IGSF）中的成員，是介導(dǎo)黏附反應(yīng)重要的一個(gè)黏附分子［17］。ICAM-1在靜息的血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）上呈低水平表達(dá)，通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面上的特異性受體結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)活性。ICAM-1在穩(wěn)定細(xì)胞間相互作用起到重要作用，并促進(jìn)白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。ICAM-1不但可以促進(jìn)炎癥部位的粘連，還可以控制腫瘤惡化和轉(zhuǎn)移，并且在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)中起到重要作用。ICAM-1與其受體特異性的結(jié)合，促使了白細(xì)胞、炎癥細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等與內(nèi)皮細(xì)胞間的黏附作用增強(qiáng)，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞活化，使得它們變得更容易穿透內(nèi)皮。細(xì)胞間黏附分子介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或細(xì)胞與基質(zhì)間相互接觸和結(jié)合，從而參與了細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化、細(xì)胞組織生長(zhǎng)及分化、免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移等生理病理過程。

在本研究中重度子癇前期組OX40L水平明顯高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0..05），說明OX40L可能參與重度子癇前期的發(fā)病。重度子癇前期患者體內(nèi)產(chǎn)生OX40L與OX40結(jié)合形成抗原抗體反應(yīng)，通過促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的活化、增殖、遷移，延長(zhǎng)其壽命，并促進(jìn)生發(fā)中心的形成和DC的分化成熟，OX40L協(xié)同刺激T細(xì)胞的活化，促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生高效價(jià)抗體和類別轉(zhuǎn)換，介導(dǎo)OX40+T細(xì)胞向炎性反應(yīng)部位浸潤(rùn)，導(dǎo)致重度子癇前期患者機(jī)體的炎癥免疫過度激活，從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生損害。OX40L通過上調(diào)T細(xì)胞表面的OX40來早期激活T細(xì)胞。輔助性T細(xì)胞T17細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17通過誘導(dǎo)多種炎癥因子及趨化因子在炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用。OX40/OX40L的相互作用促進(jìn)IFN-γ和IL-4的分泌，而IFN-γ和IL-4可以抑制IL-17的產(chǎn)生。在沒有IL-4的微環(huán)境中OX40L對(duì)IL-17的抑制作用完全被IFN-γ逆轉(zhuǎn)，在缺乏IL-23的情況下OX40L仍然對(duì)IL-17有抑制作用。通過中斷IFN-γ來研究在IL-23及OX40L存在下IL-17的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)IL-23可以促進(jìn)IFN-γ的表達(dá)，而X40L可以增強(qiáng)IL-23的這種作用。在IL-23存在下，增加IFN-γ不僅可以逆轉(zhuǎn)OX40L對(duì)IL-17的抑制作用，反而增強(qiáng)IL-17的表達(dá)。

重度子癇前期組ICAM-1水平與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明ICAM-1可能參與重度子癇前期的發(fā)病。妊娠期高血壓疾病的病理生理變化是全身小血管痙攣，內(nèi)皮損傷及局部缺血。重度子癇前期患者ICAM-1的表達(dá)明顯增強(qiáng)，可能是受到血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的刺激，通過與其受體的特異性結(jié)合，使白細(xì)胞、炎癥細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等與內(nèi)皮細(xì)胞間的黏附作用增強(qiáng)，從而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞活化，使得它們更容易穿透內(nèi)皮。

正常妊娠是一種“特殊Th2現(xiàn)象”，即妊娠期母體是趨向于Th2型細(xì)胞因子參與的體液免疫，而避免了Th1型細(xì)胞因子參與的細(xì)胞免疫［18］。而重度子癇前期患者機(jī)體內(nèi)Th1/Th2免疫狀態(tài)失衡，表現(xiàn)為Th1/Th2免疫狀態(tài)向Th1漂移［15］。OX40/OX40L是一組雙向信號(hào)，主要通過影響其介導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子，進(jìn)而影響CD4+T細(xì)胞的分化。對(duì)CD4+T初始T細(xì)胞，在中性環(huán)境下，它促進(jìn)CD4+T初始細(xì)胞向輔助T細(xì)胞2（Th2）方向分化，然而在抗原刺激下，它促使CD4+T初始細(xì)胞分泌IL-12、IFN-α，可促進(jìn)其向Th1方向分化，抑制向Th2方向分化［19-21］。處于可逆期的單核細(xì)胞來源MΦDC，在OX40/OX40L信號(hào)作用下使MΦDC細(xì)胞膜分子CD80、CD86、CD54、CD40表達(dá)上調(diào)。OX40/ OX40L除發(fā)揮共刺激信號(hào)作用之外，還介導(dǎo)了T細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞間的黏附［22-23］。在重度子癇前期患者體內(nèi)OX40/OX40L受到抗原的刺激，促使CD4+T初始細(xì)胞分泌IL-12、IFN-α，促進(jìn)其向Th1方向分化。在其信號(hào)作用下并促進(jìn)了MΦDC細(xì)胞膜分子CD54（ICAM-1）的表達(dá)，進(jìn)而介導(dǎo)Th1細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞活化，使其通透性增強(qiáng)，進(jìn)而使Th1細(xì)胞向炎性部位游走發(fā)揮作用。

子癇前期的治療目前僅局限于對(duì)癥支持治療，延長(zhǎng)患者孕周，病情加重時(shí)終止妊娠，尚無一種從根本上控制其發(fā)病的手段，所以研究清楚子癇前期的發(fā)病機(jī)制是為子癇前期患者及其胎兒帶來莫大希望及幫助的辦法。在未來的研究中，可以增加輕度子癇前期組及子癇組進(jìn)一步研究這兩種因子在此種疾病中的作用；可以通過阻斷OX40與OX40L抗原抗體反應(yīng)或阻斷ICAM-1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，甚至在高水平層次敲除OX40L和ICAM-1的基因，負(fù)調(diào)控其轉(zhuǎn)錄水平等來延緩或阻止子癇前期的發(fā)病。許多因子已被證實(shí)與子癇前期的發(fā)生有關(guān)，如Th1/Th2的比例平衡、Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)、Foxp與T-bet均與子癇前期有關(guān)，或許這些因子以及OX40L與ICAM-1之間有著內(nèi)在的聯(lián)系，然而目前尚無此類文獻(xiàn)報(bào)道，或許在未來的子癇前期機(jī)制研究中可以明確這些因子相互之間的作用，進(jìn)而指導(dǎo)臨床工作中子癇前期的檢驗(yàn)與治療。

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MIAO Lu，YANG Hai-lan，HAN Fang，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（14）：086-089

Objective：To discuss the role of OX40L and ICAM-1 in the pathogenesis of preeclampsia by examining OX40L and ICAM-1 levels in peripheral blood of patients with preeclampsia.Method：Forty cases of severe preeclampsia（the severe preeclampsia group） and thirty-five cases of normal pregnancy women（the control group） admitted to our hospital from April 2014 to August 2014 were selected as the objects，then whose OX40L and ICAM-1 levels were detected and compared by ELISA method.Result：The OX40L and ICAM-1 values of the severe preeclampsia group were significantly increased compared with the control group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：The expression of OX40L and ICAM-1 increased in severe preeclampsia group may be associated with the pathogenesis and development of preeclampsia.

OX40L； ICAM-1； Peripheral blood； Severe preeclampsia； Pathogenesis

①山西醫(yī)科大學(xué) 山西 太原 030001

②山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院

楊海瀾

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.14.022

2015-11-20） （本文編輯：劉蕾）