馬娟周俊田貴聰石華

PCOS患者雄激素受體基因和性激素結(jié)合蛋白基因情況觀察*

馬娟①周?、偬镔F聰①石華①

目的：研究觀察多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）患者的雄激素受體基因和性激素結(jié)合蛋白基因的情況。方法：選取2014年11月-2015年7月本院接診的62例PCOS患者為觀察組，同一時(shí)期由于生殖系統(tǒng)發(fā)生異常導(dǎo)致不孕的62例患者為對照組。提取所有患者血液標(biāo)本的DNA進(jìn)行基因擴(kuò)增、瓊脂糖凝膠、毛細(xì)管電泳等檢測，觀察研究PCOS患者的雄激素受體和性激素結(jié)合蛋白基因的情況。結(jié)果：觀察組SHBG-TAAAA基因型多態(tài)性與胰島素抵抗的研究中，發(fā)現(xiàn)9/9基因型的分布在胰島素抵抗和非胰島素抵抗兩組中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；觀察組中，短重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為52.94%，在雄激素正常組分布為42.86%；而長重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為61.76%，在雄激素正常組的分布為39.29%，兩組數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：雄激素受體基因和性激素結(jié)合蛋白基因與PCOS相關(guān)，可對PCOS的檢查指標(biāo)、PCOS防治、及早診斷起重要作用。

多囊卵巢綜合征； 雄激素受體基因； 性激素結(jié)合蛋白基因

First-author's address：Longgang District Second People's Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 518000，China

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）屬于婦科領(lǐng)域中比較復(fù)雜內(nèi)分泌代謝疾病，主要由于女性體內(nèi)過高的雄性激素及性激素平衡導(dǎo)致不能正常排卵的常見疾病，該病不但會(huì)對女性的內(nèi)分泌功能造成嚴(yán)重影響，更加增大了女性發(fā)生心血管疾病、糖尿病、宮內(nèi)腫瘤及其他婦科疾病的風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重影響多數(shù)女性患者的健康［1］。所以，近幾年來，關(guān)于研究多囊卵巢綜合征（PCOS）患者的雄激素受體基因（AR）與性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG）的相關(guān)性在國內(nèi)外不斷發(fā)展，但是，這兩基因與該病的具體關(guān)系，至今無一結(jié)論［2］。所以，本研究對PCOS患者中雄激素受體基因（AR）、性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG）的情況進(jìn)行研究觀察，為臨床研究工作提供有力的依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年11月-2015年7月本院接診的62例PCOS患者為觀察組，對照組為同一時(shí)期由于生殖系統(tǒng)發(fā)生異常導(dǎo)致不孕的62例患者。PCOS患者均符合“中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科學(xué)分會(huì)內(nèi)分泌學(xué)組及歐洲人類生殖和鹿特丹標(biāo)準(zhǔn)”［3］。對照組為生理期正常且非內(nèi)分泌性不孕患者，年齡20～36歲，平均（29.4±3.8）歲；觀察組患者年齡21～35歲，平均（31.7±2.4）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者均同意參與該研究，簽署知情同意書；（2）患者自身沒有其他內(nèi)分泌系統(tǒng)的疾?。唬?）無嚴(yán)重的器官功能障礙；（4）半年之內(nèi)及以上未用過激素類藥物；（5）無糖尿病等病史。

1.2方法

1.2.1PCOS與雄激素受體基因（AR） 所有研究對象進(jìn)行3 mL靜脈血的抽取，再次加入枸櫞酸鈉進(jìn)行抗凝，將其存貯在-80 ℃的恒溫箱中。將蛋白酶K和200 μL的血液樣本置于離心管中混合均勻，隨后加入緩沖劑反向混合。在55 ℃環(huán)境中，放置混合液10 min，在此期間進(jìn)行5～8次反向混合，液體變?yōu)榍辶習(xí)r為標(biāo)準(zhǔn)。再加入無水乙醇，充分的均勻混合再加吸附柱［4］。經(jīng)過離心、4次漂洗后，靜置于室溫5 min。在無污染的離心管中，加入緩沖劑，靜置離心。收集溶液，測定DNA純度。對AR目的基因應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增，對PCR的產(chǎn)物監(jiān)測。鑒定CAG序列的多態(tài)性和重復(fù)次數(shù)［5］。

1.2.2PCOS與性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG） 經(jīng)過采樣、提取DNA、擴(kuò)增SHBG、PCR的產(chǎn)物檢測、分析毛細(xì)管電泳序列進(jìn)行鑒定TAAAA序列多態(tài)性和重復(fù)次數(shù)［6］。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用軟件SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用 χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1PCOS與AR的關(guān)系

2.1.1兩組AR-CAG片段重復(fù)多態(tài)的分布狀況 統(tǒng)計(jì)分析研究對象的AR-CAG，重復(fù)數(shù)范圍在11～33。兩組患者的重復(fù)數(shù)主要集中在21、22、23。觀察組患者所占的比例分別為：28.03%、32.49%、30.84%；對照組患者所占的比例分別為：29.85%、36.66%、28.75%，兩組數(shù)據(jù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.1.2AR-CAG重復(fù)多態(tài)性分布情況 按照兩組患者的AR-CAG重復(fù)多態(tài)性分布，22作為分據(jù)點(diǎn)，分為長、短兩重復(fù)組。短重復(fù)組（n≤22）在觀察組、對照組中的比例分別為48.39%（30例）、51.61% （32例）；長重復(fù)組（n＞22）在觀察組、對照組中的分布分別為51.61%（32例）、48.39%（30例），兩組數(shù)據(jù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.684、0.497）。

2.1.3觀察組患者高雄激素血癥與AR-CAG的重復(fù)多態(tài)性關(guān)系 根據(jù)觀察組患者血清中睪酮的濃度值，以0.7 ng/mL為界線點(diǎn)，將其分為高雄激素血癥組34例和雄激素正常組28例。觀察組中，短重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為52.94%（18例），在雄激素正常組分布為42.86%（12例）；而長重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為61.76%（21例），在雄激素正常組的分布為39.29%（11例），上述數(shù)據(jù)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.1.4觀察組患者胰島素抵抗與AR-CAG的重復(fù)多態(tài)性關(guān)系 根據(jù)血清中的胰島素水平，以空腹血清胰島素水平60 pmol/L作為參考，將觀察組患者分為胰島素抵抗組（＞60 pmol/L）36例和非胰島素抵抗組（≤60 pmol/L）26例。短重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為56.67%（17例），非胰島素抵抗組分布比例為43.33%（13例），比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。長重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為59.38%（19例）、非胰島素抵抗組的分布為40.63%（13例），比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 PCOS與SHBG的關(guān)系

2.2.1比較兩組患者的SHBG-TAAAA分布情況 通過瓊脂糖凝膠電泳檢測、毛細(xì)管電泳序列分析，能夠檢測出SHBG-TAAAA的13種基因型，兩組SHBG-TAAAA基因型的分布情況比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2.2觀察組患者SHBG-TAAAA重復(fù)多態(tài)性與胰島素抵抗的關(guān)系 根據(jù)以上的分組方式，觀察組患者分別分為胰島素抵抗組（n=36）和非胰島素抵抗組（n=26）。兩組患者的9/9基因型分布情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其他分布比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表1　兩組患者SHBG-TAAAA基因型分布情況的比較 例（%）

續(xù)表1

表2　胰島素抵抗組和非胰島素抵抗組的SHBG-TAAAA基因型分布情況的比較 例（%）

續(xù)表2

3　討論

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）的致病機(jī)制比較復(fù)雜，導(dǎo)致該病發(fā)生的主要原因?yàn)閮?nèi)分泌不平衡和卵泡發(fā)育出現(xiàn)異常引起的。胰島素抵抗和高雄激素血癥屬于內(nèi)分泌失調(diào)病理基礎(chǔ)，而且卵泡發(fā)育發(fā)生停滯會(huì)減少成熟卵泡的生成量減少，或者成熟卵泡的排出發(fā)生障礙［7-8］。最近幾年來，許多臨床研究表明其與雄激素受體基因（AR）、性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG）、卵泡發(fā)生異常及內(nèi)分泌失調(diào)有密切聯(lián)系。

雄激素受體影響著雄激素的發(fā)揮作用，所以AR的表達(dá)會(huì)在雄激素活性中起著關(guān)鍵性作用。在機(jī)體的各個(gè)器官中雄激素均會(huì)有所表達(dá)，生殖器官中該激素的表達(dá)達(dá)到最高［9］。編碼AR的基因主要位于Xq11-12位點(diǎn)上，其中含7個(gè)內(nèi)含子、8個(gè)外顯子。且種族及地域性對CAG產(chǎn)生不同的影響，例如在歐洲在8～39，美洲在8～30。近年來研究表明，地域相同但不同種族的人CAG的多態(tài)性有著明顯差異［10-12］。所以，AR基因表達(dá)也有相對穩(wěn)定性。隨著CAG重復(fù)次數(shù)的增長，AR基因的轉(zhuǎn)錄活性會(huì)減弱。

性激素結(jié)合蛋白在機(jī)體中可起到特異運(yùn)輸功能，能把雄激素和雌激素送達(dá)到器官。且SHBG編碼基因主要位于17p13-12位點(diǎn)，且重復(fù)序列（TAAAA）的重復(fù)次數(shù)與編碼基因的轉(zhuǎn)錄活性有密切聯(lián)系［13-15］。性激素被運(yùn)送各作用器官上，還受血漿SHBG水平的多樣性影響，主要通過體液循環(huán)，或者直接作用等影響方式。所以，根據(jù)近年研究，可以利用血漿中SHBG的水平能夠用來判斷體內(nèi)胰島素水平。

本研究主要對POCS患者的AR進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示，兩組患者在CAG重復(fù)序列多態(tài)性上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且所有患者在短重復(fù)組和長重復(fù)組的分布狀況比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。研究結(jié)果也表明PCOS的患病率與CAG重復(fù)序列多態(tài)性無直接聯(lián)系，但是也不能排除該基因在PCOS的發(fā)病上有潛在因素的可能［16-19］。另外，對62例PCOS患者單獨(dú)研究，短重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為52.94%（18例），在雄激素正常組分布為42.86%（12例）；而長重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為61.76%（21例），在雄激素正常組的分布為39.29%（11例），該結(jié)果表明ARCAG的多態(tài)性在高雄激素血癥發(fā)生率上起著重要作用，且短重復(fù)組更易引起雄激素血癥的發(fā)生相比于長重復(fù)組。主要原因由于短重復(fù)序列會(huì)提高雄激素的轉(zhuǎn)錄活性，加速了雄性激素的分泌，機(jī)體的內(nèi)分泌發(fā)生失衡，更加引起高雄激素血癥的發(fā)生［20-22］。所以，AR-CAG的多態(tài)性也是PCOS發(fā)生的另外潛在致病因素。短重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為56.67% （17例），非胰島素抵抗組分布比例為43.33%（13例），差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。長重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為59.38%（19例）、非胰島素抵抗組的分布為40.63%（13例），進(jìn)一步表明胰島素抵抗與AR-CAG的多態(tài)性無直接相關(guān)性，可能是由于AR-CAG的多態(tài)性是在影響雄激素水平的同時(shí)，間接影響胰島素的分泌。

本研究發(fā)現(xiàn)，與國外相關(guān)報(bào)道的所有患者的SHBG-TAAAA的13種基因型存在明顯差異相比，本文并未得出相似結(jié)果，這可能與患者的種族、地域不同有關(guān)；也可能與該研究的所選取的患者例數(shù)有關(guān)系，該結(jié)論目前還未被認(rèn)可。在對62例PCOS患者單獨(dú)研究中發(fā)現(xiàn)，9/9基因型的分布在胰島素抵抗組和非胰島素抵抗組中存在顯著性差異（P＜0.05）。該結(jié)果可以推斷出，PCOS患者的胰島素抵抗會(huì)與9/9基因型TAAAA的多態(tài)性有一定的聯(lián)系。

綜上所述，PCOS的發(fā)生與AR、SHBG有一定關(guān)系，可對PCOS的檢查指標(biāo)、PCOS防治、及早診斷起重要作用。

［1］喬世聰，侯麗輝，王鑫，等.多囊卵巢綜合征患者人體測量學(xué)指標(biāo)與中醫(yī)證型相關(guān)性的研究［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（1）：147-149.

［2］路煒，盧潭敏.雄激素受體基因和性激素結(jié)合蛋白基因與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究［J］.中國婦幼保健，2015，30 （22）：3775-3778.

［3］代小燕，邸石，王罡，等.坤泰膠囊對多囊卵巢綜合征不孕卵泡質(zhì)量和激素分泌的影響［J］.中國婦幼保健，2015，30 （31）：5443-5445.

［4］田波，吳艷，李啟富，等.FABP2基因Ala54Thr多態(tài)性與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2014，39 （1）：44-47.

［5］林偉，董磊.黃體生成素受體及類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白在大鼠多囊卵巢綜合征模型中的表達(dá)［J］.生殖與避孕，2016，36（1）：9-14.

［6］周飛飛，譚季春，王莎莎，等.環(huán)境雌激素雙酚A與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究［J］.中國婦幼保健，2014，29（13）：2049-2051.

［7］甄鑫，顏桂軍，孫海翔，等.CYP19 A1基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2014，27（6）：596-599.

［8］連方，趙帥.補(bǔ)腎調(diào)沖法對多囊卵巢綜合征患者抗苗勒氏管激素及卵細(xì)胞質(zhì)量的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，32（1）：9-12.

［9］王芳，蔣玲，鄧曉惠，等.多囊卵巢綜合征患者血清Apelin水平變化及相關(guān)因素分析［J］.中國糖尿病雜志，2012，20 （2）：95-98.

［10］王月恒，邢毅，王玖玲，等.多囊卵巢綜合征患者血清內(nèi)脂素及TNF-α的水平變化及其意義［J］.山東大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，50（2）：94-97，101.

［11］董智力，韓世愈，李巖，等.游離睪酮指數(shù)與伴高雄激素血癥的多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究［J］.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，46（2）：144-146.

［12］靳久紅.中西醫(yī)結(jié)合治療肥胖性多囊卵巢綜合征的療效觀察［J］.中國婦幼保健，2016，31（1）：187-188.

［13］周曉梅，周燕妮，張小燕，等.8-羥基脫氧鳥苷與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2012，22 （16）：48-50.

［14］杭晨，楊煒敏，何善陽，等.多囊卵巢綜合征患者血清中蛋白因子的變化及其臨床意義［J］.中國病理生理雜志，2013，29（12）：2251-2255.

［15］魏莉娜，李俐琳，方叢，等.控制性卵巢刺激對多囊卵巢綜合征患者和正常排卵婦女卵源性因子表達(dá)的差異［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2013，34（6）：867-872.

［16］彭紅梅，姚元慶.多囊卵巢綜合征患者子宮內(nèi)膜異常增生的診治［J］.中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2007，23（9）：671-672.

［17］郭銀華，談?dòng)?，鄒奕潔.補(bǔ)腎促排卵湯對PCOS模型大鼠顆粒細(xì)胞芳香化酶的影響［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，32 （1）：38-40.

［18］黎小斌，翟家樂，李麗蕓，等.靈術(shù)顆粒對多囊卵巢綜合征患者內(nèi)分泌及脂代謝的影響［J］.中醫(yī)雜志，2011，52（1）：31-34.

［19］鄭瑞芹，劉曉芹，張建英，等.PCOS患者早期自然流產(chǎn)與子宮內(nèi)膜雌孕激素受體的關(guān)系及中西醫(yī)結(jié)合治療［J］.中國計(jì)劃生育學(xué)雜志，2011，19（5）：294-297.

［20］賈新轉(zhuǎn)，魏蘭，王詠梅，等.PCOS患者卵泡液維生素D水平與IVF周期結(jié)局相關(guān)性分析［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，42 （10）：1904-1906.

［21］李軼，李瑞岐，歐頌邦，等.高雄激素和非高雄激素型多囊卵巢綜合征患者血清抗苗勒管激素分泌特點(diǎn)及診斷效能比較［J］.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2014，30（2）：111-115.

［22］郭江虹.多囊卵巢綜合征孕婦胎盤類固醇的研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2016，26（1）：94-98.

Observation of Androgen Receptor Gene and Sex Hormone Binding Protein Gene in PCOS Patients

MA Juan，ZHOU Jun，TIAN Gui-cong，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（14）：020-023

Objective：To investigate the status of androgen receptor gene and sex hormone binding protein gene in patients with polycystic ovary syndrome（PCOS）.Method：A total of 62 PCOS patients were selected as the observation group from November 2014 to July 2015 in our hospital，the control group were choosed from the same period due to the occurrence of reproductive system abnormalities lead to infertility in 62 patients.DNA gene amplification，agarose gel electrophoresis and capillary electrophoresis were performed to detect the expression of androgen receptor and sex hormone binding protein gene in PCOS patients.Result：SHBG-TAAAA gene type of polymorphic and insulin resistance of the observation group in the study，found that 9/9 genotype distribution in insulin resistance and insulin resistance had a significant difference in two groups（P＜0.05）.In the observation group，the distribution of short repeating group in high androgen blood group was 52.94%，and in normal androgen group was 42.86%，respectively.The distribution of long repetitive group in hyperandrogenemia group was 61.76%，in the distribution of normal androgen group was 39.29%，two group's data had significant differences（P＜0.05）. Conclusion：Androgen receptor gene and sex hormone binding protein gene is associated with polycystic ovary syndrome （PCOS），which may be an important role in the detection of PCOS，PCOS prevention and treatment，and early diagnosis of polycystic ovary syndrome.

Polycystic ovary syndrome； Androgen receptor gene； Sex hormone binding protein gene

廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金項(xiàng)目（2015122224333594）

①廣東省深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院 廣東 深圳 518000通信作者：馬娟

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.14.005

2016-02-17） （本文編輯：蔡元元）