姚欣

摘 要：采用高效液相色譜法對(duì)羊乳制品中的三聚氰胺進(jìn)行測(cè)定。羊乳制品中三聚氰胺使用乙腈提取、高速離心，使用二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定。該方法三聚氰胺的檢出限和定量限分別為0.0176mg/kg（S/N=3）和0.0586mg/kg（S/N=10），1.00mg/L三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣六次，峰面積RSD為1.64%，在向四種不同的羊乳制品中添加10-50μg三聚氰胺時(shí)回收率為92.65%～94.13%。并使用該方法對(duì)富平羊乳制品中三聚氰胺進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均為陰性。結(jié)果表明，方法檢出限高、準(zhǔn)確可靠、操作簡(jiǎn)便，并適用于羊乳制品中三聚氰胺的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；三聚氰胺；羊乳制品

中圖分類號(hào)： TS252.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1673-1069（2016）27-186-2

0 引言

陜西省富平縣由于其地理位置和氣候條件，特別適宜關(guān)中奶山羊的飼養(yǎng)。經(jīng)過多年來的不斷發(fā)展，年產(chǎn)羊乳制品十幾萬噸，已成為全國(guó)羊乳制品產(chǎn)量之首，是名副其實(shí)的“中國(guó)羊乳之都”。羊乳具有脂肪顆粒小，便與人體的吸收；鈣含量高；含有多種的維生素和微量元素；其蛋白質(zhì)含量與母乳接近，長(zhǎng)期食用不會(huì)引起發(fā)胖等優(yōu)點(diǎn)[1]，越來越受到消費(fèi)者的歡迎，已逐漸從鮮乳向大眾食品、嬰幼兒食品等多元化發(fā)展。由于羊乳制品比牛乳制品蛋白質(zhì)含量更高，價(jià)格更貴，就可能存在以次充好的現(xiàn)象。2008年中國(guó)爆發(fā)的毒奶粉事件就不乏存在商販追求高蛋白的原因所致，從而造成了廣泛且及其惡劣的影響。因此，本文在針對(duì)羊乳制品對(duì)國(guó)標(biāo) 測(cè)定三聚氰胺的方法進(jìn)行優(yōu)化上，并對(duì)本地羊乳制品中三聚氰胺的含量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器及試劑

1.1 儀器

HPLC（LC-20，日本島津），配備LC-20AD高壓泵，SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器及自動(dòng)進(jìn)樣器；分析天平（CPA224S，德國(guó)賽多利斯）；pH計(jì)（640，上海英格）；高速離心機(jī)（GL-20G-II、安亭飛鴿）；恒溫振蕩器（HHZ-98AB，上海一橫）。

1.2 試劑

乙腈（JDH.色譜純）；磷酸、磷酸二氫鉀（GR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院），實(shí)驗(yàn)用水為高純水，電阻率為18.25 MΩ·cm-1。

1.3 樣品來源

市售羊奶粉、嬰幼兒配方羊奶粉、羊乳（生羊乳、巴氏滅菌羊乳）、羊乳酸奶等均購于當(dāng)?shù)爻小?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備

三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取100.0mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用水完全溶解后定容至100mL，混勻，此為三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，三聚氰胺濃度為1.00g/L。用水逐級(jí)稀釋三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至1.00mg/L，此為三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、25.0mL、50.0mL和100.0mL至100mL容量瓶中，并用水定容至刻線，此標(biāo)準(zhǔn)工作溶液三聚氰胺含量分別為5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1000μg/L。

2.2 樣品處理方法

羊奶粉制品、羊乳酸奶：稱取混合均勻的15g樣品，置于50ml具塞刻度試管中，加入30ml乙腈，置于水平震蕩儀中震蕩10min，加水定容至刻度，轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，5000r/min離心10min，取乙腈層溶液過0.45μm濾膜，作為供試樣。

生羊乳制品：稱取混合均勻的30g樣品，置于100ml具塞刻度試管中，加入60ml乙腈，置于水平震蕩儀中震蕩15min，加水定容至刻度，轉(zhuǎn)移至100mL離心管中，10000r/min離心15min，取乙腈層溶液過0.45μm濾膜，作為供試樣。

2.3 色譜條件及線性關(guān)系考察

色譜柱：SCX強(qiáng)陽離子交換柱，5μm，4.6 mm×250mm（Waters）。

0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液：稱取6.8g磷酸二氫鉀，加水800mL，用2mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至3.0，超聲脫氣15min

乙腈：超聲脫氣15min。

流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液：乙腈=95：5

流速：1.5mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm

取標(biāo)準(zhǔn)工作溶液各20μL進(jìn)樣，平行三次，取平均值。以三聚氰胺濃度（Y，μg/L）對(duì)色譜峰面積（X）的均值作圖（見圖1），得出回歸方程：Y=1.7487×10-5X-1.1638×10-3，線性相關(guān)系數(shù)（r2）0.9994，保留時(shí)間為9.61min，表明工作濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.4 檢出限、定量限及精密度試驗(yàn)

以空白樣品按選定的實(shí)驗(yàn)條件，以3倍噪聲為檢出限，10倍噪聲為定量限，三聚氰胺檢出限和定量限分別為0.0176mg/kg和0.0586mg/kg。取1.00mg/L三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液20μL進(jìn)樣，重復(fù)六次，三聚氰胺峰面積的RSD為1.64%，表明該方法靈敏度高、精密度良好。

2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)

向樣品中加入一定量三聚氰胺，按3.2方法處理，準(zhǔn)確吸取供試樣20μL。根據(jù)回歸方程計(jì)算被檢測(cè)試樣中的三聚氰胺的含量，并計(jì)算加標(biāo)回收率如表1。

由表1可知四種不同樣品平均三聚氰胺回收率為92.65%～94.13%，表明該方法準(zhǔn)確度良好，適宜羊乳制品中三聚氰胺的測(cè)定。

2.6 樣品測(cè)定

使用3.2樣品前處理方法和3.3色譜柱條件，對(duì)四種不同羊乳制品共計(jì)52批次進(jìn)行三聚氰胺的測(cè)定，檢驗(yàn)結(jié)果均為陰性。

3 結(jié)論

試驗(yàn)表明，使用0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液-乙腈（95：5）作為流動(dòng)相，測(cè)定羊乳制品中三聚氰胺的含量，方法檢出限高、準(zhǔn)確可靠、操作簡(jiǎn)便。該方法適用于羊乳制品中三聚氰胺的測(cè)定。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 中國(guó)百科大辭典編委會(huì).中國(guó)百科大辭典[M].北京：華廈出版社，1990，1214.

[2] GB/T 22400-2008，原料乳中三聚氰胺快速檢測(cè)液相色譜法[S].