朱文巍 趙梓綱　丁香玉 林碧雯 孟憲芙 李承新解放軍總醫(yī)院皮膚科，北京 1853

皮膚鱗狀細(xì)胞癌NF-κB p65表達(dá)的臨床價(jià)值

朱文巍 趙梓綱丁香玉 林碧雯 孟憲芙 李承新#
解放軍總醫(yī)院皮膚科，北京 1008530

目的研究NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的臨床診斷價(jià)值。方法選擇30例皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者以及10例健康體檢者。比較兩組患者的NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率，分析NF-κB p65蛋白的表達(dá)與皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者的臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者體內(nèi)的NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率與侵襲深度、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（（P＜0.05）；與性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（（P＞0.05）。正常皮膚組織鱗狀上皮細(xì)胞核基本未見p65表達(dá)，胞質(zhì)p65表達(dá)陽性；癌前病變中，病變鱗狀上皮細(xì)胞細(xì)胞核見散在p65弱表達(dá)，胞質(zhì)弱陽性；高度惡性鱗狀細(xì)胞癌組織病變鱗狀上皮細(xì)胞細(xì)胞核可見較多p65表達(dá)，胞質(zhì)呈彌漫性陽性，血管內(nèi)皮細(xì)胞胞核表達(dá)，胞質(zhì)散在弱陽性。結(jié)論NF-κB p65蛋白參與皮膚鱗狀細(xì)胞癌的形成和發(fā)展，隨患者病情的進(jìn)展，NF-κB p65蛋白的陽性表達(dá)率越高。

NF-κB p65；皮膚鱗狀細(xì)胞癌；表達(dá)；臨床價(jià)值

Oncol Prog，2016，14（5）

皮膚鱗狀細(xì)胞癌是起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞的一種惡性腫瘤，發(fā)生于皮膚或黏膜上，常發(fā)生于某些皮膚病或癌前疾病的基礎(chǔ)上，或者由各種癌前疾病發(fā)展而來，少數(shù)也可為原發(fā)性［1-2］。核因子kappa B（nuclear factor kappa，NF-κB）是人體內(nèi)重要的炎性轉(zhuǎn)錄因子，可以激活下游炎性因子的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞的凋亡［3］。最常見的NF-κB有p50和p65兩個(gè)亞單位構(gòu)成的異源二聚體，前期研究的重點(diǎn)一直放在NF-κB的免疫和炎性反應(yīng)，最近對其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用逐漸關(guān)注［4］。本分析研究NF-κB p65蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的臨床診斷價(jià)值，報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1材料

經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，收集2012年1月至2015年6月在解放軍總醫(yī)院皮膚科確診的30例皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者（觀察組）的手術(shù)切除標(biāo)本及10例體檢健康者（對照組）的正常皮膚組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均未接受放療或化療；②經(jīng)患者及患者家屬同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤的患者；②拒絕接受研究的患者。30例皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者中男性19例，女性11例，平均年齡（52.81± 12.16）歲，10名健康體檢人群中男性6例，女性4例，平均年齡（53.82±11.27）歲。

1.2檢測方法

收集患者手術(shù)切除標(biāo)本及健康人群的正常皮膚組織，所有標(biāo)本在采集離體后10 min內(nèi)放置于凍存管內(nèi)，在-80℃的低溫冰箱內(nèi)保存。免疫組織化學(xué)標(biāo)本為本院保存良好的石蠟包埋組織塊。免疫組化染色：采用免疫組化SP染色法，以0.01 mol/L檸檬酸進(jìn)行熱修復(fù)5 min，山羊血清封閉后，滴加一抗（抗NF-κB p65），37℃孵育1 h，嚴(yán)格按照說明書完成檢驗(yàn)。胞質(zhì)和（或）胞核中出現(xiàn)明顯的黃色或黃褐色顆粒視為陽性［3］：陽性細(xì)胞＜10%為0分；10%～40%為1分；41%～70%為2分；＞70%為3分。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)［3］：不著色0分；黃色1分；棕黃色2分；黃褐色3分。二者評分相加后計(jì)為總分：0～1分為（－）；2分為（+）；3～4分為（++）；5～6分為（+++）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和處理，采用Fisher精確概率法，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 NF-κB p65在兩組樣本組織中的表達(dá)

正常皮膚組織鱗狀上皮細(xì)胞核基本未見p65表達(dá)，胞質(zhì)p65表達(dá)陽性；高度惡性鱗狀細(xì)胞癌組織病變鱗狀上皮細(xì)胞胞核可見較多p65表達(dá)，胞質(zhì)呈彌漫性陽性，血管內(nèi)皮細(xì)胞胞核表達(dá)，胞質(zhì)散在弱陽性（圖1）。

圖1　NF-NF-κ B pB p6565在正常皮膚組織和鱗狀細(xì)胞癌組織的表達(dá)

2.2 NF-κB p65蛋白在不同組織中表達(dá)比較

皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者體內(nèi)的NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率為66.67%，高于正常組織的20.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 NF-κB p65蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率與浸潤深度、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），而與性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)（P＞0.05）。（表1）

表1　NF-κB p65蛋白表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性分析

3　討論

皮膚鱗狀細(xì)胞癌起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞的一種惡性腫瘤，發(fā)病率與環(huán)境、遺傳等多種因素有關(guān)，其發(fā)病率和病死率相對較高，早期診斷和治療對皮膚鱗狀細(xì)胞癌顯得尤為重要［5］。NF-κB屬于多功能、多向性的核轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡的相關(guān)基因，與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切［6］。皮膚鱗狀細(xì)胞癌、胃癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中均存在NF-κB信號通路激活異常的狀況，被激活的NF-κB發(fā)生核異位，下游靶基因轉(zhuǎn)錄增加，導(dǎo)致部分細(xì)胞因子和炎性因子的轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)，加速腫瘤的發(fā)生、增殖和侵襲［7-9］。

本次研究結(jié)果顯示，皮膚鱗狀細(xì)胞癌患者體內(nèi)的NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。正常皮膚組織鱗狀上皮細(xì)胞核未見p65表達(dá)，胞質(zhì)陽性；癌前病變中，病變鱗狀上皮細(xì)胞細(xì)胞核見散在p65弱表達(dá)，胞質(zhì)弱陽性；高度惡性鱗狀細(xì)胞癌組織病變鱗狀上皮細(xì)胞細(xì)胞核可見較多p65表達(dá)，胞質(zhì)呈彌漫性陽性，血管內(nèi)皮細(xì)胞胞核表達(dá)，胞質(zhì)散在弱陽性。NF-κB是一種可以調(diào)控細(xì)胞增殖和炎性的核轉(zhuǎn)錄因子，參與多種疾病、腫瘤的細(xì)胞因子、生長因子、細(xì)胞黏附因子等基因的調(diào)控［10］。NF-κB的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)受多種因素的影響，導(dǎo)致促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的靶基因轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，作用于腫瘤細(xì)胞［3］。NF-κB因子的持續(xù)活化可以作為多種腫瘤的標(biāo)志。細(xì)胞凋亡是由基因控制的自主性有序死亡，是生理性細(xì)胞死亡過程，對于機(jī)體的正常生長具有重要的意義。腫瘤細(xì)胞主要通過影響外源性和內(nèi)源性機(jī)制來逃避“死亡”，成為“不死”細(xì)胞，即癌細(xì)胞。NF-κB最初是在B淋巴細(xì)胞胞核中檢測出來的，是可以與免疫球蛋白的輕鏈基因增強(qiáng)子κB序列特異性結(jié)合的核蛋白因子，p50/p65異二聚體是細(xì)胞質(zhì)中最常見的兩種形式。當(dāng)腫瘤壞死因子、IL-1等多種物質(zhì)刺激NF-κB的結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，NF-κB的抑制物IκB就會(huì)出現(xiàn)磷酸化，發(fā)生解離，NF-κB二聚體激活后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，刺激基因進(jìn)行表達(dá)。NF-κB的組成型激活與致瘤性轉(zhuǎn)化有關(guān)，多種惡性腫瘤均與NF-κB的激活相關(guān)，NF-κB可以通過調(diào)控與細(xì)胞生長增殖、抗凋亡、血管生成和轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因表達(dá)有關(guān)，促進(jìn)了惡性腫瘤的發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率與浸潤深度、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而與性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明NF-κBp65在癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起到重要的作用。

綜上所述，NF-κB p65蛋白參與皮膚鱗狀細(xì)胞癌的形成和發(fā)展，患者病情越重，NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)率越高。

［1］施佳音，夏鈺弘.NF-κB、Ki-67和E-cad在皮膚鱗狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞癌的表達(dá)及相關(guān)分析［J］.山東醫(yī)藥，2011，51 （1）：50-51.

［2］王偉，翟曉梅，劉林蟠.核因子-κB p65在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2015，32（9）：2231-2233.

［3］李慎秋，謝春麗，蔣思，等.皮膚鱗狀細(xì)胞癌中Axl、NF-κB的表達(dá)及意義［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2013，42（5）：569-572.

［4］秦陽，王玲，呂曉娟.NF-κB p50、NF-κB p65在甲狀腺癌中的表達(dá)及意義［J］.中國生化藥物雜志，2014，34（8）：49-51.

［5］王瑞，夏永華.皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中Notch1和NF-κB p65的表達(dá)及意義［J］.中國皮膚性病學(xué)雜志，2013，27（1）：16-18；28.

［6］Gong H，Zuliani P，Komuravelli A，et al.Analysis and verification of the HMGBI signaling pathway［J］.BMC Bioinformatics，2010，11（7）：10-11.

［7］陳軍，覃思繁，林思彤，等.胃癌組織中c-FLIP、NF-κB p65的表達(dá)變化及意義［J］.山東醫(yī)藥，2013，53（3）：22-24.

［8］Jiang W，Wang Z，Li X，et al.Reduced high-mobility group box 1 expression induce by RNA interference inhibits the bioactivity of hepatocellular carcinoma cell line HCCLM3 ［J］.Dig Dis Sei，2012，57：92-98.

［9］那磊，吳斌.NF-κBp65和HIF-1α在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義［J］.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，43（6）：519-522.

［10］周巧，黃杰安，劉寶玉，等.NIBP和NF-κB p65在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2014，36（5）：585-588.

The clinical value of NF-κB p65 expression in cutaneous squamous celll carciinnoommaa

ZHU Wen-wei ZHAO Zi-gang DING Xiang-yu LIN Bi-wen MENG Xian-fu LI Cheng-xin#
Department of Dermatology，Chinese PLAGeneral Hospital，Beijing 100853，China

ObjectivectiveTo study the clinical value of NF-κB p65 protein in cutaneous squamous cell carcinoma （cSCC）.Methodethod30 cases of cSCC patients and 10 cases of healthy adults were included in this study.The positive expression rate of NF-κB p65 protein and mRNA in the two groups were compared，and the correlation between the expression of NF-κB p65 protein and the clinicopathological features of cSCC was investigated.ResultesultThe positive expression rate of NF-κB p65 protein and mRNA in cSCC patients was significantly higher than that in normal tissues（P＜0.05），and was correlated with the depth of invasion，differentiation，clinical stage，lymph node metastasis and distant metastasis （P＜0.05），but it was irrelevant with gender，age and tumor size（P＞0.05）.In squamous cells of normal tissues，NF-κB p65 expression was barely found in the nuclei，while positive expression was detected in the cytoplasm.In squamous cells of precancerous tissues，p65 expression was sporadic and weak in nuclei，and weakly positive in cytoplasm；In squamous cells cancer tissues，p65 expression was common in nuclei，diffusely positive in cytoplasm，while it was positive in nuclei，and sporadically and weakly positive in cytoplasm of vascular epithelial cells.ConclusionusionNF-κB p65 protein is involved in the formation and development of cutaneous squamous cell carcinoma，and the positive expression rate of NF-κB p65 elevates as the disease progresses.

rdsNF-κB p65；cutaneous squamous cell carcinoma；expression；clinical value

R739. 5

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.05.27

（corresponding author），郵箱：chengxinderm@163.com

2016-01-04）