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        安乳消痛丸對乳腺增生模型大鼠的影響

        2016-09-06 07:47:48周朝暉劉鴻雁安曉芳樵小健姜?;焖兄形麽t(yī)結(jié)合醫(yī)院甘肅天水7400蘭州市肺科醫(yī)院3甘肅省腫瘤醫(yī)院
        西部中醫(yī)藥 2016年4期
        關(guān)鍵詞:腺泡空白對照乳腺

        周朝暉,劉鴻雁,安曉芳,賈 忠,樵小健,姜專基天水市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,甘肅 天水 7400;蘭州市肺科醫(yī)院;3甘肅省腫瘤醫(yī)院

        安乳消痛丸對乳腺增生模型大鼠的影響

        周朝暉1,劉鴻雁2,安曉芳1,賈忠2,樵小健1,姜?;?△
        1天水市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,甘肅 天水 741020;2蘭州市肺科醫(yī)院;3甘肅省腫瘤醫(yī)院

        目的:研究中藥安乳消痛丸對大鼠的增生乳腺肉眼形態(tài)、組織病理學(xué)形態(tài)和血清雌、孕激素水平的影響。方法:建立乳腺增生大鼠模型,空白對照組:給予蒸餾水灌胃,20mL/kg,1次/d,連續(xù)25天。模型對照組:給予蒸餾水灌胃,20mL/kg,1次/d,連續(xù)25天。安乳消痛丸低、中、高劑量分別給予安乳消痛丸低(2.5g/kg)、中(5.1 g/kg)、高(7.7 g/kg)劑量,20mL/kg,1次/d,連續(xù)25天。結(jié)果:與空白對照組相比,模型組大鼠血清雌二醇(E2)含量顯著增高,孕酮(P)含量明顯降低,安乳消痛丸各劑量組大鼠血清E2含量降低、P含量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);安乳消痛丸可減輕大鼠乳頭腫脹度,降低乳腺組織重量;安乳消痛丸可可減少大鼠乳腺小葉和腺泡數(shù)目,降低腺泡上皮細(xì)胞高度,縮小腺腔直徑。結(jié)論:安乳消痛丸通過調(diào)節(jié)大鼠血清性激素水平,改善乳腺組織病理變化,對大鼠乳腺增生具有較好治療作用。其機(jī)理可能是通過降低血清E2含量,升高P含量,調(diào)節(jié)二者的相對平衡而實(shí)現(xiàn)的。

        安乳消痛丸;性激素;乳腺增生;動物實(shí)驗(yàn);大鼠

        乳腺增生是女性常見病,發(fā)病率約占乳房疾病的75%,居乳腺疾病首位,隨著生活節(jié)奏加快、女性社會壓力增大及受生育率下降的影響,該病的發(fā)病率逐年增高,近年來已引起普遍關(guān)注[1]。目前臨床上對乳腺增生病還沒有一種適用性廣且療效肯定的治療藥物或方案[2]。中醫(yī)藥治療乳腺增生病有其獨(dú)到之處。安乳消痛丸為院內(nèi)中藥制劑,多年來臨床用于治療乳痛癥和乳腺增生癥。筆者對安乳消痛丸干預(yù)大鼠乳腺增生模型進(jìn)行了藥效學(xué)研究,為其臨床使用提供動物實(shí)驗(yàn)和組織病理學(xué)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1實(shí)驗(yàn)動物S D大鼠,雌性,清潔級,體質(zhì)量190~200 g,購自蘭州生物制品研究所實(shí)驗(yàn)動物中心,合格證號:醫(yī)動字第14-001。

        1.2藥品及試劑苯甲酸雌二醇注射液(天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字H12020534)、黃體酮注射液(天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字H12020529);乳康片(安康正大制藥有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字Z20003227);安乳消痛丸(甘肅省腫瘤醫(yī)院院內(nèi)中藥制劑,甘藥制字Z20140008);生理鹽水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字H51021157);人血清雌二醇(E2)、孕酮(P)放射免疫試劑盒(均由深圳拉爾文生物工程有限公司提供)。

        1.3方法

        1.3.1乳腺增生模型的建立成年雌性未孕S D大鼠60只,體質(zhì)量190~200 g,正常飼養(yǎng)5天后,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為安乳消痛丸高、中、低劑量組,乳康片組,模型對照組,空白對照組,每組10只??瞻讓φ战M肌肉注射等量生理鹽水,其他各組大鼠肌肉注射雌二醇0.5mg/(k g·d)共25天后注射黃體酮5mg/(k g·d)共5天。實(shí)驗(yàn)第31天從模型對照組和空白對照組隨機(jī)抽取實(shí)驗(yàn)大鼠各3只,行組織病理學(xué)檢查,如顯示模型組大鼠乳腺導(dǎo)管及腺泡增生,則提示造模成功。

        1.3.2給藥造模成功后開始灌胃給藥??瞻讓φ战M給予蒸餾水灌胃,20mL/k g,1次/d,連續(xù)25天。模型對照組給予蒸餾水灌胃,20mL/k g,1次/d,連續(xù)25天。安乳消痛丸低、中、高劑量組分別給予安乳消痛丸低(2.5mL/k g)、中(5.1 mL/k g)、高(7.7 g/k g)劑量,20mL/k g,1次/d,連續(xù)25天。

        1.3.3樣本采取各組大鼠于末次給藥后禁食10小時(shí),先稱取大鼠體質(zhì)量并記錄,然后按照體質(zhì)量腹腔注射戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉,股動脈采血,離心保存,待后期采用放射免疫法測定大鼠血清E2、P水平;最后脫臼法處死大鼠,用打孔器于第2~3對乳房中心對大鼠乳腺腺體組織進(jìn)行取材,電子天平稱重后用中性甲醛溶液固定,石蠟包埋、切片、染色。光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠乳腺組織形態(tài)學(xué)變化,每例樣本隨機(jī)選取5個(gè)視野,取乳腺小葉數(shù)量及腺腔直徑平均值計(jì)數(shù),按半定量分級標(biāo)準(zhǔn)比較分析,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

        1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用S P SS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,多組比較行單因素方差分析,方差齊性時(shí)用L S D檢驗(yàn),方差不齊用D unn et t′s T3檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1體質(zhì)量和乳腺肉眼形態(tài)自造模起,體質(zhì)量隨時(shí)間延長而逐步降低,至造模結(jié)束時(shí),大多數(shù)大鼠體質(zhì)量未恢復(fù)至造模前;肉眼觀察大多數(shù)大鼠乳腺增大、發(fā)育,乳頭紅腫,觸之較韌,部分伴有乳暈形成。給予安乳消痛丸治療后,各劑量組大鼠乳頭紅腫減輕,觸之較軟,增生狀態(tài)減輕。而模型對照組乳頭無明顯變化??瞻讓φ战M大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),體質(zhì)量增加,未見明顯增生。

        2.2血清E2、P水平與空白對照組相比,模型對照組的E2水平明顯升高、P水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。安乳消痛丸各劑量組及乳康片組血清E2水平不同程度降低,P水平不同程度升高。安乳消痛丸降低E2及升高P的作用具有劑量依賴性,隨著藥物劑量的增加,其降低或升高的程度逐漸增強(qiáng),與模型對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        2.3乳房質(zhì)量與空白對照組比較,模型對照組大鼠第2、3對乳房質(zhì)量均顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組比較,安乳消痛丸低、中、高劑量組均可降低乳腺增生大鼠第2、3對乳房的質(zhì)量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),隨著劑量的增加其降低程度增強(qiáng),與模型對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

        表1 各組乳腺增生模型大鼠激素水平比較(±s)

        表1 各組乳腺增生模型大鼠激素水平比較(±s)

        注:與模型對照組比較,*表示P<0.05,**表示P<0.01;與正常對照組比較,#表示P<0.05,##表示P<0.01。

        表2 各組乳腺增生模型大鼠乳房質(zhì)量比較(±s)

        表2 各組乳腺增生模型大鼠乳房質(zhì)量比較(±s)

        注:與模型對照組比較,*表示P<0.05,**表示P<0.01;與正常對照組比較,#表示P<0.05,##表示P<0.01。

        2.4乳腺病理學(xué)空白對照組大鼠乳腺導(dǎo)管、小葉、腺泡鏡下組織結(jié)構(gòu)基本正常,腺體未見明顯增生。模型對照組大鼠乳腺部分小導(dǎo)管擴(kuò)張,導(dǎo)管壁略有增厚,周圍纖維組織增生明顯,細(xì)胞較為活躍,間質(zhì)有少量以小淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤;乳腺小葉單位數(shù)目增多密集,小葉形態(tài)欠規(guī)則,鏡下顯示相互靠近,較為擁擠;乳腺腺泡大小不等,數(shù)目增多,形態(tài)不規(guī)則,甚至變形,部分結(jié)構(gòu)混亂,可見融合傾向,腺泡內(nèi)有粉色滲出物。安乳消痛丸各劑量組、乳康片組大鼠增生程度均有減輕,其中安乳消痛丸高、中劑量組與與模型對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3—4及圖1—6。

        表3 各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅰ(±s)

        表3 各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅰ(±s)

        注:與空白對照組比較,##表示P<0.01;與模型對照組比較,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

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        表4 200 HPF下各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅱ(±s)

        表4 200 HPF下各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅱ(±s)

        注:與空白對照組比較,##表示P<0.01;與模型對照組比較,*表示P<0.05,**表示P<0.01。

        組別 只數(shù) 劑量/(g·kg-1) 乳腺小葉數(shù)/個(gè) 腺腔直徑/mm左側(cè) 右側(cè) 左側(cè) 右側(cè)空白對照組 10 - 16.13±4.78 16.94±4.18 0.31±0.14 0.30±0.16模型對照組 10 - 26.03±2.46## 25.68±2.36## 0.99±0.17## 1.00±0.18##乳康片組 10 0.675 15.00±4.08** 15.06±3.26** 0.67±0.26* 0.65±0.24*安乳消痛丸高劑量組 10 7.700 15.40±4.50** 13.90±3.38** 0.41±0.16**0.41±0.17**安乳消痛丸中劑量組 10 5.100 16.00±4.89** 16.00±4.89** 0.76±0.18* 0.73±0.17*安乳消痛丸低劑量組 10 2.500 23.11±1.91 23.00±3.62 0.81±0.24 0.80±0.26

        圖1 HE染色10×40空白對照組 

        圖2 HE染色10×40模型對照組

        圖3 HE染色10×40乳康片組

        圖4 HE染色10×40 安乳消痛丸大劑量組 

        圖5 HE染色10×40安乳消痛丸中劑量組

        圖6 HE染色10×40安乳消痛丸小劑量組

        3 討論

        雌激素和孕激素在維持女性第二性征和內(nèi)分泌功能穩(wěn)定方面具有重要作用,乳腺是女性性激素的重要靶器官之一,雌激素的生理作用為刺激乳腺導(dǎo)管和小葉增生,同時(shí)促進(jìn)組織水、鈉潴留,進(jìn)一步引起小葉間質(zhì)水腫,乳腺增生病的發(fā)生與體內(nèi)E2水平失衡,同時(shí)P的拮抗作用不足有明顯關(guān)系。

        中醫(yī)藥在治療乳腺增生病方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢,通常通過直接或間接降低體內(nèi)雌激素的水平和作用來發(fā)揮治療作用[4]。安乳消痛丸是中藥制劑,主要由柴胡、當(dāng)歸、白芍、仙茅、淫羊藿、巴戟天、川芎等組成。當(dāng)歸補(bǔ)血活血,調(diào)經(jīng)止痛;白芍養(yǎng)血斂陰,柔肝止痛;仙茅行血消腫;川芎活血止痛;柴胡和巴戟天用于月經(jīng)不調(diào)[5]。諸藥合用具有明顯的止痛和抗乳腺增生作用。

        在本實(shí)驗(yàn)中,乳腺增生大鼠經(jīng)安乳消痛丸治療后,血清E2水平降低,乳腺腺泡數(shù)目減少,部分腺泡出現(xiàn)萎縮現(xiàn)象,導(dǎo)管擴(kuò)張程度減輕,部分乳腺已恢復(fù)到正常狀態(tài)。隨著安乳消痛丸給藥劑量逐漸增加,E2逐漸降低、P水平逐漸升高,該結(jié)果提示安乳消痛丸能夠影響模型大鼠E2、P水平,且存在量效關(guān)系,這可能是安乳消痛丸治療乳腺增生病的主要機(jī)理[6]。此外組織病理結(jié)果也顯示,安乳消痛丸對乳腺增生有良好的治療作用。但其在人體中的抗增生機(jī)理和血清學(xué)變化還有待于進(jìn)一步臨床研究明確。

        [1] 王玉蘭.健康知識教育聯(lián)合生活習(xí)慣護(hù)理在體檢發(fā)現(xiàn)乳腺增生患者護(hù)理中的應(yīng)用價(jià)值[J].西部中醫(yī)藥,2014,27(2):122-123.

        [2] 張春霞,李曉琴,孫亮,等.平衡針刺配合桂枝茯苓丸治療乳腺囊性增生療效觀察[J].西部中醫(yī)藥,2013,26(8):111-113.

        [3] 王燦,苗明三.乳絡(luò)通膠囊對大鼠乳腺增生模型的影響[J].中藥藥理與臨床,2014,30(2):128-130.

        [4] 姚艷飛,路秀麗,王莘.蛹蟲草菌絲體多糖對小鼠乳腺增生模型的影響[J].中草藥,2011,42(9):1796-1798.

        [5] 劉鴻雁,張櫻山,陳德道,等.HPLC法測定二十五味珍珠丸中3種成分[J].中成藥,2013,35(8):1689-1692.

        [6] 阮詩蘭,周勝利,金鶴.中醫(yī)藥治療乳腺增生的研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥,2011,15(12):1593-1595.

        Effectsof AnRu XiaoTong Pillson the RatM odelw ith M amm ary G land H yperp lasia

        ZHOU Chaohui1,LIU Hongyan2,AN Xiaofang1,JIA Zhong2,QIAO Xiaojian1,JIANG Zhuanji3△
        1 TianshuiMunicipality Integrative Medicine Hospital,Tianshui741020,China;2 Lanzhou Municipal Lung Hospital;3 Gansu Provincial Cancer Hospital

        Objective:To study the influence of AnRu XiaoTong pillson the levelsof estrogen(E2)and progesterone(P),histopathologicalmorphology and themorphology of hyperplasticmammary gland in the naked eye examination of the rats.Methods:Ratmodelsw ith hyperplasiawere prepared,blank controlgroup:intragastric administration of distilled water,20m L/kg,once each day,for 25 consecutive days.Model control group:intragastric adm inistration of distilled water,20 m L/kg,once each day,for 25 consecutive days.High,moderate and low doses groups of AnRu XiaoTong pillswere given w ith AnRu XiaoTong pills in low(2.5 g/kg),moderate(5.1g/kg)and high (7.7 g/kg),20m L/kg,once each day,for25 consecutive days.Results:Compared w ith blank controlgroup,the contents of E2in the serum of the rats notably increased,and the contents of P significantly decreased in themodel group,the contents of E2lowered and the contentsof P increased in different doses groups of AnRu XiaoTong pills (P<0.05);AnRu XiaoTong pills could relieve nipple swelling of the rats,decrease theweightofmammary tissue;it could reduce the numbersofmammary gland lobules andmammary acini,decrease the heightof aciniepithelia and reduce acinidiameter.Conclusion:AnRu XiaoTong pills are effective in treatingmammary gland hyperplasia of the ratsby regulating the levelsof sex hormone of the ratsand improving pathological changesofmammary glands.Its mechanism mightbe realized through decreasing the contents of E2and raising the contents of P to adjust relative balance between E2and P.

        AnRu XiaoTong pills;sex hormone;mammary gland hyperplasia;animalexperiment;the rats

        R285.5

        A

        1004-6852(2016)04-0026-04

        2015-10-04

        周朝暉(1979—),男,副主任醫(yī)師。研究方向:乳腺疾病的臨床診治。

        姜?;?978—),男,副主任醫(yī)師。研究方向:乳腺腫瘤。

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