趙美盈

（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青海　西寧810000）

副豬嗜血桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

趙美盈

（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青海西寧810000）

近些年，由副豬嗜血桿菌引起的豬多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎及腦膜炎在我縣時有發(fā)生，給養(yǎng)豬場造成極大經濟損失。為此，筆者結合生產實踐，對患有多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎及腦膜炎的病豬進行了致病菌的分離鑒定，同時通過藥敏試驗進行了耐藥性分析，以指導臨床合理用藥。

1　材料與方法

1.1病料采集

病料均來自我縣多個患有多發(fā)性漿膜炎、纖維素性關節(jié)炎及腦膜炎的豬場。

1.2細菌分離培養(yǎng)

無菌采集患病豬只的腦組織、關節(jié)液、心血、心包液、胸腹腔積液、胸膜、肺臟和鼻腔等作為病料，分別接種在含煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）平板，置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h后對菌落形態(tài)進行觀察，將較為典型的菌落挑選出來進行純培養(yǎng)。

1.3分離菌株革蘭染色鏡檢

將上述純培養(yǎng)菌落挑取出進行涂片和革蘭氏染色，通過鏡檢對細菌形態(tài)特征進行觀察。

1.4生化鑒定

將純培養(yǎng)菌落接種在麥芽糖、果糖、核糖、葡萄糖、硝酸鹽還原、接觸酶、氧化酶以及脲酶等微量生化鑒定管，根據(jù)說明書操作并觀察結果。

1.5藥敏試驗

挑取分離菌株，在含NAD鮮血瓊脂平板或TSA平板均勻劃線，采用無菌鑷子將相關的抗菌紙片貼在平板上，放在37℃恒溫箱培養(yǎng)24h后通過游標卡尺測量抑菌圈直徑。（判斷標準如下：抑菌圈直徑大于15mm為高度敏感；抑菌圈直徑在10～15mm為中度敏感；抑菌圈直徑小于10mm為不敏感）

2　結果分析

2.1通過細菌分離培養(yǎng)可見無色透明、直徑約1～2mm以及圓形光滑的菌落形態(tài)。

2.2將分離菌株染色鏡檢可見革蘭氏陰性細小桿菌，具有多形態(tài)性，多呈纖細桿狀，個別呈球桿狀（兩極染色），間有長而彎曲的絲狀菌體。

2.3分離菌株生化鑒定結果為硝酸鹽還原試驗陽性、接觸酶試驗陽性、氧化酶試驗陰性、脲酶試驗陰性，并發(fā)酵麥芽糖、果糖、核糖、葡萄糖等碳水化合物，同副豬嗜血桿菌的生化特性相符合。

2.4藥敏試驗結果：將分離到的13株副豬嗜血桿菌進行藥敏試驗。具體結果詳見表1。

表1　副豬嗜血桿菌的藥敏試驗結果（株）

通過表1可看出，13株副豬嗜血桿菌大多數(shù)對環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、先鋒霉素V、頭孢噻肟具有較高的敏感性，而對丁胺卡那霉素、卡那霉素、四環(huán)素、鏈霉素、復方新諾明、甲氧芐胺嘧啶不敏感，呈現(xiàn)嚴重的耐藥性。

3　小結與討論

3.1對患有多發(fā)性漿膜炎、纖維素關節(jié)炎及腦膜炎的病豬進行細菌分離和鑒定，確定為副豬嗜血桿菌，總共分離出13株副豬嗜血桿菌，對這13株副豬嗜血桿菌進行藥敏試驗，結果表明，對環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、先鋒霉素V、頭孢噻肟具有較高的敏感性，特別是對先鋒霉素V和頭孢噻肟高度敏感；對丁胺卡那霉素、卡那霉素、四環(huán)素、鏈霉素、復方新諾明、甲氧芐胺嘧啶有耐藥性。

3.2鑒于我縣不同豬場使用的抗菌藥物不一，加之分離出的菌株對同一藥物的敏感性亦有所差異，臨床上治療用藥時最好在藥敏試驗下指導進行，避免盲目用藥。

3.3豬場長期大量使用抗菌藥，會增多耐藥菌株，加重藥物殘留，影響食品安全。生產中防控副豬嗜血桿菌病的理想措施是疫苗免疫。采用副豬嗜血桿菌菌苗，不論豬只大小，按肌注2mL/頭：仔豬于14日齡首免，35日齡二免；初產母豬于產前8～9周首免，產前4～5周二免；經產母豬于產前4～5周免疫一次；種公豬每6個月免疫一次。

從略）

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.06.012