王淑玲，倪　輝，蘇　梅，周玉香，李敬芝，何　楊（江蘇柯菲平醫(yī)藥股份有限公司，江蘇南京210016）

HPLC法測定注射用雷貝拉唑鈉含量

王淑玲，倪輝，蘇梅，周玉香，李敬芝，何楊（江蘇柯菲平醫(yī)藥股份有限公司，江蘇南京210016）

目的建立一種高效液相色譜（HPLC）法，測定注射用雷貝拉唑鈉的含量。方法采用HPLC法，以0.01mol/L磷酸氫二鉀緩沖液（pH 7.0）-甲醇（53∶47）作為流動相，檢測波長為284 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為25℃，測定注射用雷貝拉唑鈉的含量。結(jié)果雷貝拉唑鈉濃度在19.968～199.680 μg/mL時線性關(guān)系良好［Y=21.803 5X-17.373 4，相關(guān)系數(shù)（r）=1.000 0］，注射用雷貝拉唑鈉高、中、低3種濃度平均回收率（n=9）為99.9%［相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.08%］，中間精密度試驗的RSD為0.30%（n=6），重復(fù)性和耐用性良好。HPLC法測得3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量分別為101.3%、99.7%、100.1%。結(jié)論HPLC法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，可作為注射用雷貝拉唑鈉含量的檢驗方法。

苯咪唑類；藥用制劑；色譜法，高壓液相；質(zhì)量控制；雷貝拉唑鈉

雷貝拉唑鈉為苯并咪唑類化合物［1-3］，是日本衛(wèi)材公司發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的質(zhì)子泵抑制劑［4］，1997年在日本首先上市，1999年在美國和瑞典上市。雷貝拉唑鈉與第一代質(zhì)子泵抑制劑相比具有明顯的優(yōu)點［5-9］。注射用雷貝拉唑鈉由印度Eisai公司開發(fā)，于2004年5月在印度上市［10］，批準(zhǔn)適應(yīng)證為不適合口服雷貝拉唑的患者。注射用雷貝拉唑鈉可以用于：（1）口服雷貝拉唑的序貫性療法，如以前口服本品，現(xiàn)在由于某種原因不能口服的患者；（2）出血性或糜爛性活動性十二指腸潰瘍；（3）出血性或糜爛性活動性胃潰瘍；（4）腐蝕性和潰瘍性胃食管反流?。℅ERD）的短期治療；（5）預(yù)防酸增多；（6）重癥黏膜損傷的急性治療；（7）卓-艾氏（Zollinger-Ellison）綜合征。本文旨在建立一種高效液相色譜（HPLC）法，以測定注射用雷貝拉唑鈉的含量。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器Agilent1260液相色譜儀（安捷倫公司，VWD紫外檢測器）；XS105、XS3DU型電子天平（梅特勒-托利多公司）；PHS-3C pH計（雷磁-上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）。儀器1：Agilent-1260（紫外檢測器，工作站：OpenLAB）；儀器2：島津LC-20AVP（泵LC-20AT，檢測器SPD-20A，工作站：LCSolution）。

1.1.2試劑雷貝拉唑鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100658-201203，含量：100%）；注射用雷貝拉唑鈉（自制，批號：S28-140101、S28-140102、S28-140103）；雷貝拉唑鈉（自制，批號：RL-131201）；甲醇為色譜純；水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1色譜條件［11-12］色譜柱：AgilentExtend-C18150.0mm× 4.6 mm，3.5 μm（安捷倫公司）；色譜柱1、2、3分別為不同批號的Agilent Extend-C18柱。以0.01 mol/L磷酸氫二鉀緩沖液（調(diào)節(jié)pH值至7.0）-甲醇（53∶47）為流動相；檢測波長為284nm；流速為1.0mL/min；柱溫為25℃。

1.2.2溶液的配制

1.2.2.1系統(tǒng)適用性溶液取雷貝拉唑鈉與雜質(zhì)D（過氧化物砜）適量，用溶劑［0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-甲醇（1∶1）］溶解并稀釋制成每毫升約含雷貝拉唑鈉100 μg，至少含雜質(zhì)D 1 μg的混合溶液。

1.2.2.2對照品溶液雷貝拉唑鈉對照品適量，精密稱定，定量稀釋制成每毫升約含100 μg的溶液。

1.2.2.3供試品溶液取本品5瓶，將其內(nèi)容物混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于雷貝拉唑鈉2 mg），置于20 mL容量瓶中，加溶劑［0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-甲醇（1∶1）］溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.2.2.4空白對照溶液取除雷貝拉唑鈉外其他組分，按處方工藝制成空白樣品，按1.2.2.3項下方法制成空白對照溶液。

1.2.3波長選擇稱取雷貝拉唑鈉對照品及本品適量，分別用溶劑溶解并稀釋制成約20 μg/mL溶液，根據(jù)《中華人民共和國藥典》紫外-可見分光光度法［13］附錄23，掃描范圍200～400 nm，掃描間隔為0.2 nm，同法對空白溶劑進行掃描，記錄最大吸收波長。

1.2.4系統(tǒng)適用性試驗精密量取1.2.2.1項下的系統(tǒng)適用性溶液20 μL，注入液相色譜儀，考察理論板數(shù)、分離度。精密量取系統(tǒng)適用性溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論塔板數(shù)按雷貝拉唑鈉計算應(yīng)不低于2 000，雷貝拉唑與雜質(zhì)D峰分離度應(yīng)不小于1.5。

1.2.5空白干擾專屬性試驗取1.2.2.1項下的系統(tǒng)適用性溶液，分別取溶劑及空白輔料溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.6線性與范圍［14］取雷貝拉唑鈉對照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成每毫升約含雷貝拉唑鈉1 mg的溶液作為貯備液，分別精密量取貯備液1、2、4、5、6、10 mL置50 mL容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻得線性溶液1、2、3、4、5、6。在1.2.1色譜條件下，精密量取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀（儀器1），記錄色譜圖。以雷貝拉唑鈉濃度為X軸、峰面積為Y軸進行回歸計算，繪制回歸曲線，得出回歸方程。

1.2.7進樣精密度取1.2.6項下的溶液4作為對照品溶液，連續(xù)進樣6針，計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），測定進樣精密度。

1.2.8準(zhǔn)確度試驗［14］按處方量（規(guī)格：10 mg）的80%（低）、100%（中）、120%（高）分別精密稱取3個濃度梯度的雷貝拉唑鈉（批號：100658-201203）和空白輔料（相當(dāng)于處方量100%的雷貝拉唑鈉），混勻。精密稱定3個濃度梯度的混合樣品各3份，分別相當(dāng)于雷貝拉唑鈉原料約8、10、12 mg，按含量測定方法進行測定，按外標(biāo)法以峰面積計算回收率。

1.2.9精密度試驗

1.2.9.1重復(fù)性試驗按1.2.2.3項下方法制備供試品溶液。同法操作6份。同時，制備雷貝拉唑鈉對照品溶液。精密量取上述溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.9.2中間精密度試驗按含量測定方法，由不同分析人員在不同時間分別測定的含量，考察隨機變動因素對精密度的影響。

1.2.10樣品溶液穩(wěn)定性取1.2.9.2項下的供試品溶液，于4℃放置33.0 h，分別于放置0.0、6.0、10.5、15.0、18.5、24.0、33.0 h 7個時間點各進樣10 μL，記錄色譜圖，計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），以測定對照品溶液的放置穩(wěn)定性。

1.2.11濾膜吸附試驗（1）供試品貯備液配制：取本品適量（約相當(dāng)于雷貝拉唑鈉2 mg），精密稱定，置20mL容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。（2）供試品溶液1：取供試品貯備液10 mL，離心，取上清液即得。供試品溶液2：取供試品貯備液濾過，棄去初濾液2 mL，取續(xù)濾液即得。供試品溶液3：取供試品貯備液濾過，棄去初濾液5 mL，取續(xù)濾液即得。（3）測定方法：精密量取供試品溶液1，供試品溶液2和供試品溶液3各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算含量RSD，考察濾膜吸附對測定結(jié)果的影響。

1.2.12耐用性試驗［13］附錄194為考察測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，對含量測定方法進行系統(tǒng)耐用性試驗。考察的變動因素有：流動相比例、流速、柱溫、流動相pH、波長、色譜柱等。標(biāo)準(zhǔn)方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（如Agilent Extend-C18色譜柱，150.0mm×4.6mm，5.0μm）；以0.01 mol/L的磷酸氫二鉀緩沖液（pH 7.0）-甲醇（53∶47）為流動相；流速1.0 mL/min；柱溫35℃；檢測波長284 nm。分別取1.2.2.3項下供試品溶液和1.2.2.2項下對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.13樣品檢測取不同批號的樣品，分別按1.2.2.3項下方法制成供試品溶液，精密量取上述溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測定3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量。

2　結(jié)　果

2.1波長選擇結(jié)果對照品及本品在（284±2）nm均有較強吸收，空白溶劑無干擾，故選擇284 nm作為雷貝拉唑鈉含量測定波長。見表1。

表1　檢測波長選擇結(jié)果

2.2系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果雷貝拉唑鈉理論塔板數(shù)為8 733，分離度為8.88。試驗結(jié)果表明該色譜條件良好，可以作為雷貝拉唑鈉含量測定的色譜條件。

2.3空白干擾專屬性試驗空白干擾專屬性試驗結(jié)果表明空白溶劑、空白輔料對本品含量測定無干擾。

2.4線性與范圍試驗結(jié)果線性方程：Y=21.803 5X-17.373 4，相關(guān)系數(shù)（r）=1.000 0，雷貝拉唑鈉在19.968～199.680μg/mL時與其峰面積呈線性關(guān)系。見表2、圖1。

表2　線性與范圍試驗結(jié)果

圖1　含量測定線性關(guān)系

2.5進樣精密度結(jié)果采用HPLC法，連續(xù)進樣6次，RSD為0.10%，小于2.00%，儀器進樣精密度良好。見表3。

表3　進樣精密度結(jié)果

2.6準(zhǔn)確度試驗結(jié)果HPLC法含量的平均回收率為99.9%，RSD為0.08%，表明該法的準(zhǔn)確度高、可靠性好。見表4。

表4　含量測定回收率試驗結(jié)果（n=9）

2.7精密度試驗

2.7.1HPLC法重復(fù)性試驗結(jié)果采用HPLC法測定雷貝拉唑鈉的含量，RSD為0.35%，重復(fù)性較好。見表5。

表5　HPLC法重復(fù)性試驗結(jié)果（n=6）

2.7.2中間精密度試驗結(jié)果測定結(jié)果的RSD為0.30%，中間精密度較好。見表6。

表6　中間精密度試驗結(jié)果

2.8樣品溶液穩(wěn)定性結(jié)果注射用雷貝拉唑鈉溶液于4℃放置33.0 h峰面積的RSD為1.01%，溶液在4℃33.0 h內(nèi)穩(wěn)定。見表7。

表7　樣品溶液的放置穩(wěn)定性

2.9濾膜吸附試驗結(jié)果供試品溶液未經(jīng)濾膜濾過與經(jīng)濾膜濾過含量RSD為0.24%，無明顯變化，濾膜吸附量可忽略不計，不影響本品含量的測定。見表8。

表8　濾膜吸附試驗結(jié)果

2.10系統(tǒng)耐用性試驗流動相比例、流速、柱溫、流動相pH、波長、色譜柱等因素的微小變化均可引起保留時間的改變，但不同條件下主峰分離度均大于1.5，同條件下含量測定結(jié)果平均值為101.5%，RSD為0.55%，不同條件下含量測定結(jié)果未見明顯變化，說明色譜條件的微小變化，對本品含量的測定影響不大。不同條件下樣品含量測定結(jié)果見表9。

表9　耐用性試驗結(jié)果

續(xù)表9　耐用性試驗結(jié)果

2.11樣品測定HPLC法測得3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量分別為101.3%、99.7%、100.1%。

3　討　論

本研究建立了一種采用HPLC法測定注射用雷貝拉唑鈉含量的方法，雷貝拉唑鈉的濃度在19.968～199.680 μg/mL時線性關(guān)系良好（Y=21.803 5X-17.3734，r=1.000 0），注射用雷貝拉唑鈉低、中、高3種濃度平均回收率（n=9）為99.9%（RSD=0.08%），中間精密度試驗RSD=0.30%（n=6），重復(fù)性和耐用性良好；HPLC法測得3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量分別為101.3%、99.7%、100.1%。HPLC法準(zhǔn)確度高、方便快捷，能有效控制該品種的質(zhì)量，可作為注射用雷貝拉唑鈉含量的檢驗方法。根據(jù)實測3批樣品含量測定結(jié)果，并考慮實際生產(chǎn)的復(fù)雜性，將注射用雷貝拉唑鈉含量測定標(biāo)準(zhǔn)暫定為雷貝拉唑鈉含量應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105.0%。

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ContentdeterminationofRabeprazoleSodiumforInjectionbyHPLC

WangShuling，NiHui，SuMei，ZhouYuxiang，Li Jingzhi，He Yang（Jiangsu Carephar Pharmaceutical Scientific and Technology Co.，Ltd.，Nanjing，Jiangsu 210016，China）

ObjectiveTo establish a HPLC method for the content determination of Rabeprazole Sodium for Injection. MethodsThe high-performance liquid chromatography（HPLC）was adopted with 0.01 mol/L dipotassium hydrogen phosphate buffer solution（pH7.0）-methanol（53∶47）as the mobile phase，the detection wave length was 284 nm，the flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was 25℃.The content of Rabeprazole Sodium for Injection was detected.ResultsThe rabeprazole sodi um concentration in the range of 19.968-199.680 μg/mL has a good linear relationship（Y=21.803 5X-17.373 4，r=1.000 0），the average recovery rates of high，middle and low concentrations（n=9）were 99.9%［relative standard deviation（RSD）=0.08%］；the intermediate precision RSD was 0.30%（n=6），the repeatability and durability were good.The contents of 3 batches of Rabeprazole Sodium for Injection（S28-140101，S28-140102，S28-140103）detected by HPLC were 101.3%，99.7%and 100.1%respectively. ConclusionThe establishedHPLC method is simple，sensitive and accurate，which is suitable for the content determination of Rabeprazole Sodium for Injection.

Benzimidazoles；Pharmaceutical preparations；Chromatography，high pressure liquid；Quality control；Rabeprazole Sodium

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.15.011

A

1009-5519（2016）15-2306-04

王淑玲（1983-），主要從事藥物分析方面的工作。

（2016-04-11）