劉敏杰　劉柱明

摘要：以雙色茉莉嫩枝莖段為外植體，采用不同的滅菌處理，不同的誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)基，進(jìn)行最佳培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)程序的研究。結(jié)果表明：滅菌處理以75%乙醇浸泡10s后，再在O.1%升汞溶液中浸泡3min為最佳；腋芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基是MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；誘導(dǎo)生根的適宜培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭；試管苗移栽基質(zhì)以蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份成活率最高，可達(dá)95%。

關(guān)鍵詞：雙色茉莉；滅菌方法；組織快繁；培養(yǎng)基

雙色茉莉又名鴛鴦茉莉，是茄科常綠矮灌木?；ǘ涑蹰_(kāi)為藍(lán)紫色，漸變?yōu)檠┣嗌詈笞優(yōu)榘咨?，由于在同株上能同時(shí)見(jiàn)到藍(lán)紫色和白色的花，故名雙色茉莉。其花期長(zhǎng)，花香濃郁，盆栽可點(diǎn)綴庭院和居室，片植色彩斑斕，具有廣闊的市場(chǎng)前景。目前雙色茉莉多采用扦插和壓條的方法繁殖，但該方法容易攜帶病毒，使植株生長(zhǎng)不良，且繁殖系數(shù)小，成苗慢。利用組培技術(shù)可以?xún)?yōu)質(zhì)、快速地生產(chǎn)大量的雙色茉莉苗來(lái)滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。

1 材料與方法

1.1 材料

2014年4月22號(hào)在信陽(yáng)綠欣花市購(gòu)買(mǎi)的2～3年生雙色茉莉盆栽。從生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害的新生嫩枝上剪取帶頂芽或腋芽的莖段，作為外植體培養(yǎng)材料。

1.2 方法

1.2.1 外植體的滅菌。剪去外植體莖段葉片，留葉柄基部，先用自來(lái)水沖洗3 min，再用洗潔精漂洗5 min，后用流水沖洗30 min。將清洗干凈的莖段放在燒杯中轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)。然后用75%乙醇浸泡10、20s做表面消毒，無(wú)菌水沖洗4次，再移入0.1%的升汞溶液中，分別浸泡1、3、5min。后用無(wú)菌水浸泡2 min，并沖洗3次，用滅菌濾紙吸干水分備用。將滅菌好的外植體用解剖刀切成1cm大小的莖段，接種到初代培養(yǎng)基上，初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L。每個(gè)處理分別接種10瓶，每瓶接種3個(gè)外植體。定期觀察并記錄外植體污染情況和外植體成活率。

1.2.2 腋芽誘導(dǎo)。以滅菌效果最佳的處理進(jìn)行外植體滅菌，切取帶腋芽的莖段1cm大小，接種到下列培養(yǎng)基中：A₁：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L；A₂：MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；A₃：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA0.1mg/L；A₄：MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L；A₅：MS+6-BA 2.5mg/L+NAA 0.1mg/L；A₆：MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.1 mg/L。每種處理接種10瓶，每瓶接種3個(gè)外植體，定期觀察芽的誘導(dǎo)情況。

1.2.3 繼代培養(yǎng)。將誘導(dǎo)出的芽叢，轉(zhuǎn)接于MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

1.2.4 生根培養(yǎng)。選取2cm以上，有3片完整葉片的無(wú)根苗轉(zhuǎn)接到下列培養(yǎng)基中培養(yǎng)生根：B₁：1/2 Ms；B₂：1/2MS+NAA 0.5mg/L；B₃：1/2MS+NAA 1.0mg/L；B₄：1/2MS+NAA 2.0mg/L；B₅：1/2 MS+NAA 3.0mg/L，并在B₃、B₄、B₅培養(yǎng)基中各添加濃度為0.2%的活性炭。每種處理接種10瓶，每瓶接種3株，20d后，統(tǒng)計(jì)生根率。

以上MS培養(yǎng)基中蔗糖含量為30g/L，1/2 MS培養(yǎng)基中蔗糖含量為20g/L，瓊脂含量均為8g/L，pH值5.8。培養(yǎng)溫度：25±2℃，光照強(qiáng)度：1500～2000Lx，光照時(shí)間：12～14h/d。

1.3 馴化移栽

當(dāng)試管苗長(zhǎng)至3～4cm高，根長(zhǎng)1cm以上時(shí)，打開(kāi)瓶口煉苗5～7d。將經(jīng)過(guò)鍛煉的試管苗輕輕取出，用自來(lái)水沖洗掉根部的培養(yǎng)基，分別栽植于下列基質(zhì)中：C₁：蛭石；C₂：珍珠巖；C₃：細(xì)沙；C₄：園土；C₅：蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份，蓋上塑料薄膜，溫度控制在25%左右，保證80%以上的相對(duì)濕度。30d后，統(tǒng)計(jì)移栽苗成活率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同滅菌方法的滅菌效果

20d后的觀察顯示（表1），延長(zhǎng)乙醇浸泡時(shí)間，對(duì)降低外植體污染率效果不明顯，而增加升汞浸泡時(shí)間，明顯減少了外植體的污染率。但是過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的升汞接觸外植體，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)外植體皺縮，失去萌動(dòng)力，后期褐化率也明顯增加。這可能因汞離子具有很強(qiáng)的殺傷力和穿透力，容易殺死或損傷植物細(xì)胞，造成外植體成活率低，因此在控制污染發(fā)生的過(guò)程中，用升汞做滅菌處理的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，控制在3min左右為宜。

2.2 不同培養(yǎng)基激素組合對(duì)腋芽誘導(dǎo)的影響

外植體培養(yǎng)5～7天，莖段基部開(kāi)始膨大，產(chǎn)生少量愈傷組織，腋芽也開(kāi)始萌動(dòng)。6種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)腋芽萌動(dòng)，但腋芽生長(zhǎng)情況有所差異（表2），在A₁、A₂、A₃培養(yǎng)基上腋芽萌動(dòng)時(shí)間早，但數(shù)量少，苗細(xì)弱。在A₄：MS+1.0mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基上，芽萌動(dòng)后直接分化叢生芽，苗健壯。A5、A6形成的叢芽時(shí)間短且數(shù)量多，但芽畸形、變異?？梢?jiàn)培養(yǎng)基的成分直接影響外植體的萌動(dòng)和分化。培養(yǎng)基的濃度不適合會(huì)導(dǎo)致新生芽矮小，還可能出現(xiàn)玻璃狀苗。

2.3 生根培養(yǎng)

在培養(yǎng)基中加入活性炭可以顯著促進(jìn)生根量和根的長(zhǎng)勢(shì)，這可能與活性炭對(duì)有害酚類(lèi)物質(zhì)的吸附有關(guān)，同時(shí)活性炭所造成的暗環(huán)境也可能有利于根的發(fā)生和發(fā)育。從表3可以看出，B₁、B₂的根徒長(zhǎng)且比較細(xì)弱，植株難以在移栽時(shí)正常生長(zhǎng)，B₃、B₄、B₅的生根率都達(dá)到100%，且生根時(shí)間短，根數(shù)多。但以B₃：1/2MS+NAA1.0mg/L+0.2%的活性炭，生根效果最好，根粗壯且有根毛，最適合移栽。

2.4 生根苗馴化移栽

從表4可以看出，雙色茉莉試管苗在所試5種栽培基質(zhì)上，移栽成活率都很高。其中基質(zhì)D₅的幼苗生長(zhǎng)健壯，葉色嫩綠，成活率高達(dá)95%。

3 小結(jié)

（1）在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，要盡量降低污染率，同時(shí)還要盡可能減少消毒劑對(duì)外植體的傷害。雙色茉莉外植體滅菌以75%的醇消毒10s，再配合0.1%的升汞溶液浸泡3min效果最好，可達(dá)80%。

（2）細(xì)胞分裂素6-BA能克服頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)側(cè)枝的萌發(fā)和生長(zhǎng)，因而，嫩芽的繁殖主要是細(xì)胞分裂素影響的結(jié)果。生長(zhǎng)素NAA最明顯的作用是促進(jìn)生長(zhǎng)，但其促進(jìn)作用因濃度而異，較低濃度促進(jìn)生長(zhǎng)，較高濃度抑制生長(zhǎng)。外源激素6-BA和NAA的不同濃度對(duì)芽的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)影響十分顯著。適宜芽誘導(dǎo)的初代培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L+NAA 0.1mg/L；幼苗的最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 1.0mg/L+0.2%的活性炭。試管苗移栽基質(zhì)以蛭石1份+珍珠巖1份+園土1份成活率最高，可達(dá)95%。

（3）通過(guò)組織培養(yǎng)可大大提高雙色茉莉的繁殖速率，且生長(zhǎng)健壯。

（收稿：2016-03-10）